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REV CUBANA PLANT MED 2004

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Plantas colombianas con actividad antimalárica

Pabón A., Saez J. y Silvia Blair T.

Grupo Malaria, Universidad de Antioquia, Colombia.

Introducción:
El Grupo Malaria de la Universidad de Antioquia, tiene entre sus líneas de investigación la búsqueda de antimaláricos a partir de plantas informadas por la medicina tradicional, esta línea pretende encontrar compuestos antimaláricos con gran actividad, biodirigidos por la etnobotánica y mediante la realización de rigurosos estudios botánicos, químicos y biológicos. Los estudios etnobotánicos se realizan a través de entrevistas a los curanderos para obtener información sobre el nombre de la planta que utilizan para el tratamiento de la malaria, modo de preparación, dosis, toxicidad y otros usos. Los ensayos biológicos se realizan mediante la evaluación de actividad in vitro con las cepas FCB-1, FCB-2 e ITG-2 de P. falciparum y la actividad in vivo se realiza en ratones albinos suizos infectados con P. berghei.

Resultados:
Hasta la fecha, el Grupo tiene información de 195 plantas que son utilizadas para el tratamiento de la malaria y sus síntomas y se han realizado ensayos de actividad antimalárica in vitro con los extractos acuosos de 63 de estas especies. Una de las plantas estudiadas por el Grupo Malaria es la Eupatorium inulaefolium, la cual mostró actividad antimalárica in vitro en la cepa FCB-2 de P. falciparum con valores de inhibición desde 0.057 ppm a 55 ppm con los extractos hexánico, diclorometano, metanólico, etanólico, dos fracciones y el compuesto neurolenina B. La actividad mutagénica de los extractos metanólico, diclorometano y etéreo obtenidos de esta planta fueron evaluados mediante el test de Ames y ninguno de los tres extractos resultó mutagénico.
La marcha fitoquímica de la planta Alternanthera lanceolata mostró taninos, alcaloides, flavonoides, glicósidos y esteroles. El extracto etanólico y dos fracciones presentaron actividad antimalárica.
Otra de las plantas que ha sido estudiada por el grupo fue la Citrus aurantifolia, la cual presentó gran actividad antimalárica en la cepa FCB-2 de P. falciparum con el extracto hexánico y las fracciones de hexano, acetato de etilo, diclorometano y metanol
Continuando con la búsqueda de nuevas alternativas terapéuticas, se evaluó la actividad antimalárica de la corteza de la planta Guatteria lehmannii y se encontró que el extracto que contenía una mezcla de alcaloides presentó una DE50 de 53.29 ppm
De Raimondia cf monoica se aisló el compuesto Argentilactona el cual mostró un porcentaje máximo de inhibición de 88% y las raíces de esta planta presentaron un porcentaje máximo de inhibición de 94 % ambos con 0.1 g/ml
Sobre la cepa ITG-2 de P. falciparum se evaluó la actividad antimalárica de los compuestos Diaboline, Cleistooholina y O-methylmoschaline ailslados de la planta Duguetia vallicola, los cuales presentaron un IC50 de 27.71, 3.67 y 4.41 g/ml respectivamente.
Solanum nudum, es una de las plantas más estudiadas por nosotros y de ella se aislaron dos sapogeninas esteroidales: 4-(25R), 16 , 26 dihidroxy, colestan, 3,22 diona (tumacona) y 4-(25R), espirostan, 3-ona (diosgenona). Esta última sapogenina se encontró en altas concentraciones y constituyó el primer reporte aislado en forma natural. La cantidad tan pequeña obtenida de la sapogenina 4-(25R), 16 , 26 dihidroxy, colestan, 3,22 diona, ha impedido llevar a cabo los bioensayos de actividad antimalárica. Tampoco se pudo realizar estos bioensayos con la diosgenona por inconvenientes de solubilidad. Para realizar los ensayos de actividad antimalárica in vitro de la diosgenona fue necesario abrir el anillo F por medio de una degradación con anhídrido acético y se obtuvo una mezcla de dos compuestos que llamamos Diosgenona degradada, compuestos 1 y 2, con un valor de IC50 de 21,8 M.
De esta planta también se identificaron cinco compuestos esteroidales presentes en los extractos hexánicos y metanólicos, los cuales presentaron como característica el sistema 4-en-3-ona similar a la progesterona. A estos compuestos esteroidales se les evaluó su actividad antimalárica in vitro en la cepa FCB-1 y FCB-2 y se obtuvieron valores de IC50 desde 21 M hasta 125,5 M y porcentajes de inhibición mayores que el control positivo cloroquina.
A uno de los compuestos esteroidales aislados de Solanum nudum y a la diosgenona degradada, igualmente se les ha realizado ensayos de actividad in vivo en ratones infectados con P. berguei con resultados positivos. Y se les ha evaluado su actividad mutagénica mediante pruebas in vitro como el test de Ames e in vivo como la inducción de micronúcleos en médula ósea de ratón, las cuales han dado resultados negativos. También se midió su actividad sobre hepatocitos HepG2A-16
Para continuar el estudio de los compuestos con actividad antimalárica aislados de las platas informadas por la Medicina Tradicional colombiana se evaluará su mecanismo de acción, la citotocixidad sobre células hepáticas, su actividad esquizonticidad tisular y su efecto sobre la permeabilidad en glóbulos rojos humanos.


Almidón extraído del Caryodendron orinocense K. propiedades funcionales

Alfaro M. J.1, Lares M.2, Padilla F.1 y Pérez E.3

1Unidad de Análisis de Alimentos, Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela (UCV). Caracas.E-mail: alfarom@camelot.rect.ucv.ve
2 Escuela de Nutrición, Facultad de Medicina, UCV
3
ICTA, Facultad de Ciencias, UCV

Caryodendron orinocense Karst, es un árbol que crece en la base de los Andes de Venezuela, Ecuador y Colombia, sus nueces son consideradas un producto alimenticio no convencional, consumidas por los campesinos de la región. Las semillas tienen un contenido de grasa de aproximadamente 30% (b.s.); después de la extracción, la torta remanente representa una buena fuente de proteína (18,40%, b.s.) y de carbohidratos por diferencia 57,69%, luego de la extracción y obtención del almidón total éste presentó un pureza de 91,16%,con posibilidades para consumo tanto humano como animal. En estudios previos se evaluó la composición química y físico-química del almidón extraído del Caryodendron, en base a estos resultados se evaluaron sus propiedades funcionales. Se le determinaron los siguientes parámetros: viscosidad aparente, perfil de gelatinización, estabilidad del gel, y morfometria Los métodos empleados fueron: viscoamilógrafo de Brabender, el viscosímetro de Brookfiel, el uso del microscopio electrónico de barrido (SEM). Se evidencio fragilidad de los gránulos, consistencia y tendencia a la retrogradación, forma y tamaño esféricos característicos. Los resultados permiten inferir los posibles usos de este almidón en la industria de alimentos.


Micropropagation and establishment of cell suspension culture of the medicinal herb Petiveria alliacea L.

Castellar A.1, Magioli C.1, Moura C.2 and Mansur E.1

1Laboratório de Micropropagação e Transformção de Plantas (Labmit).
2Departamento de Biologia Celular e Genética, IBRAG, Universidade do Estado do Rio de Janeiro-Rio de Janeiro-RJ, Brazil.

E-mail: mansur@uerj.br

Petiveria alliacea L. (Phytolaccaceae) is a herbaceous perennial dicotyledonous, found in tropical areas of Central and South America, Caribbean, and Africa. P. alliacea is traditionally used in popular medicine due to several pharmaceutical properties. The alcoholic extract is recommended for external use to treat paralysis and rheumatism, while the powdered roots have analgesic properties to relief toothache. The continuous use of the root powder has neurological effects resulting in super excitation, insomnia and hallucinations, followed by convulsions, paralysis and death. The slaves had knowledge of the neurological properties of the plant, which they called "master-tamer" and secretly added the roots to the food that their masters consumed. Several other properties have been reported for P. alliacea, including insect repellent, narcotic, abortifacient, aphrodisiac, depurative, diuretic, expectorant, nematocide, antiofidic, antiviral, anti-inflammatory and analgesic. Extracts have also shown activity against Trypanossoma cruzi and Listeria monocytogenes, in natural killer cell activation and on the inflammatory response to BCG.
Tissue culture methods are important biotechnological tools to provide multiplication of specific genotypes and circumvent the influence of environmental factors in the production of secondary metabolites. Studies on micropropagation and cell suspension cultures have not been reported for P. alliacea so far.
In the present work, in vitro propagation of P. alliacea was achieved through the culture of nodal segments on MS medium. Rooting of shoots was induced in half strength MS supplemented with 0,6 M indole-3-acetic acid (IAA). After rooting, plants were maintained under greenhouse conditions and no morphological abnormalities were observed. In order to induce friable calluses, leaves from in vitro plants were cultured on MS medium supplemented with different concentrations of -naphthaleneacetic acid (NAA) (2,7; 5,4; 10,7; 16,1 and 26,9 M), 6-benzylaminopurine (BAP) (2,2; 4,4; 8,9; 13,3 and 22,2 M), Kinetin (Kin) (2,3; 4,6; 9,2; 13,8 and 23,0 M), Picloran (Pic) (2,0; 4,0; 8,0; 12,0 and 20,0 M) and 2,4-diclorophenoxyacetic acid (2,4D) (2,2; 4,5; 9,0; 13,6 and 22,6 M). Highest induction rates were obtained in the presence 12 and 20 M Pic. Cell suspension cultures were successfully established from these calluses. The results of this study provide a basis for subsequent analysis of the biosynthetic capacity of P. alliacea tissues by manipulating media formulation and culture conditions.


Pharmaceutical care in phytotherapy: a tool to promote the education and to increase the interest on phytomedicine

Almeida A.P., Chaves D.S.A., Rodrigues V.F., Passini A.M. and Moraes S.R.

Laboratório de Produtos Naturais, Curso de Farmácia, Universidade Severino Sombra.

Introduction:
Data of the Brazilian Institute of Geography and Statistics (IBGE) show that 40% of the Brazilians do not have access to the medicines. The Pharmacy School of the Severino Sombra University, located in Vassouras (408 Km2), a small city of Rio de Janeiro, with 31,402 habitants (IBGE data), detected that the regional population make use of plants for medicinal purpose, without real information about the risks and benefits of them. Our main objective is to promote education to the regional population, concerning phytotherapy, and to increase health professionals' interest on phytomedicine.

Methods:
The Pharmacy School developed different actions, such as: public interviews, the control of plants' quality sold by local suppliers and a public orientation about phytotherapy.

Results:
Seventy percent of the interviewed people had affirmed that they had already made use of different plants to treat many diseases. In 85 % of the cases, it was observed self-medication by using plants. It was verified that the most of the interviewed people make use of plants cultivated by themselves (90 %), or plants provided by non-authorized suppliers (5 %), which increases health's risks. Samples provided by suppliers indicated low quality, mainly under the microbiological aspect. Seventy per cent of interviewed people affirmed that plants constitute a natural treatment, which brings no risk for health. Different vegetal species had been mentioned as well as their respective indications, but their adequate therapeutically doses are unknown.

Conclusions:
Some of the authorized species, for human use, catalogued by the Brazilian Health Department, are being cultivated without the use of chemical agents, as insecticides. They are controlled under physical, chemical and microbiological parameters, by the Pharmacy academics under constant orientation of specialists. This action allows the production of a vegetal material with quality. Informative brochures are being elaborated, by Pharmacy School, to inform the population about Pharmaceutical Care in the use of medicinal plants. Partnership with doctors is being searched in order to form a multiprofessional team that will allow the prescription of these phytomedicines produced by the Pharmacy School, initially, for the population of low income. One of the driving forces that resulted in mainstream acceptance of phytomedicine, for example in countries like Germany, was the inclusion of phytotherapy in the medical and pharmacy school curricula, which was done by Severino Sombra University, in particular by the Pharmacy School. We believe that the phytomedicines with a high level of pharmaceutical and medical quality are the basic requirement for the success of phytotherapy. By this initial work, we intend to overtake the gap between the folklore of herbs and modern clinical science.


Popular medicinal plants used in Brazil as a potencial source of antithrombotic substances: preliminary results with Cecropia genus

Almeida A.P.1, Costa S.S.2, Zingali R.B.3, Chaves D.S.A.1, Rodrigues V.F.1, Muzitano M.F.2 and Melo G.O.2

1Laboratório de Produtos Naturais, Curso de Farmácia, Universidade Severino Sombra
2Núcleo de Pesquisas de Produtos Naturais - Universidade Federal do Rio de Janeiro
3Departamento de Bioquímica Médica - Universidade Federal do Rio de Janeiro.

Introduction:
The causes of cardiovascular disease are many and varied but in the large majority of the cases, thrombosis is at their basis. In Brazil, many species are used in folk medicine for the most varied purposes. The genus Cecropia comprises about 50 tree species, well distributed in South and Central Americas. In Brazil, Cecropia representatives can be found in the North (Amazon Forest), Central-Western part, as well as Southeast and South. Among the therapeutic effects, these plants have been used as cardiotonic, diuretic (Vargas Howell et al., 1996), hypoglycemic (Andrade-Cetto et al., 2001), astringent, anti-inflammatory, to control high blood pressure and as leishmanicide drug (Oliveira et al., 2000). Our group is interested to study plants that cause some modification at coagulation process in vitro. We report here some chemical and biological data obtained from our preliminary research with Cecropia genus.

Methods:
Leaves were collected from three species of Cecropia trees (A, B and C) that grows in Vassouras-Rio de Janeiro. Dried leaves (205.5 g) from sample A were exhaustively extracted by ethanolic maceration. Ethanolic extract (EM; 23.5 g) was treated with water resulting in two fractions, a soluble (EM-S; 13.5 g) and an insoluble one (EM-I; 9.8 g). The EM-S fraction was partitioned between water and organic solvents: ethyl acetate and n-butanol resulting in three fractions: EM-S-A (ethyl acetate, 0.52 g), EM-S-B (n-butanol, l.27 g) and EM-S-C (residual aqueous fraction, 6.03 g). The ethyl acetate fraction (0.35 g) was chromatographed using reversed phase Si gel column (RP-2) and water:methanol gradient yielding three fractions (EM-S-A1, EM-S-A2 and EM-S-A3).

Results:
Ethanolic extract of Cecropia sp (sample A) is majority composed by polar substances. Thee different flavonoids were detected in EM-S. One of them in EM-S-A2 [R f1= 0.61; n-butanol, acetic acid and water (8:1:1)] and the others in EM-S-B [Rf1=0.30, Rf2= 0.51; n-butanol, acetic acid and water (8:1:1)]. Our preliminaries biological results showed that EM-S was able to cause some inhibition of thrombin activity in vitro. Conclusion: Chemical and pharmacological studies with species from genus Cecropia are under way to identify the bioactive substances.


Evaluación de la actividad moduladora del sistema de complemento por 12 extractos de plantas de uso medicinal en Guatemala

Alvarez E.M., Osorio A., Castillo C.R., Paz A.M., Paredes M.E. y Cáceres A.

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala

El sistema inmune es el encargado de mantener la integridad del organismo, posee funciones como especificidad, memoria y distingue lo propio y lo extraño. Su complejidad es una razón que impide desarrollar sistemas in vitro que demuestren todo lo que ocurre in vivo, aunado al descubrimiento de diversas enfermedades autoinmunes. Por tanto es necesaria la búsqueda de medicamentos capaces de inhibir o estimular la respuesta inmune, según sea el caso. El sistema de complemento (compuesto por cuatro unidades funcionales: la vía clásica, la vía alterna, la unidad de amplificación y la ruta terminal) está conformado por unas 30 proteínas del plasma y membranas celulares, que interaccionan entre sí, en forma regulada formando una cascada enzimática y amplificando la respuesta humoral; su activación y fijación a microorganismos constituye un importante mecanismo efector del sistema inmune, lo que incluye lisis del microorganismo o célula diana, opsonización, quimiotaxia, amplificación de la respuesta humoral específica y eliminación de inmunocomplejos.
Se evaluó la actividad moduladora in vitro por 12 extractos etanólicos de plantas de uso medicinal en Guatemala, mediante el ensayo descrito por Klerx et al. Este se basa en la hemólisis de los eritrocitos por el Complejo de Ataque a Membrana (CAM) generado al activarse el complemento. Los eritrocitos actúan como activadores y células blanco; tras esta activación se produce la lisis de eritrocitos liberándose hemoglobina, la cual es medida y utilizada como parámetro para medir la actividad (Concentración Inhibitoria media CI50 que debe ser menor a 15 g/ml).
Para el ensayo de la vía clásica se emplean eritrocitos de carnero sensibilizados con anticuerpos de conejo anti-eritrocitos de carnero; en la vía alterna se emplean eritrocitos de conejo y se debe inactivar la vía clásica utilizando ácido etilenglicol tetraacético (EGTA) como agente quelante de calcio.
Los extractos evaluados fueron hojas de Lippia graveolens (orégano mexicano), Neurolaena lobata (tres puntas), Solanum americanum (macuy), Cornutia pyramidata (hoja de zope), Simarouba glauca (jocote de mico), hojas y raíz de Petiveria alliacea (apacín), corteza de Rhizophora mangle (mangle), flor y raíz de Dorstenia contrajerva (contrahierba), corteza de Quercus crispifolia (encino) y frondas de Phlebodium pseudoaureum (calaguala), obteniéndose los resultados siguientes:
Inhibición de la vía clásica (no se presenta hemolisis): Hoja de P. alliacea (CI50=5.0 g/ml), hojas de S. glauca (CI50=5.5 g/ml), hojas de S. americanum (CI50=8.0 g/ml), frondas de P. pseudoaureum (CI50=10.5 g/ml), raíz de D. contrajerva (CI50=12.5 g/ml), raíz de P. alliacea (CI50=14.0 g/ml).
Los extractos que poseen actividad moduladora del complemento, indicado por un CI50 menor a 15.0 g/ml son interesantes, ya que la monitorización de los niveles de complemento e idealmente los factores activados de la vía clásica son utilizados como indicador de actividad inflamatoria, deficiencias en esta vía pueden conducir a una mayor incidencia de enfermedades como lupus eritematoso sistémico, vasculitis, glomerulonefritis y polimiositis.
Las deficiencias de la vía alterna se traducen en la predisposición a desarrollar infecciones piógenas recurrentes, evidencia de esta manera la importancia de determinar actividad moduladora sobre el complemento a partir de extractos de origen vegetal, los cuales podrían utilizarse en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Se sugiere con ello la necesidad de más estudios de este tipo y/o la aplicación de otros ensayos para determinar actividad inmunomoduladora de extractos vegetales.


Nuevos datos sobre frutos tropicales. II. Sechium edule Swartz. (Cucurbitaceae): estructura del fruto y su comparación con Cucurbita spp.

Amat A.G.

Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones, Argentina.

Los frutos de Sechium edule Swartz. (Cucurbitaceae), especie nativa de América Tropical, conocidos con los nombres de "cayote", "chayote", "chuchú", "papa del aire" o "cristofina", representan un valioso aunque poco explotado recurso alimenticio cuyo consumo, como verdura hervida o en conserva, se verifica actualmente en el norte de Argentina y regiones de Paraguay y Brasil, donde constituyen un interesante cultivo, cosechado al final de la temporada cálida, época en la cual son introducidos en el comercio. Se presentan los resultados del estudio estructural, histo-anatómico, de los frutos maduros. En éstos puede reconocerse, desde el exterior, las siguientes zonas: 1) Epidermis con estomas ciclocíticos y cutícula estriada característica, tricomas glandulares y aguijones cilíndricos de hasta 5 mm de longitud, que interesan basalmente varias capas tisulares subepidérmicas; en estado de madurez avanzada, se forma tejido suberoso de color castaño claro que se desprende en forma de láminas; 2) Parénquima amiláceo externo, con laticíferos; 3) Sistema de fibras alargadas tangencialmente y laticíferos; 4) Parénquima amiláceo interno, extensamente desarrollado, con grandes células poligonales y laticíferos; 5) Sistema de elementos fibrovasculares, con elementos procumbentes y erectos; 6) Pared seminal; 7) Embrión. Pese a las diferencias, sobre todo debido al carácter uniseminado del fruto de Sechium, se observa una notoria similitud entre la estructura cárpica básica de éste y la propuesta por K.G. Barber (Bot.Gaz. 47: 263-310, 1909) para las especies de Cucurbita L., diferenciándose esencialmente por características del mesocarpio interno. Por otra parte, y además de la ausencia de los típicos cromoplastos, Sechium edule presenta elevada frecuencia de granos de almidón compuestos, con morfología diferente a la observada en los de Cucurbita.

 

Lignoids and polyketide from Virola molissima (Myristicaceae)

Frazão A.T.1, Collantes I.E.1, de Moraes S.K.R1, Nunomura S.M2 and Yoshida M1.

1 Instituto de Química, Universidade de São Paulo, São Paulo-SP, Brasil.
2 Coordenação de Pesquisas em Produtos Naturais, Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Manaus-AM, Brasil.

E-mail: anaft@usp.br

Virola molissima is an arboreous species which occurs on highlands of Peruvian and Brazilian Amazon Forest. The seeds of myristicaceous species are well known due to high contents of oil and it is used for manufacturing cosmetic products.
The fruits of V. molissima were collected during dry season [November, 2003] at Ducke Reserve [Manaus-AM]. The fruits were separated in its parts [pericarps, arils, seed coats and seeds] and after were dried and milled. Seed oil obtained by hot compression [60 oC] was submitted to chromatographic column and eluted with hexane: ethyl acetate system at increasing polarities. The fractions obtained from column yielded, after further purification, the lignoids 1, 2, 3, 4 and the polyketide 5. The lignoids 1 and 2 are new in this family, the polyketide 5 and the lignoids 3 [4-hydroxy-1-oxo-otobain] and 4 were previously isolated from Virola sebifera and Virola elongata. Biogenetically 2 is oxidized product of 1 and by cyclization yields the 3. It is also unusual the exclusive presence of piperonyl ring [3,4-methylenedioxyphenyl] in lignoids from species of Virola.



 

A importância das famílias Myrtaceae e Melastomataceae na etnomedicina Brasileira

de Mello Cruz A.V. e Coelho Kaplan M.A.

Núcleo de Pesquisas de Produtos Naturais, Centro de Ciências da Saúde, Bloco H, UFRJ, Ilha do Fundão, Rio de Janeiro, Brasil.

A ordem Myrtales sensu Dahlgren (1980), abrange 12 famílias das quais Melastomataceae e Myrtaceae são as mais representativas com cerca de 4500 3000 espécies respectivamente. No Brasil, Melastomataceae incluída entre as seis maiores famílias de Angiospermae, congrega 68 gêneros e mais de 1500 espécies distribuídas desde a Amazônia até o estado do Rio Grande do Sul. A família Myrtaceae engloba 24 gêneros com mais de 100 espécies brasileiras, de ocorrência natural restrita à subfamília Myrtoideae, que se encontram espalhadas ao longo da faixa litorânea com maior representatividade nas regiões Sudeste e Sul. Do ponto de vista econômico, as Myrtaceae são muito apreciadas pela população devido à produção de saborosos frutos carnosos do tipo baga. Essas plantas têm emprego muito mais difundido que as Melastomataceae, cujo uso principal reside no aspecto ornamental devido às belas e vistosas flores que produzem. Na tradição popular, espécies dessas duas famílias são utilizadas para fins medicinais. Entretanto, as Myrtaceae são muito mais utilizadas na medicina popular brasileira, concentrando cerca de 70% das citações no levantamento etnomédico para as espécies desses dois táxons. Além disso, entre as famílias de Angiospermae citadas para fins medicinais no Brasil, Myrtaceae (juntamente com Solanaceae) ocupa o terceiro lugar. Suas espécies são usadas em casos de diarréia, hemorragia, febre, cistite, uretrite e reumatismo. Plantas da família Melastomataceae são empregadas no tratamento de verminose, úlcera, dermatose, escabiose, dispepsia entre outras patologias. O perfil químico da família Myrtaceae é bem conhecido e caracteriza-se pela presença de taninos, flavonóides, mono- e sequiterpenos, triterpenos e caracteristicamente derivados do floroglucinol. A família Melastomataceae é pouco estudada dos pontos de vista de sua química e de suas propriedades medicinais, mostrando poucos registros de taninos, triterpenos e flavonóides. O estudo comparativo da importância etnomédica das famílias Melastomataceae e Myrtaceae, igualmente distribuídas em território brasileiro, registra um desequilíbrio não somente acerca do volume de citações de usos para fins medicinais, mas também relativo ao conhecimento da química de suas espécies. CNPq, CAPES.



Residues of azoxystrobin, fenhexamid and pyrimethanil in strawberry following field treatments and 'home' fruit washing

Angioni A.

Dipartimento di Tossicologia, Università di Cagliari, Via Ospedale 72, 09124 Cagliari.

The residue and persistence of the pesticides azoxystrobin, fenhexamid, and pyrimethanil were determined in strawberry after field treatment. The effect of 'home' washing with tap water and a commercially vegetable detergent on residue level was also studied.
After treatment azoxystrobin and pyrimethanil residues on strawberry were in average 0.55 and 2.98 mg/Kg, respectively, values below the maximum residue level (MRL) fixed by the European Union (2.0 mg/kg and 5 mg/Kg, respectively), while fenhexamid residues were in average 2.99 mg/kg, which is very close to MRL (3.0 mg/L). Thereafter all residues declined, with a half-life of about 8 days (azoxystrobin and fenhexamid), and 4.8 days (pyrimethanil). Fruit washing with tap water reduced the residues of azoxystrobin and fenhexamid but did not affect pyrimethanil residues. Finally, when fruits were washed with the commercial detergent, higher amounts were removed (about 45% of azoxystrobin and pyrimethanil and 60% of fenhexamid).

 

Nuovi 7,9':7',9-Diepossilignani ad attività antiossidante e vasorilassante dalle radici di Valeriana prionophylla

Piccinelli A.L.1, Caceres A.2, Passi S.3, d'Emmanuele di Villa Bianca R.4, Sorrentino R.4 e Rastrelli L.1

1Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno
2Departamento de Citohistologya, Escuela de Quimýca Biologica, Universidad de San Carlos de Guatemala
3Istituto Dermopatico dell'Immacolata (IDI, IRCCS)
4Dipartimento di Farmacologia Sperimentale, Università degli Studi di Napoli "Federico II"

Valeriana prionophylla è una specie distribuita in Messico, Costa Rica e Guatemala ampiamente utilizzata nella medicina tradizionale latino-americana con una recente e discreta distribuzione nei mercati locali. Le radici di questa pianta sono usate dalle popolazioni indigene sotto forma di tisana o compresse, come sedativo ed antispasmodico. Nonostante l'ampio uso locale non sono riportati in letteratura studi sulla composizione chimica e l'attività farmacologica. L'investigazione chimica condotta sull'estratto etanolico delle radici di V. prionophylla ha identificato come principali metaboliti secondari, prinsepiolo, già isolati dalle radici di V. officinalis. Questi composti sono stati valutati per la loro attività antiossidante, mediante il saggio di decolorazione del radicale cationico ABTS.+ ed il saggio di chemioluminescenza e, per la loro attività vasorilassante, mediante test farmacologici condotti su organi isolati (anelli di aorta di ratto).
I diepossilignani 8-idrossi-pinoresinolo e prinsepiolo, paragonati con il verbascoside, un potente composto antiossidante, esibiscono una potente attività scavengers verso i radicali liberi, mentre i corrispondenti glicosidi, , mostrano un'attività antiossidante più moderata 3.
L'NO, un fattore derivante dall'endotelio, in presenza di radicali liberi genera il potente radicale tossico perossinitrile, la cui produzione è bloccata da sostanze ad attività antiossidante che quindi aumentano la biodisponibilità di NO e pertanto il suo effetto vasorilassante4.
Per i diepossilignani è stata valutata la capacità di rilassare gli anelli di aorta in presenza o in assenza di endotelio al fine di confermare le proprietà antiossidanti dimostrate dal TEAC e dai saggi di chemiluminescenza.
In presenza di endotelio il prinsepiolo mostrano un effetto rilassante3 indicante un miglioramento della biodisponibilità di NO dovuto probabilmente alle proprietà antiossidanti, ma non possiamo escludere una azione attraverso i recettori degli estrogeni.

 

Composición química, caracterización química y morfológica del almidón nativo de ñame blanco (Dioscorea alata)

Araujo de Vizcarrondo C. y Bou Rached L.

E-mail: araujoc@camelot.rect.ucv.ve. (Venezuela)

El ñame blanco (Dioscorea alata) es originario de Asia suroriental. Del género Dioscorea, la D alata es la especie que actualmente ocupa la mayor superficie cultivada en las zonas tropicales húmedas y es entre los ñames, el que produce la cosecha con mayor rendimiento. Generalmente consumidos en forma natural, sus tubérculos presentan un gran potencial para la industria, no solamente en la obtención de harina con una alta característica nutritiva, si no también de almidón, pudiendo convertirse en una fuente alternativa de ingredientes funcionales para la elaboración de productos alimenticios, en donde tradicionalmente se utilizan trigo, maíz y arroz. En este trabajo se aisló y caracterizó el almidón del ñame blanco, con la finalidad de evaluar ésta fuente no convencional. Se determinó la composición química proximal, características químicas y el contenido de minerales, tales como: hierro, calcio, potasio, sodio, magnesio, cobre y zinc. Las características morfológicas y la naturaleza cristalina también fueron estudiadas. El almidón se extrajo de acuerdo a la técnica descrita por Rincón et al. (1999). En el análisis químico se siguió la metodología oficial de la AACC (1995) y AOAC (2000), igualmente para los minerales, en los cuales se usó absorción atómica. La morfología y el tamaño de los gránulos se evaluaron mediante microscopía electrónica de barrido (MBE). El estudio de difracción de rayos X permitió determinar el tipo de almidón nativo. Las micrografías revelaron gránulos de forma ovalada e irregular, de superficie lisa, sin fracturas ni roturas. En relación al tamaño presentaron un diámetro mayor entre 12 y 38 micras y menor entre 8 y 24 micras, lo que indica que son gránulos de gran tamaño, similar a lo reportado para D. bulbifera y D cayanensis y de mayor tamaño que el D esculenta. El contenido de proteínas (0,42 %) y materia grasa (0,04%) presentes es bajo, esto determina junto con el análisis microscópico (ausencia de proteínas adheridas al gránulo) una alta pureza en el almidón extraído. Los gránulos de almidón de D alata originaron una curva tipo B, característica de almidón de tubérculos. El alto contenido en amilosa sugiere que el almidón de ñame blanco origina un gel de consistencia estable y pueda se utilizado en formulaciones alimenticias donde se requiera ésta característica.



Actividad antiulcerogénica y analgésica de dos extractos brutos de las especies Vernonia polyanthes L. y Vernonia ferruginea L.

Barbastefano V.1, Cola-Miranda M.1, Ferreira A.L.1, Hiruma-Lima C.A.2, Camargo E.E.S.3, Vilegas W.3 y Souza Brito A.R.M1.

1Departamento de Fisiologia e Biofísica, Inst. Biologia, UNICAMP, Campinas, SP, Brasil.
2Departamento de Fisiologia, Inst. de Biociências, UNESP, Botucatu, SP, Brasil.
3Departamento de Química Orgânica, Inst. Química, UNESP, Araraquara, SP, Brasil.

E-mail: vicbio@yahoo.com

Introducción:
Vernonia polyanthes y Vernonia ferruginea, conocidas popularmente como "assa-peixe" y "assa-peixe-do-pará" respectivamente, son dos especies típicas del cerrado brasileño, aunque ocurran ampliamente por todo su territorio. La actividad antiulcerogénica del extracto metanólico de V. polyanthes ya fue observada en un trabajo anterior. En este trabajo fue evaluada la actividad antiulcerogénica y analgésica comparativa de dos extractos brutos (metanólico e clorofórmico) de las dos especies citadas en dos modelos experimentales.

Métodos:
Para la obtención de los extractos, las partes aéreas de las dos especies fueron secas, molidas en molino de cuchillos y percoladas en metanol y cloroformo. El extracto fue entonces filtrado y concentrado por destilación en presión reducida en rotoevaporador, obteniendo los extractos metanólicos (VPM) y clorofórmico (VPC) de V. polyanthes y los extractos metanólicos (VFM) y clorofórmico (VFC) de V. ferruginea. Para probar la actividad antiulcerogénica y analgésica de los referidos extractos fueron utilizados modelos de ulcera inducida por Piroxicam, una droga han inflamatoria non esteroidal-DAINEs, y contorción abdominal inducida por ácido acético en ratones Swiss. Fueron hechas administraciones vía oral de los extractos brutos en las dosis de 250, 500 y 1000mg/kg, Tween 12% (control negativo), lansoprazol 30mg/kg y dipirona 200mg/kg (controles positivos), dependiendo del modelo. Los resultados obtenidos en cada modelo fueron expresados por la media d.p. del IU (índice ulcerativo), seguido del porcentaje de protección en relación al control negativo. En la evaluación estadística fue empleado el teste de ANOVA (p<0,05) y teste a posteriori de Dunett.

Resultados:
Los extractos de ambas las especies reducirán significativamente las lesiones gástricas, además de eso, demostraran evidencia de una actividad analgésica reduciendo el número de contorciones abdominales en los modelos propuestos. En el modelo de ulcera inducida por Piroxicam (n=7), con control negativo (14.7 8.7), una protección significativa fue observada en VPM en la dosis de 500 mg/Kg (6.0 4.2/59%), en VPC en la dosis de 500 mg/Kg (5.3 2.4/64%), en VFM en la dosis de 1000 mg/Kg (4.2 0.5/71%), en VFC en la dosis de 250, 500 y 1000 mg/Kg (5.2 1.7/65%, 6.7 1.2/54% y 5.5 1.1/63%). En el modelo de contorción abdominal inducida por ácido acético (n=7) fue testada una dosis única de 500 mg/kg de cada extracto. Comparados con el control negativo (51.4 9.6), una significativa protección fue observada en VPM (29.6 13.1/42%), VPC (29.9 12.0/42%), VFM (11.4 6.3/78%) y VFC (24.3 8.0/53%).

Conclusión:
Los resultados preliminares en los modelos de inducción de ulcera y contorción abdominal presentados, demuestran la actividad antiulcerogénica y analgésica de las fracciones acuosa y acetato de las especies V. polyanthes y V. ferruginea.



Bioconversión de furfural a ácido 2-furoico por Pseudomonas sp.

Lic. Beades Olivera M.E.

El ácido 2-furoico es un derivado furánico que puede ser obtenido a partir del furfural ya sea por vía química o por vía fermentativa, empleando diferentes microorganismos. En el presente trabajo se investigó la conversión del furfural a ácido furoico por vía microbiana utilizando cepas de Pseudomonas sp. procedentes de aguas marinas aisladas en el Instituto de Oceanología de la Academia de Ciencias de Cuba. Se realizaron estudios variando los parámetros: temperatura, pH, fuente de carbono y concentración de furfural. De lo obtenido se establece que a las 22 horas ocurre la oxidación total del furfural a ácido furoico, y que las mejores condiciones para la biotransformación se lograron a temperatura de 37°C, pH 7, glucosa o miel clarificada como fuente de carbono y una concentración de 0.2 % de furfural. Las cepas estudiadas presentan un comportamiento similar. La conversión del aldehído fue determinada por espectrofotometría UV y HPLC. El ritmo de crecimiento de la industria del furfural en nuestro país ofrece perspectivas al ser instaladas dos plantas que permiten la posibilidad de obtener importantes derivados como alcohol furfurílico y ácido furoico por vía microbiológica. Conociendo las propiedades que posee el ácido furoico como fungicida, bactericida (en la obtención de productos como: furazolidona, furazolium, chloride y furaltadone), como diuréticos e hipertensivos (furosemida y furteno), como analgésico, intermediario químico, aromatizantes, etc., resulta de gran interés su análisis por la valiosa aplicación que tiene en la industria, fundamentalmente en la producción de fármacos. Por tales motivos nos proponemos en el presente trabajo realizar un estudio de conversión del furfural a ácido furoico empleando diferentes cepas de Pseudomonas.

 

Study of the interaction of kava-kava constituents and cyclodextrins.

Bilia A.R., Bergonzi M.C., Bianconcini L., Mazzi G. and Vincieri F.F.

Department of Pharmaceutical Sciences, via U. Schiff, 6, 50019 Sesto Fiorentino (FI) Italy.
E-mail: vincieri@unifi.it

Kava-kava (Piper methysticum G. Forster) has been widely used to improve stress disorders, nervous tension and restlessness. In the last three years unexpected, high liver toxicity has been reported in several patients and it was related to kavalactones mainly depending on their dosage. Thus, to improve the technological and biopharmaceutical characteristics of preparations based on kava-kava and decrease the dosage of kavalactones, the formation of supramolecular complexes between kava-kava constituents and some cyclodextrins (CDs) were evaluated using isolated kavalactones and a commercial extract. CDs are cyclic oligosaccharides that can interact with a wide variety of drugs and the formation of such a supramolecular complex can influence the dissolution rate and the drug's aqueous solubility and therefore, improve their bioavailability profile.
In this attempt, cyclodextrin and semi-synthetic cyclodextrins were selected to investigate their influence on the solubility and stability of kavalactones. The chemical modification of natural Cds generally aims at converting them into amorphous, non crystallizable derivatives, to provide high Cd concentration in aqueous solutions that remain physically and microbiologically stable for reasonable period of time, either as free or complexed, with the simultaneous reduction of parenteral toxicity. Complexes Cds-kavain and Cds-kava extract were obtained by kneading and freeze-drying using 1:1 ratio and characterized using differential scanning calorimetry (DSC), HPLC-DAD-MS analysis. Solubility studies were performed by HPLC/DAD analysis.



Studio di solubilità di kavalattoni mediante l'impiego di carrier micellari

Scalise L., Bilia A.R., Bergonzi M.C. y Vincieri F.F

Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, via Ugo Schiff, 6 50019 Sesto Fiorentino (FI)
E-mail: luca.scalise@unifi.it

Scopo del presente lavoro è la valutazione della solubilità di estratti di kava-kava, Piper methysticum G. Forster, in presenza di micelle.Questa pianta, coltivata da più di 3000 anni dalle popolazioni delle isole del Sud Pacifico viene impiegata nella vita sociale e cerimoniale dei paesi di origine in quanto dalle radici e dal rizoma si prepara un succo con proprietà narcotizzanti e soporifere. Recenti indagini farmacologiche hanno accertato effetti sedativi, analgesici, anticonvulsivi, anestetici, antiaritmici, antitrombotici, neuroprotettivi ed antispasmodici di estratti lipofili della pianta. Fino a circa tre anni fa diversi estratti standardizzati in kavalattoni, molecole che rappresentano i costituenti biologicamente attivi, erano impiegati come ansiolitici, nella cura di stress ed insonnia. Negli ultimi anni è stata riscontrata, in maniera inaspettata una elevata epatotossicità in molti pazienti correlata ai kavalattoni, principalmente in dipendenza dal loro dosaggio e per questo i fitoterapici a base di estratti di kava-kava sono stati tolti dal commercio.
Il nostro studio è rivolto al miglioramento delle caratteristiche tecnologiche e biofarmaceutiche delle preparazioni basate sul kava-kava in modo da diminuire i dosaggi dei derivati kavalattonici ed aumentare la sicurezza dei preparati. Per questo scopo sono state studiate le interazioni tra i principi attivi degli estratti con alcuni aggregati colloidali micellari. Infatti, grazie alle differenti caratteristiche chimico-fisiche delle due regioni che costituiscono le micelle, una zona idrofila ed un'altra lipofila, i carrier micellari sono in grado di inglobare all'interno del "core" sostanze che abbiano le medesime caratteristiche chimico-fisiche del "core" stesso. Se il "core" presenta caratteristiche lipofile (micella normale) il sistema micellare ingloba sostanze lipofile, aumentandone così la solubilità in solventi idrofili. Viceversa, nel caso di caratteristiche idrofile del "core" (micella invertita) il sistema micellare ingloba sostanze dalle caratteristiche idrofile aumentandone la solubilità in mezzi lipofili. Essendo i kavalattoni delle sostanze lipofile il tipo di micella scelto per i nostri studi è stato quello normale. Sono state preparate sia soluzioni micellari ad un componente, sia soluzioni micellari miste, composte da due tensioattivi. Le soluzioni micellari sono state preparate impiegando un range di concentrazioni utilizzando come limite inferiore la CMC corrispondente fino ad un valore massimo di 500mM. Dopo aver preparato le soluzioni micellari, una parte di esse è stata saturata con kavaina, scelta come kavalattone test per i sistemi micellari, mentre l'altra con l'estratto commerciale. L'aumento della solubilità dei componenti kavalattonici è stato misurato tramite analisi HPLC-DAD/MS. Sono stati presi in considerazione diversi tensioattivi: TWEEN 80, BRIJ 78, glucate DO, olio di ricino etossilato, PEG 400 monostereato, sodio lauriletere solfato (SLES), ascorbilottanoato (ASC8), sodio dodecil solfato (SDS). I migliori risultati sono stati ottenuti impiegando soluzioni di ASC-8 e SDS: per questo i sistemi micellari misti indagati sono stati quelli costituiti da questi due tensioattivi.
Ringraziamenti: questo lavoro è stato supportato dal MIUR (Ministero dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca, Roma).

 

Chemical and fatty acid composition of Syagrus coronata

Antoniassi R.1, Freitas S.1, Vieira T.M.F.S.1, Bizzo H.R.1 and Folegatti M.I.S.2

1 Embrapa Food Technology - Av. das Américas, 29501 Rio de Janeiro RJ 23020-470 Brazil. E-mail: bizzo@ctaa.embrapa.br
2 Embrapa Cassava & Fruits - Caixa Postal 007 Cruz das Almas BA 44380-000 Brazil

Syagrus coronata (Syn Cocos coronata), locally known as licuri, ouricuri or uricuri is a palm tree native from the dried areas in Northeast Brazil. It is a very important resource for local population. Traditionally, women and children collect the crop, break the shell and pick up the endosperm, which is used as food, to feeding the cattle and for selling to oil producing companies. The fruits are ovoid, with an orange skin and the endosperm is fibrous, sweet and eatable. The objective of this work was to evaluate the chemical composition and the fatty acids profile of the Syagrus fruit. Analyses were performed in fresh and cooked whole fruit, and also in the endosperm available at local market, according to AOAC and AOCS official methods. For the fatty acids profile, the samples were methylated and analyzed by gas chromatography in a HP 5890 series II fitted with a SP2340 capillary column (60m x 0.32mm x 0.2 m), with oven program ranging from 150 to 200ºC at 1.3ºC/min, injector temperature at 250ºC and detector temperature at 280ºC. Hydrogen was the carrier gas (2.4mL/min measured at 40ºC). The protein content in the endosperm varied from 8.3 to 10.0g/100g, and the dietary fiber ranged from 14.1 to 17.7g/100g. The oil yield was between 48 to 68%, with peroxide value of less than 1 meq/kg and acidity of 0.3%, which indicates low levels of oxidation and hydrolysis. The main fatty acids observed were lauric (46%), myristic (14%), caprylic (10%) and oleic acids (10%). Linolenic was not detected. The fruit presented an oil composition similar to those of coconut and babassu oil.



Secondary metabolites from Parinari campestris (Chrysobalanaceae)

Abdel-Razik A.1, Braca A.1, de Méndez J.B.2, De Tommasi N.3 y Morelli I.1

1Dipartimento di Chimica Bioorganica e Biofarmacia, Università di Pisa, Italy.
2Grupo de Productos Naturales. Centro de Química Orgánica. Escuela de Química. Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela. Caracas.
3Dipartimento di Scienze farmaceutiche, Università di Salerno, Via Ponte Don Melillo, Italy.

Plants of the genus Parinari (Chrysobalanaceae) have been used in several countries to treat different diseases for the presence of ent-kaurene and nor-kaurene diterpenes . Only few species of the genus Parinari have been studied so far and recently our group described the isolation of twenty new kaurane-type diterpenes having a potential anticancer activity from P. sprucei Hook f. leaves. The phytochemical study of aerial parts of P. campestris Aublet, Pl. Guiane, a tree growing in the Amazon forest of Venezuela, was carried out to isolate and identify its secondary metabolites and to correlate them with the others previously characterized from different Parinari species. The plant material (470 g) was defatted with n-hexane and then extracted at room temperature for 48 h with CHCl3, CHCl3-MeOH (9:1), and MeOH, by exhaustive maceration to give 1.5 g, 5.0 g, 5.5 g, and 10.0 g of the respective residues. The extracts obtained were separately submitted to different chromatographic techniques such as silica gel column chromatography, Sephadex LH-20, RP-HPLC to give five kaurane-type diterpenes, namely, 13-hydroxy-15-oxozoapatlin, previously isolated also from P. sprucei and three phenolic derivatives, namely protocatechuic acid, . The structures of the compounds were established by high resolution NMR (1H-, 13C-, 13C-DEPT, 1D-TOCSY, 1D-ROESY, HSQC, HMBC, DQF-COSY) and ESI-MS. The identification of some other phenolic and diterpene derivatives is still in progress.

 

Búsqueda de marcadores para la estandarización de extractos de rizoma de Smilax domingensis Willd.

Cruz S.1, Cáceres A.1, Costa MC.2, Costa M.2, Teixeira A.2 y Cañigueral S.3

1 Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, USAC, Guatemala
2 INETI, Lisboa, Portugal
3 Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona, España.

El aprovechamiento del género Smilax es un buen ejemplo del potencial de las plantas medicinales en los bosques de Mesoamérica, no sólo por su importancia en la medicina local, sino porque ha sido un producto de exportación desde hace 500 años. Desde 1996 se inició un proceso de recopilación y documentación de las especies vegetales americanas más ampliamente usadas en la fitoterapia regional, en el marco de RIPROFITO-CYTED, se generó el proyecto PROMFI que pretende elaborar monografìas de calidad, eficacia y seguridad, para ser utilizada por los sectores académico, industrial y gubernamental. En el proyecto se seleccionó como una de las plantas a S. domingensis, con el objetivo de desarrollar una metodología analítica para estandarizar extractos y tinturas por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) e identificar los principales marcadores químicos. El rizoma de S. domingensis se obtuvo de un cultivo bajo manejo, en Suchitepéquez, Guatemala, se prepararon los extractos por percolación utilizando alcohol al 95. Para la metodología analítica se utilizaron los siguientes reactivos: metanol, acetonitrilo, ácido acético, fórmico, y Agua Ultrapura de Milli Q. Los estándares usados sarsasapogenina, smilagenina, rutina, ácido clorogénico, hiperósido, mircetina, quercetina y kaemferol; y una mezcla de catequinas y alcaloides (cafeína, teobromina, teofilina, catequina, epicatequina, epigallocatequina, gallato de epicatequina, epigallocatequina y gallocatequina), esteroides (colesterol, estigmasterol, sarsasapogenina, estigmastenol y sitostenol). Para el análisis se usó un espectrofotómetro de masas Cole Parmer Instrument 74900, Bruker Esquire 3000, HPLC Waters Alliance 2695 con un Dual Absorbance Detector Waters 2487. Columna Zorbax Agilent Eclipse XDB C18. Se compararon dos métodos, usando en el método 1 como disolvente A: Agua con 0.5% de ácido acético, B: Acetonitrilo 0.5% de ácido acético (88:12) y 280nm; y el método 2 como disolvente A: Ácido fórmico 0.1%, B: Acetonitrilo (80:20) y 203 y 254. Se realizaron inyecciones directas de los patrones por MS en las siguientes condiciones: Fase móvil: Acetonitrilo-Agua (1:1), dilución de los patrones con la fase móvil (20µg/mL). Los compuestos identificados en tinturas y extractos de S. domingensis por comparación con patrones utilizando dos métodos diferentes por HPLC MS son ácido clorogénico e hiperósido. Los compuestos cuya presencia es propuesta por el espectro de masas y comparado con el TR relativo con datos de la literatura son: ácido cafeico, quercitrina (ramnósido de quercitina) e isorhoifolina (rutenósido de quercetrina) y posiblemente mircetina. Las proporciones relativas de integración de los picos en los cromatogramas de HPLC sugieren que el ácido clorogénico, hiperósido y quercitrina son los mayormente presentes en los extractos alcohólicos de todas las muestras de Smilax analizadas.



Actividad biocida de extractos vegetales de especies etnobotánicas de la región centro-occidente de México

Salgado R.1, Calderón M.J.C.1, Serrato B.B.E.2, Bello G.M.A.3, López E.C.4, Covián N.F.1, Loeza L.P.D.1, Morales L. M.E.1, Damián B.L.M.1 y Martínez M.M.1

1Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Instituto de Investigaciones Químico- Biológicas, Ciudad Universitaria, Morelia, Michocán, México.
2Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Producción Sostenible-INIFAP, Michoacán, México.
3Campo Experimental Uruapan-INIFAP Ave. Latinoamericana 1101, Col. Revolución; Uruapan, Mich., México.
4U.M.S.N.H., Facultad de Biología, Edif. R, Ciudad Universitaria; Morelia, Mich., México.

En México, uno de los países con mayor riqueza florística en el mundo, se han realizado investigaciones que demuestran la producción de metabolitos secundarios con propiedades biocidas (bactericidas, fungicidas e insecticidas) en numerosas especies de plantas, destacando las que pertenecen a la familia Asteraceae, Fabaceae y Brassicaceae, entre otras.
En el presente trabajo se reportan los efectos biocidas de diferentes extractos vegetales de especies etnobotánicas de la región centro-occidente de México, de las cuales se ha demostrado el efecto fungicida y bactericida de los extractos de raíces de Heliopsis longipes 'A. Gray' Blake (chilcuague) y Acmella oppositifolia Jacq. (botón de oro); de hojas y tallos de Tagetes lucida Cav. (Santa María), Satureja macrostema 'Benth' Briq. (nurite), Artemisia ludoviciana Nutt. (estafiate); y de hojas, tallo y flores de Helenium mexicanum H.B.K. (cabezona). En bioensayos in vitro se ha comprobado que éstos inhiben el desarrollo de hongos fitopatógenos del género Colletotrichum, Fusarium, Verticilum y Phytophthora, y de hongos patógenos de humanos como Candida albicans, Trichophyton rubrum, Sporothrix schenkii y Mucor cercinelloides; asimismo, inhiben el crecimiento de ciertas bacterias como Salmonella sp., Escherichia coli, Shigella sp., Staphylococcus aureus y Streptococcus sp.
Se ha comprobado que algunos de estos extractos poseen también propiedades insecticidas como el de raíces de H. longipes y de flores de H. mexicanum, ya que mostraron porcentajes de mortalidad mayores al 70% en Acanthoscelides obtectus (gorgojo), Epilachna varivestis (conchuela de frijol) y larvas de Culex stigmatosoma (mosquito).
Los resultados muestran el potencial biocida de estas plantas, de las cuales algunos metabolitos ya se han dilucidado y otras se analizan para conocer sus principios activos y las CL50.



Methanolic extracts from different species of salvia: binding studies for CNS receptors

Cavallo F.1, Nencini C.2, Capasso A.1, De Tommasi N.1, Leone A.1 and Micheli L.2

1Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno
2Dipartimento di Farmacologia "Giorgio Segre", Università degli Studi di Siena.

Phenolic and terpenic compounds from Salvia spp. have raised great attention as an interesting class of natural compounds effective as antitumoral, antioxidant and chemopreventing tumor agents. Salvicine, a diterpene quinone, structurally modified, derived of aethiopinone, isolated from roots of Salvia sclarea is currently under first clinical trials as an antitumoral drug.
The species of choice is Salvia sclarea, largely used in traditional medicine as antiseptic, for digestion disorders, in kidney disease and, as mentioned above, as an antitumoral remedy. Furthermore, it has been reported that some compounds from Salvia ssp (Salvia divinorum) are able to induce hallucinogenic activity. Therefore, we have evaluated the affinity for the serotoninergic, (5HT1A, 5HT2A and 5HT2C), adrenergic and dopaminergic (D1 and D2) receptors of three Salvia methanolic extracts: Salvia sclarea, Salvia dominica and Salvia menthaefolia.
The extracts affinity for receptors is definite as inhibition percentage of radioligand/receptor binding and measured as the radioactivity of remaining complex radioligand/receptor.
The best results have been shown by Salvia sclarea extract, but it has shown high affinity only for the 5-HT2A and D2 receptors, varying according to extract concentration (table 1-2). The highest level of inhibition was a 75% at the maximum concentration tested (125 µg/ml) for serotoninergic receptor, and 46% for D2 ones. Even the data obtained for Salvia dominica extract have shown affinity only for the 5-HT2A and D2 receptors (table 1-2). The level of inhibition percentage at 125 µg/ml of Salvia dominica extract for both receptors have been similar: 31% for 5-HT2A, and 29% for D2 receptors.
As it reguards Salvia menthaefolia extract, it displayed weak affinity only for 5-HT2A receptors and no affinity for the other receptors tested: the highest levels of inhibition at the maximum concentration tested (125 µg/ml) were 18% for the 5-HT2A (table 1)

Table 1. % inhibition binding of all extracts tested to 5HT2A receptor

Inhibition %
Concentration (µg/ml)
Salvia sclarea
Salvia dominica
Salvia menthaefolia
125
75
31
18
62.50
60
29
5
15.60
25
23
-

Table 2. % inhibition binding of all extracts tested to D2 receptor

Inhibition %
Concentration µg/ml
Salvia sclarea
Salvia dominica
Salvia menthaefolia
125
46
29
-
62.50
16
19
-
15.60
10
16
-

 

Chemical-pharmacological study of Operculina macrocarpa L. Urban (Convolvulaceae)

Carvalho D.1, Sannomiya M.2, Campaner dos Santos L.2, Vilegas W.2 and Nunes H.R.1

1Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, UNESP, Araraquara, SP, Brasil.
2Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, UNESP, CP355, cep.14800-900,Araraquara, SP, Brasil.

E-mail: michelin@fcfar.unesp.br

The Convolvulaceae family is composed of approximately 2000 species. A great variety of secondary metabolites contend N is found in this family as ergoline, pirrolidine, hydrophilic and lipophilic tropanes, indolizidinics and pirrolizidinics alkaloids. Operculina macrocarpa L., pertaining to this family, occurs in the Brazilian northeast and widely is used by the population due its activities laxative and purgative. However, stories do not exist on the chemical-pharmacological study of O. macrocarpa. Inside of this context, this work aims at to carry through the study of this species.
The tubercles are dried, grinded and had been submitted to the successive extractions for maceration in EtOH 70%. After that, consecutive partitions with dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol had been carried through.
Chemical analysis was carried out the separation of compounds from the ethyl acetate fraction by a chromatography on Sephadex® LH20, leading to the isolation of cafeic and protocateic acids, and a cafeic acid dimer, whole characterized by spectroscopic methods by Nuclear Magnetic Resonance and compared with literature values.
The AcOEt fraction was evaluated on the gastrintestinal motility in mice. The experimental results had been express in average ± shunting line standard. The analysis statistics was carried through by the test t-Student (P < 0,05) (Table 1).

Table 1. Intestinal motility test by O. macrocarpa

Treatment
Dose
Movement of charcoal meal as percentage of full intestinal length (%) standard deviation
Fraction AcOEt
100 mg/kg
85.42 ± 9.85
Control
10 ml/kg
52.79 ± 30,39

The chemical study of the AcOEt portion of the hydroethanolic extract of the O. macrocarpa resulted in the isolation of the cafeic and protocateic acids, and a cafeic acid dimmer. Preliminary pharmacological assays confirm the popular use of the plant as laxative. The isolated chemical constituents can be related with this activity, justifying the continuity of the studies chemical-pharmacological of this specie.

 

Evaluación del grado de oxidación en una población normal y en una población con Diabetes mellitus tipo II

Castro J., Lares M., Garzaro G. y Obregón O.

La peroxidación de los lípidos es un proceso complejo, en donde los ácidos grasos insaturados reaccionan con el oxígeno molecular mediante un mecanismo de reacción en cadena vía radicales libres, y forman hidroperóxidos los cuales son degradados a una variedad de productos, los cuales pueden ser cuantificados por diferentes metodologías, como el caso del 4-hidroxinonenal, un producto final de la degradación de los ácidos grasos polinsaturados. El presente trabajo fue conducido con la finalidad de establecer el grado de oxidación en una población sana (n= 30) entre 25-35 años y en una población con diabetes tipo 2 (n=25) entre 25-50 años, para tal fin se determino la concentración de 4- hidroxinonenal como un factor de riesgo y los siguientes parámetros de laboratorio: glicemia, colesterol, triglicérido, HDL-colesterol, y LDL-Colesterol. Se determino en ambas poblaciones el 4-hidroxinonenal, por método colorimerico con el kit comercial de Peroxidación de Calbiochem. Los resultados de 4-hidroxinonenal en la población normal oscilaron entre 2,61 y 6,83 µmol/L y en los diabéticos de 28,99 y 73,74 µmol/L., encontrándose diferencias estadísticamente significativas (p < 0,01) entre ambas poblaciones. Los valores de 4- hidroxinonenal, encontrados como normales para la población estudiada van de 2,61 a 6,83 µmol/L, y valores mayores podrían ser indicativos de riesgo adicional en estos pacientes. Adicionalmente esta determinación es muy útil para evaluar el tratamiento con antioxidantes en estos pacientes, a fin de proveer protección contra el desarrollo de enfermedades cardiovasculares en estos pacientes.



Induction of apoptosis on hepatoma cell lines by an 5-alkyl(en) resorcinol from Lithraea molleoides

Barbini L.1, Ruffa M.J.1, López P.2, Cogoi L.2, Martino V.2, Ferraro G2, Campos R.1 and Cavallaro L.1

1Cátedra de Virología.
2Cátedra de Farmacognosia, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. Argentina.
E-mail: lcavalla@ffyb.uba.ar.

Since cell homeostasis depends on the balance between proliferation and apoptosis, effective compounds inducing apoptosis appear to be a relevant strategy to suppress tumor growth. Hepatocellular carcinoma is the most common solid organ tumor in the world and is responsible for a million deaths per year. Many compounds contained in plant extracts exhibit the capability to regulate cell activities and have anti-tumor potential. Lithraea molleoides (Vell.) Engl. (Anacardiaceae), commonly known as "chichi" or "molle de Cordoba", is a tree that grows in South America, specially in Argentine, Brazil and Uruguay and is well known by rural people of these countries as: antiarthritic, haemostatic, diuretic, tonic and useful for the treatment of respiratory diseases. Previous investigations on different extracts of this plant have reported antiviral and antimicrobial activities.
The dichloromethane extract from leaves of L. molleoides present cytotoxic activity on human hepatocellular carcinoma cell lines [HepG2 (IC50 S.D. = 68±2 µM/ml) and Hep3B (IC50 S.D. = 44.7 24.8 µM/ml)] by the MTT assay. An 5-alkyl(en)resorcinol "1,3-dihydroxy-5-(tridec-4',7'-dienyl) benzene" was isolated by bioassay-guided fractionation from the dichloromethane extract. To determine if the detected cytotoxic effect of the 5 alkyl-(en)-resorcinol on HepG2 and Hep3B (by the MTT assay), was due to programmed cell death, in this work, we determined if the addition of this purified compound induced apoptosis in both cell lines: HepG2 and Hep3B (deleted p53). These cell lines were treated with the ED50 and ED90 of this compound, calculated by the cytotoxicity assay, for 24 hours. To analyze if this compound induced morphological changes typical of apoptosis, the treated cells were studied under contrast phase microscopy. Apoptosis was determined by acridine orange and propidium iodide staining, detection of DNA fragmentation on agarose gels and DNA content by flow cytometry. Compared with the control cells the treated ones showed significant morphological changes typical of apoptosis and all compatible with programmed cell death. The treated cells stained with acridine orange and propidium iodide showed a greater percentage of red cells that corresponded to the ones with altered cytoplasmic membrane (late apoptotic and necrotic). The green cells, predominant in the control preparations corresponded to live or early apoptotic hepatocytes with intact plasma membrane. Also, both cell lines showed the characteristic DNA fragmentation of apoptosis in agarose gels, exhibiting a ladder of DNA fragments multiple of 200 base pairs. The typical hypoploid population or subG0 peak corresponding to cells with low DNA content was detected when the treated cells were subjected to cytometry analysis. In conclusion, based on these results, the 5 alkyl-(en)-resorcinol isolated from L. molleoides can exert its cytotoxic effect in these hepatocellular carcinoma cell lines through apoptotic cell death. The fact that Hep3B cells have mutated p53 suggests that in these cells apoptosis induced by this compound proceeds by a p53 independent pathway. Further analysis will be done to elucidate the intracellular pathways that mediate apoptosis in both cell lines.

 

Detection of antiviral activity in Erythrina species extracts from Cuba

Goñi M.C.1, Tuttolomondo M.V.1, Gordo O.2, González J.A.2, Prieto S.2 , Campos R.1 and Cavallaro L.1

1 Cátedra de Virología. Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. Argentina (1113). E-mail: lcavalla@ffyb.uba.ar
2 Centro de Química Farmacéutica. Playa, Ciudad de la Habana. Cuba.

Different species of Erythrina genus (Papilionaceae) grown in the eastern (Pinar del Rio) and central part (Cienfuegos) of Cuba, with a vegetation rich in endemism and biodiversity. These plants are used in popular medicine for treatment of infectious syndromes. In the search of natural compounds with antiviral activity, four crude extracts of species: E. cubensis C. Wr (piñón de sierra), E. fusca Lour. (piñón), E. grisebachii Urb. (piñón real) and E. poeppigiana (Walp.) O.F. Cook (búcare) were evaluated in vitro against herpes simplex type 1 (HSV-1), herpes simplex type 2 (HSV-2), poliovirus type 1 (PV-1) and vesicular stomatitis virus (VSV). Decoctions and methanol extracts of bark of each selected species were used for detection of antiviral activity in Vero cells system, by viral cytopathic effect inhibition (ECP) and plaque reduction assays. For each preparation, cytotoxicity was) previously determined (MNCC. In this study, none of the extracts showed inhibitory effect against VSV. Two methanol extracts, E. cubensis and E. fusca presented antiviral activity against HSV-1, HSV-2 and PV-1. We detected weak anti PV-1 activity in decoction of E. grisebachii and E. poeppigiana. The active extracts were selected for bioassay guided fractionation to isolate the compound/s responsible/s for the antiviral activity. In addition, there is no reported phytochemistry composition of these species, specially of E. cubensis.



Interacción de glicósidos de Solanum sobre células del melanoma humano a375. una comparación con ketoconazol

Chataing B.1,3, Usubillaga A.2 y Valentin A.3

1Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Los Andes, La Hechicera, Mérida 5101, Venezuela
2Instituto de Investigacion. Facultad de Farmacia, Universidad de Los Andes, Mérida 5101,Venezuela.
3Laboratoire de Parasitologie et Mycologie Médicale. 15 Ave Ch. Flahault 34060, Montpellier, France
E-mail: bernardochataing3@hotmail.com

Se encontró que los glicósidos de Solanum, tales como -solamargina, -chaconina, -solanina y -tomatina fueron altamente tóxicos sobre las células del melanoma humano. En contraste, las agliconas solanidina, solasodina, demissidina, tomatidina y solanocapsina mostraron una menor actividad. Mezclas combinadas de -solamargina y -chaconina; -solamargina y -solasonina; -chaconina y -solanina, y -solasonina y -solanina mostraron efectos sinérgicos sobre las céluas del melanoma. Por otra parte, -solamargina y -solanina; -chaconina y -solasonina así como -chaconina y -tomatina mostraron efectos aditivos o antagónicos. Un análisis de una mezcla de -solamargina y ketoconazol mostró efectos antagónicos.



Estudio químico de las semillas del "toe" (Brugmansia sanguinea)

Reyna V., Torpoco V. y Cóndor E.

Universidad Nacional de Ingeniería. Facultad de Ciencias

El "toe" (Brugmansia sanguinea) se emplea en la medicina tradicional de la Amazonía peruana, y como producto natural se utiliza como espasmolítico, anticolinérgico, narcótico y anestésico.Las semillas del "toe" (B. sanguínea) contienen alcaloides del tipo tropánicos, principalmente escopolamina, conocida también como hioscina (Leary et al., 1970).En nuestro laboratorio hemos aislado la escopolamina de las semillas de "toe", habiéndolo caracterizado mediante sus espectros de masas y de Resonancia Magnética Nuclear (RMN1H y RMN13C). Drey Foster (1953) realizaron el análisis cuantitativo mas completo de alcaloides presentes en Brugmansia sanguinea, utilizando la cromatografía de partición en papel, y reportando 0,17% de alcaloides totales para las semillas secas. En nuestro laboratorio se realizó la determinación cuantitativa del total de alcaloides de las semillas de toe, habiéndose obtenido 0,36% (Procedimiento de Pelt et al -1967).El análisis fitoquímico que realizamos, nos indica la presencia de alcaloides, aminogrupos primarios y secundarios, grupos fenólicos, taninos, catequinas y esteroides y catequinas.



Estudio citotóxico del extracto del pericarpio de la Punica granatum en células mononucleares humanas de sangre periférica

Cova J.Á.2, Corao G.1 y Pérez J.1

1Laboratorio de Investigaciones en Cultivos Celulares. Facultad de Farmacia y Bioanálisis. Universidad de Los Andes. Mérida-Venezuela.
2Instituto de Inmunología Clínica. Universidad de Los Andes. Mérida-Venezuela.
E-mail: jacova@ula.ve

Introducción:
La granada es ampliamente conocida y usada desde tiempos remotos por sus efectos medicinales variados, como: antiparasitario, antimicrobiano, antiviral, entre otros. En este trabajo, se estudia el efecto tóxico del extracto sobre las células mononucleares periférica humana (CMSP), con el objeto de descartar su posible toxicidad a diferentes concentraciones para ser empleada con fines terapéuticos en el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas en humanos.

Materiales y métodos:
El extracto del pericarpio de la granada (PRE) fue licuado en agua destilada (25% p/v) y calentado hasta ebullición por 10 min, centrifugado (20.000g por por 30min), el sobrenadante fue autoclavado (1210C, 15min) y diluido para obtener una concentración de 1mg/ml: este fue el stock empleado en el ensayo. La solución de sulfato ferroso (FeSO4.7H2O) fue de 4.8mmol l-1, usada inmediatamente después de su preparación y protegida de la luz. Las muestra se prepararon al mezclar el extracto con el sulfato ferroso o agua en una proporción de 2.3:1 (extracto:sulfato ferroso o extracto:agua, según el caso).
Las células mononucleares (CMSP) fueron obtenidas de sangre periférica de donantes voluntarios sanos, por venopunción en el antebrazo derecho, diluidas v/v con solución buffer fosfato salina (PBS) y colocadas, lentamente, sobre un medio de separación de linfocitos (ficoll-hypaque), centrifugadas a 2000 rpm durante 30 min a 18 C. Transcurrido este tiempo se extrajo la capa media de la separación resultante, la cual contenía las CMSP. Las células fueron lavadas 3 veces con PBS y centrifugadas (1300 rpm por 10 min a 18 C). Después del último lavado se resuspendieron en 5 ml de medio de cultivo RPMI 1640 suplementado con 5% de suero bovino fetal y antibióticos. Se realizó el contaje celular usando un microscopio invertido. Las células fueron resuspendidas en medio hasta una concentración final de 2 x 106 cel/ml y 100 l, de esta suspensión celular fueron colocados en cada pozo de una placa de poliestireno de 96 pozos. Cada ensayo fue realizado por duplicado. Las células fueron incubadas con PRE a concentraciones de 25, 12.5, 10, 7.5, 5 y 2.5 g/pozo con y sin la adición de sulfato ferroso, por 48 horas. Finalizado el período de incubación se determinó la viabilidad celular por el método de exclusión con el colorante trypan blue y se comparó con el grupo control o células incubadas sin el extracto.

Resultados:
El porcentaje de viabilidad celular de las muestras incubadas con el extracto más sulfato ferroso fue de 99% para todas las concentraciones usadas en el estudio, cuando se comparó con el control. La viabilidad celular de las muestras incubadas con el extracto sin sulfato ferroso estuvo en el rango entre 99 y 98%. No hubo diferencias significativas en la toxicidad del compuesto cuando se le adicionó el sulfato ferroso. Estos resultados demuestran una baja toxicidad del extracto usado sobre las células mononucleares humanas y garantizan su uso en estudios en humanos sin riesgo tóxico.



Búsqueda de marcadores para la estandarización de extractos de rizoma de Smilax domingensis Willd

Cruz S.1, Cáceres A.1, Costa MC.2, Costa M.2, Teixeira A.2 y Cañigueral S.3

1Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, USAC, Guatemala.
2 INETI, Lisboa, Portugal.
3Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona, España.

El aprovechamiento del género Smilax es un buen ejemplo del potencial de las plantas medicinales en los bosques de Mesoamérica, no sólo por su importancia en la medicina local, sino porque ha sido un producto de exportación desde hace 500 años. Desde 1996 se inició un proceso de recopilación y documentación de las especies vegetales americanas más ampliamente usadas en la fitoterapia regional, en el marco de RIPROFITO-CYTED, se generó el proyecto PROMFI que pretende elaborar monografìas de calidad, eficacia y seguridad, para ser utilizada por los sectores académico, industrial y gubernamental. En el proyecto se seleccionó como una de las plantas a S. domingensis, con el objetivo de desarrollar una metodología analítica para estandarizar extractos y tinturas por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) e identificar los principales marcadores químicos.
El rizoma de S. domingensis se obtuvo de un cultivo bajo manejo, en Suchitepéquez, Guatemala, se prepararon los extractos por percolación utilizando alcohol al 95. Para la metodología analítica se utilizaron los siguientes reactivos: Metanol, acetonitrilo, ácido acético, fórmico, y Agua Ultrapura de Milli Q. Los estándares usados sarsasapogenina, smilagenina, rutina, ácido clorogénico, hiperósido, mircetina, quercetina y kaemferol; y una mezcla de catequinas y alcaloides (cafeína, teobromina, teofilina, catequina, epicatequina, epigallocatequina, gallato de epicatequina, epigallocatequina y gallocatequina), esteroides (colesterol, estigmasterol, sarsasapogenina, estigmastenol y sitostenol).
Para el análisis se usó un espectrofotómetro de masas Cole Parmer Instrument 74900, Bruker Esquire 3000, HPLC Waters Alliance 2695 con un Dual Absorbance Detector Waters 2487. Columna Zorbax Agilent Eclipse XDB C18. Se compararon dos métodos, usando en el método 1 como disolvente A: Agua con 0.5 % de ácido acético, B: Acetonitrilo 0.5% de ácido acético (88:12) y 280 nm; y el método 2 como disolvente A: Ácido fórmico 0.1%, B: Acetonitrilo (80:20) y 203 y 254. Se realizaron inyecciones directas de los patrones por MS en las siguientes condiciones: Fase móvil: Acetonitrilo-Agua (1:1), dilución de los patrones con la fase móvil (20  µg/mL).
Los compuestos identificados en tinturas y extractos de S. domingensis por comparación con patrones utilizando dos métodos diferentes por HPLC MS son ácido clorogénico e hiperósido.
Los compuestos cuya presencia es propuesta por el espectro de masas y comparado con el TR relativo con datos de la literatura son: ácido cafeico, quercitrina (ramnósido de quercitina) e isorhoifolina (rutenósido de quercetrina) y posiblemente mircetina. Las proporciones relativas de integración de los picos en los cromatogramas de HPLC sugieren que el ácido clorogénico, hiperósido y quercitrina son los mayormente presentes en los extractos alcohólicos de todas las muestras de Smilax analizadas.



Potencial antioxidante del extracto bruto y fracciones de Ouratea parviflora

Carbonari K. A1., Yunes R. A.2, Felício J.D.3, Gonçalez E.3, Rossi M.H3 y Pedrosa R.C.1

1Depto. de Bioquímica, Universidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis/SC
2Depto. de Química, Universidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis/SC
3Centro de Sanidade Animal do Instituto Biológico, São Paulo/SP.

Ouratea parviflora (corazón de bugre) es popularmente utilizada en Brasil para el tratamiento de úlceras y enfermedades gástricas y reumáticas. Los estudios fitoquímicos mostraron la presencia de varios flavonoides como rutina, apigenina, amentoflavona y agastiflavona. Se sabe que puede existir una correlación entre una propiedad antioxidante de los extracto de una planta y su capacidad de inhibir o prevenir algunos procesos patológicos porque especies reactivas de oxigeno participan de los mismos. El objetivo de este trabajo fue estudiar el potencial antioxidante de la Ouratea paviflora dado su uso popular en enfermedades asociadas a la generación de oxígeno reactivo. Esta actividad antioxidante fue analizada por diferentes métodos: captación de radical DPPH , generación de radical hidroxilo por la oxidación de desoxiribosa y scavenger del anión superóxido (02-.) por la reducción del Nitro Blue tetrazolium (NBT). Fueron estudiados el estricto bruto (OP) y las fracciones hexánica (OP1), clorofórmica (OP2), acetato de etilo (OP3), hidroalcohólica (OP4) y metanólica (OP5) utilizando como control positivo el extracto de Ginkgo biloba de conocida acción antioxidante. El extracto bruto y la fracción hidroalcohólica tienen una buena actividad antioxidante: frente al radical DPPH (IC50 (OP) = 145,73 + 1,03 g/ml y (OP4) = 111,91 + 1,0 g/ml) en relación al Ginkgo biloba (63,02 + 0,10 g/ml), frente al scavenger de 02-. (IC50 (OP) = 294,31 + 10,93 g/ml y (OP4) = 182,31 + 14,52 g/ml ) y scavenger de OH. (IC50 (OP) =19,41 + 0,8 g/ml y (OP4) = 6,62 + 0,5 g/ml). Estos resultados permiten concluir que tanto el extracto bruto de Ouratea parviflora como la fracción hidroalcohólica presentan una clara actividad antioxidante frente al radical DPPH, radical hidroxilo y al anión superóxido.



Screening of Casearia sylvestris S.W. (Flacourtiaceae) extract and fractions for antioxidant activity

Schoenfelder T. 1, Yunes R.A. 2 , Predrosa R.C. 3 and Daminelli E.N. 1

1Depto. de Farmácia, Universidade do Extremo Sul Catarinense, Criciúma.
2Depto de Química, Universidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis
3Depto de Bioquímica , Universidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis

Casearia sylvestris S.W. in Brazil is used in popular medicine due to several pharmacological properties such as anti-inflammatory, anti-ulcer, antiseptic and anaesthetic. Phythochemistry study showed terpenes, triterpenes, flavonoids and saponins compounds. Methanolic crude extracts from leaves (CS) and 2 fractions of Casearia sylvestris S. W. [hexane (CS1), dichloromethane (CS2)] were studied in order to ascertain their inhibitory effect against DPPH and hydroxyl free radical. Antioxidant activity was measured using the DPPH radical photometric assay in a process guided by its discoloration (Brand W., 1995). The hydroxyl radical (HO") was generated from the Fenton reaction of hydrogen peroxide with Fe (III)-EDTA. The chromogen generated by the oxidation of deoxyribose was determined spectrophotometrically at 532 nm. The antioxidant activity of this extract and fractions was compared with standard solutions of Ginkgo biloba. The results showed that all extract and fractions of Casearia sylvestris have a DPPH-scavenging ability [IC50 (CS) = 298,8 + 0.15 g/ml; IC50 (CS1) = 533,77 + 0.11 g/ml; IC50 (CS2) = 153,83 + 0.13 g/ml;, and that, in general, their scavenging potential was not more pronounced than that of Ginkgo biloba (IC50 = 54,615 + 0.0 g/ml). The plant extract and fractions were not effective in avoiding the oxidation of deoxyribose The results suggest that this plant species has significant in vitro free radical scavenging capacity and antioxidant properties. It is possible that this effect is not associated with the hidroxyl radical.



Antioxidant activity of methanolic extract of Equisetum arvense in vivo

Ferreira V.B.N.1, Christmann I.L.1, Pedrosa R.C.1, Wilhelm D.1, Cechinel V.F.2 and Yunes R.A.1

1Departments of Ecology/Zoology, Chemistry and Biochemistry - Universidade Federal de Santa Catarina
2NIQFAR-Universidade do Vale do Itajaí

Equisetum arvense has many pharmacological properties and has popular use as anti-inflammatory, diuretic and anti-hyperplasic prostatic agent. These properties led us to study the antioxidant properties of this plant considering that reactive oxygen species participate in various human diseases. Adult male rats were treated for 14 days with 200 mg/kg b.w.(i.p) of methanolic plant extract and the positive control treated with selegilina salt (4 mg/kg b.w., i.p.) an inhibitor of monoamineoxygenase B and potent antioxidant by brain. 24 h after the last day of treatment the rats were killed by cervical dislocation and the brain were rapidly removed and striatum and frontal lobe were immediately homogenized. Determination of thiobarbituric acid reactive species was used for assessing endogenous lipid oxidation measured spectrophotometrically at 535 nm in brain rat. Reduced glutathione, superoxide dismutase activity, catalase activity, glutathione reductase activity and glutathione S-transferase activity were determined. The thiobarbituric acid reactive species levels were diminished by E. arvense treatment and selegilina (208.73 + 19.14 and 199.14 + 7.83 mol.g-1). The reduced glutathione levels increased under plant extract treatment (3.64 + 0.21 nmol.l-1) but not with selegilina treatment (2.14 + 0.13 mmol.l-1). There were no change with other citoprotective enzymes, except a increase in glutathione reductase activity activity in the group treated with selegilina (2.48 + 0.41 mol.min-1g-1). The results suggest that the E. arvense presents a significant antioxidant activity in vivo, a fact that encourage us to perform future studies about antioxidant potential in oxidative stress condition.



Effects of onopordopicrin on acute trinitrobenzene sulphonic acid-induced colitis in rats

de Almeida A.B.A.1, Hidalgo M.S.2, Santos L.C.3, Vilegas W.3, Tiene M.R.F.3, Souza Brito A.R.M.1 and de la Lastra C.A.2

1Departament of Physiology-State University of Campinas-Brazil
2Departament of Pharmacology-University of Seville-Spain
3Departament of Pharmacology-Paulista State University-Brazil.

Various pharmacological and toxicological studies have been fulfilled with the specie Arctium lappa L. (Asteraceae), which shows a diversity of therapeutic activities such as hepatoprotective, antioxidant, antiinflamatory and analgesic. In a previous study we have observed an important antiulcerogenic activity of a chloroformic fraction isolated from leaves of Arctium lappa. Oxygen free radicals, neutrophils and proinflammatory cytokines are clearly involved in the pathogenesis of intestinal bowel disease. Accordingly, in this study, we examined the effects of chloroformic fraction (ONP), which have as main constituent the sesquiterpen lactone onopordopicrin, on the acute experimental trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)-induced colitis in rat. ONP (25 and 50 mg/kg/day) was administered by oral gavage 48, 24 and 1h prior to the induction of colitis and 24h later. The animals were sacrificed 48h after induction of colitis. Colons were removed and lesions were blindly score according to macroscopic and histological scales. Inflammation response was assessed by neutrophil infiltration, determined by histology and myeloperoxidase activity (MPO). Indeed, we evaluated mucosal tumor necrosis factor TNF-alpha levels and total glutathione production. Furthermore, cyclooxigenases (COX)-1 and -2 expression by immunohistochemistry and Western Blotting was also assessed. Inflammation following TNBS was characterized by increased colonic wall thickness, edema, diffuse inflammatory cell infiltration in the mucosa and necrosis. At 2 days treatment with 25 or 50 mg/kg of ONP ameliorated colonic damage score. However MPO activity, mucosal TNF-alpha production and glutathione total remained unchanged. Compared with inflamed colon, no changes in staining for COX-1 was observed in colon of ONP-treated rats in contrast, COX-2 expression was increased. In conclusion, these findings confirm the protective effects of ONP in acute experimental colitis.



Attivita' di oli essenziali da specie mediterranee contro microrganismi di interesse alimentare

Di Pasqua R.1, De Feo V.2, Mauriello G.1 e Quaranta E.2

1Dipartimento di Scienza degli Alimenti, Università degli Studi di Napoli "Federico II"
2Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno

Negli ultimi venti anni i consumatori hanno chiaramente mostrato una maggiore preferenza nei confronti di alimenti poco processati oltre che caratterizzati da un basso contenuto di additivi sintetici. Gli antimicrobici naturali possono contribuire al mantenimento della sicurezza e al prolungamento della vita commerciale degli alimenti, riducendo la presenza di microrganismi patogeni e/o alterativi.
Gli oli essenziali e i loro principi attivi, oltre a trovare largo impiego nella medicina complementare o a scopo terapeutico, sono ampiamente utilizzati come aromatizzanti e antiossidanti negli alimenti, ma negli ultimi anni molte ricerche ne hanno evidenziato un potenziale uso come agenti antimicrobici.
In questo studio è stata determinata l'attività di 12 oli essenziali, estratti da piante aromatiche appartenenti alle famiglie delle Lamiaceae, Apiaceae e Verbenaceae, contro microrganismi alterativi e patogeni di origine alimentare, sia Gram-negativi che Gram-positivi. Gli oli essenziali, ottenuti per distillazione in corrente di vapore secondo le procedure standard previste dalla Pharmacopoeia europea, sono stati ottenuti da Carum carvi L., Foeniculum vulgare Miller, Pimpinella anisum L. (Apiaceae); Hyssopus officinalis L., Lavandula angustifolia L., Majorana hortensis L., Melissa officinalis L., Ocimum basilicum L., Origanum vulgare L., Salvia officinalis L., Thymus vulgaris L. (Lamiaceae); Verbena officinalis L. (Verbenaceae).
I microrganismi utilizzati in questo studio sono di seguito riportati: Gram-negativi: Escherichia coli O157:H7, Salmonella thyphimurium, Pseudomonas spp.; Gram-positivi: Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Brochotrix thermosphacta, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus delbrueki subsp. lactis, Enterococcus faecalis, Lactococcus lactis subsp lactis, Lactococcus plantarum and Lactococcus garvie.
L'attività antimicrobica di ogni olio è determinata depositando 5 µl di una soluzione di olio e metanolo (1:5) sulla superficie di un substrato agarizzato precedentemente inoculato con il ceppo indicatore. Dopo assorbimento dell'olio le piastre sono state incubate per 24 ore. La presenza di un alone di chiarificazione indicava una inibizione della crescita del ceppo indicatore. Successivamente, per ogni olio che mostrava attività antimicrobica, è stata determinata la concentrazione ad azione batteriostatica (concentrazione minima inibente) e battericida (concentrazione minima letale).
I ceppi microbici Gram-negativi risultavano più sensibili rispetto ai Gram-positivi, in particolare Escherichia coli O157:H7 e Salmonella risultano sensibili a tutti gli oli testati. Tra i Gram-positivi Brochotrix thermosphacta risulta il microrganismo più sensibile mentre i batteri lattici mostrano un'alta resistenza, infatti solo pochi oli sono in grado di determinarne l'inattivazione e sempre a concentrazioni superiori all'1%.

 

Phytochemical analyses of Lauraceous species

de Luca A.N.1, Nunomura S.M. 2 and Yoshida M.3

1Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista - Brazil
2Coordenação de Pesquisa em Produtos Naturais, Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia - Brazil
3Departamento de Química Fundamental, Instituto de Química, Universidade de São Paulo - Brazil.
E-mail: andrluca@posgrad.iq.unesp.br

Chemical studies on species of Lauraceae have revealed the occurrence of a variety of compounds including neolignans and lignans, aporphine and benzylisoquinoline alkaloids, flavonoids, pyrones and sesquiterpenes. These species are distributed since Amazon Forest to Southeast Rain Forest of Brazil and many species never have been studied. To improve the knowledge about the secondary metabolites of Lauraceae species from Amazon and to compare with the metabolites of species dispersed on Southeast Region, various species of these localities were selected to be analyzed. The extracts obtained from plant material were submitted to liquid-liquid partition and the residues of obtained fractions analyzed by H1 NMR spectra and HPLC profiles. These analyzes allowed to choose the species to be studied.
From Amazon Forest were selected the Licaria rodriguesii and the Aniba parviflora. During the course of chemical studies on leaves of L. rodriguesii was isolated the sesquiterpene -eudesmol, the triterpen -sitosterol and the glycosyl flavonol quercitrin. The isolation carried out on A. parviflora extract afforded two pyrones as major constituents, the dihydromethysticin and tetrahydroiagonin. The pyrones are responsible by anxiolytic activity and antidepressant effect of the kava-kava extracts.
The species Ocotea elegans, Licaria armeniaca and Nectandra megapotamica were collected at São Paulo State. Two substances were isolated from extracts of Ocotea elegans, the sesquiterpene 7-hydroxycalamenene and the glycosyl flavanol astibin. From leaves of Licaria armeniaca and Nectandra megapotamica were isolated two hexahydrobenzofuran neolignans and three tetrahydrofuran lignans, respectively. Theses lignans are PAF antagonist and have activity against Trypanosoma cruzi. The isolation and structural elucidation of these substances were based on usual chromatographic and spectrometric techniques.

 

Chemical and pharmacological approaches on Copernicia cerifera Miller

Pinto V.1, de Almeida Souza A.C.1, Mello G.2, Silva C.G.3, Panek A.D.3, Matheus M.E.2, Días P.2, Araújo E.C.3 and de Sousa F.1

1Departamento de Produtos Naturais e Alimentos-Faculdade de Farmácia-UFRJ
2Departamento de Farmacologia Básica e Clínica - ICB - CCS - UFRJ
3Departamento de Bioquímica - CT - UFRJ

Copernicia cerifera Miller, known popularly as carnaúba, belongs to the Palmae family. This family encompasses between 2500 and 3500 species into about 236 genera. The studied species occurs in abundance in the north and northeast regions of Brazil, mainly in the State of Piauí and Mato-Grosso in a region called Pantanal matogrossense. Carnaúba is very important by the economic point of view being used by populations where it is native for several facilities. Its main industrial utilization is for the factories to extract the wax from leaves.
The phytochemical study of carnaúba leaves showed several long chain fatty acid mixtures in the hexanic and ethyl acetate partitions come from the crude ethanolic extract as well as in the crude haxanic extract. Among all the long chain fatty acids identified in the leaves extracts, only the hexadecanoic acid (palmitic acid) and octadecanoic acid (estearic acid) have been found in the fruit hexanic extract. Besides the fatty acids it was found one sesquiterpenoid, one diterpenoid, few hydrocarbons, few benzoic acid derivatives and few arylpropanoids.
By the pharmacological point of view, several methodologies were assayed with carnaúba extracts: antioxidant activity (in vitro and in vivo), analgesic, anti-inflammatory and anti-microbial activities.
The antioxidant activity of all assayed extracts from carnaúba showed a very good activities by the DPPH methodology, being the results comparable to that found for the Ginkgo biloba standardized extract (Egb 761), with recognized antioxidant activity very used in several therapeutical protocols. Some extracts had an activity compared with that for rutin, a flavonoid with a very huge antioxidant activity, mainly in the higher concentration. For the in vivo test, using the Saccharomyces cerevisiae eukariotic cell model, it could be shown a good protection against oxidation by tert-butyl hydroperoxide for two extracts of carnaúba while the Ginkgo biloba extract has shown no activity.
Concerning the analgesic activity the best results were achieved for the crude ethanolic extracts of leaves and hexanic extract of fruits. In the inhibition of writhing produced by acetic acid i.p. injection, they have shown an activity compared with that observed for the indometacin. In hot plate and tail-flick tests they were also the best being the crude ethanolic extract of leaves superior than the hexanic extract of fruits in the later test.
In the anti-inflammatory activity, both by the formalin test and ear edema test, the crude ethanolic extract of leaves showed the best results.


Effect of dryness time on the essential oil content and its antimicrobial activity in Ocimum basilicum L

Quintanilha D.1, Rijo E.2, Conrado R.3, Sales D.4, Sales C.4, de Sousa F.2 and Machado R.1


1Núcleo de Pesquisas de Produtos Naturais - CCS - UFRJ
2Departamento de Produtos Naturais e Alimentos, Faculdade de Farmácia-CCS-UFRJ
3Departamento de Botânica, Instituto de Biologia - CCS - UFRJ
4Departamento de Microbilogia Professor Paulo de Góes - CCS - UFRJ

E-mail: dqfalcao@nppn.ufrj

Ocimum basilicum L., is a species of Lamiaceae family, used all around the world as condiments in food preparation and also in the folk medicine to treat different kinds of pathologies. Its essential oil composition has already been established by GC-MS in the literature as well as its anti-microbial properties. However, the aim of this work is to correlate two different dryness times and its influence in the anti-microbial activity. O. basilicum was collected in Espírito Santo state (Brazil) in February 2004 and dried at room temperature. After ten days the essential oil was extracted by hydrodistillation using Clevenger-type apparatus, during 2 hours, with only half part of the collected plant material. This essential oil was called ALFAVACA 1 and yielded 1,5% of the total used plant. The other half part, dried for one week more had its essential oil extracted by the same way, during almost 5 hours. The essential oil obtained in this second extraction was named ALFAVACA 2 and yielded 1,9% of the total used plant. Both essential oils were analyzed by GC-MS, under the same conditions, in order to determine chemical differences among them. Both essential oil anti-microbial properties were evaluated against six different strains: Staphylococcus aureus (MRSA), Fonsecaea pedrosoi, Trychophyton rubrum, Candida albicans and Cryptococcus neoformans and the activities are shown on Table 1 as diameter of inhibition haloes (cm). The positive control was made with Vancomicine for S. aureus strains and with Anfotericine B for the other tested strains. Both essential oil chemical composition seemed to be the same, although the content of ALFAVACA 1 minor compounds increased in ALFAVACA 2 essential oil leading to a higher anti-microbial effects against all strains tested, the exception being Staphylococcus aureus strain, which showed the same response for both essential oils. These results indicate the correlation between the dryness time and the essential oil content and also the influence in the anti-fungic and anti-bacterial properties achieved, probably related to the enhancement of the other constituents in very small concentration in ALFAVACA 1 essential oil, which appeared more concentrated in ALFAVACA 2 essential oil.

Table 1. Anti-fungic and anti-bacterial properties are shown as diameter of inhibition haloes (cm) using vancomicine for S. aureus and MRSA strains and anfotericine B for the others strains as positive control.

  Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus (MRSA) Fonsecaea pedrosoi Trychophyton rubrum Candida albicans Cryptococcus neoformans
Alfavaca 1
1,8
1,5
1,8
3,3
2,5
3,0
Alfavaca 2
1,8
1,8
2,0
4,5
3,5
4,0
Control
1,5
1,6
2,1
1,5
1,8
2,5

 

Antioxidant activity of ethanolic extracts from Calceolaria chelidonioides Humb. Bonple Kunth

Quintanilha D.1, Rijo E.2, de Sousa F.2 and Machado R.1

1Núcleo de Pesquisas de Produtos Naturais - CCS - UFRJ
2Departamento de Produtos Naturais e Alimentos, Faculdade de Farmácia-CCS-UFRJ

E-mail: dqfalcao@nppn.ufrj.br

Calceolaria chelidonioides is a species that belongs to the Scrophulariaceae family. It is found only in high altitudes and it is popularly known in Brazil as "botão-de-ouro" and "saquinho" and it is used in folk medicine to treat some kinds of cancer. It was collected in Macabú, a small town in the Rio de Janeiro's mountain area, in September 2003. Free radicals are one of the most important agents for health damages known nowadays, so, the radical scavenging ability of plant extracts is a desired activity to be investigated. The ethanolic extracts from different parts of C. chelidonioides were evaluated about its antioxidant properties using the free and stable radical 2,2-diphenyl-1-picrilidrazyl (DPPH) assay. The different parts of this plant were dried, powdered and extracted with ethanol by statical maceration. Five different extracts were obtained: those from flowers, leaves and flowers, roots, stems and one encompassing a mixture of flowers, leaves and roots. Ginkgo biloba standard extract (Egb761) was used as a positive control. Table 1 shows the antiradical effect demonstrated by all five extracts related to their antioxidant capacity comparing with the control. All, except roots extract, has showed some antioxidant activity mainly in the higher tested concentration (250 g/ml). These results showed that aerial part extracts from this species could have interesting pharmacological properties, highlighting its pharmacological capacity, indicating the need for further different assays, including other antioxidant activity methodologies.

Table 1. C. chelidonioides ethanolic extracts as radical scavenger using Ginkgo biloba as control.

µmg/mL
Ginkgo biloba
Stems
Flowers
Roots
Flowers+leaves
Flowers+leaves+roots
5
4,57 ± 1,51
5,75 ± 2,58
1,14 ± 0,47
3,79 ± 0,23
11,25 ± 0,18
5,43 ± 2,26
10
10,03 ± 3,25
7,23 ± 1,88
3,52 ± 1,62
5,30 ± 0,88
14,64 ± 0,51
7,37 ± 3,75
25
28,14 ± 1,37
13,35 ± 2,46
8,91 ± 1,21
12,16 ± 0,14
24,09 ± 1,19
15,73 ± 2,56
50
57,02 ± 0,55
26,75 ± 4,43
18,7 ± 0,86
23,65 ± 0,57
36,25 ± 1,48
32,42 ± 4,22
125
90,07 ± 0,82
65,14 ± 2,78
46,26 ± 0,97
51,17 ± 0,83
76,25 ± 0,39
62,46 ± 1,47
250
95,23 ± 0,43
89,2 ± 0,26
82,92 ± 1,18
56,75 ± 1,24
90,72 ± 1,13
89,27 ± 0,60


Antinociceptive activity of Polygala paniculata L. (Polygalaceae)

Pereira F.L.1, de Oliveira S.B.2, Reis G.3, Dias P.3, Matheus M.E.3, Salgueiro C.L.1 and de Sousa F.2

1Laboratório de Fisiologia Vegetal, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Bloco G, sala G2-050, Centro de Ciências da Saúde. Universidade Federal do Rio de Janeiro, Cidade Universitária, RJ, Brasil.
2Departamento de Produtos Naturais e Alimentos, Faculdade de Farmácia, Centro de Ciências da Saúde, Bloco A, segundo andar, sala 4, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Cidade Universitária, RJ, Brasil.
3Departamento de Farmacologia Básica e Clínica - Centro de Ciências da Saúde, Bloco K, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Cidade Universitária, RJ, Brasil.

Polygala paniculata L. (Polygalaceae) is a herb widespread all around in Brazil, occurring in altitudes between 10 and 2300 m. This species is popularly used for the treatment of bruises due to the presence of methyl salicylate, which acts as a blood activator in the place where it is applied. This study had as the main aim evaluate the antinociceptive potential of Polygala paniculata aerial parts, by the hot plate model. The ethanolic extract made from aerial parts of this plant was assayed in Swiss male mice (20-25g) in groups of 5 animals, being the extract applied in a doses of 200mg/kg. In the hot plate model, the animals were placed over a hot plate metal warmed in (550,5 ºC) being considered the time that each animal took to react for the thermal stimulus. The effects were evaluated after the extract application in 30, 60, 90 e 120 min. As a positive control fentanyl was used (0.3 mg/kg). The results were expressed as a percentage of antinociceptive activity. Polygala paniculata presented best effects at 60 and 90 minutes, applying the permanence time of animals in a hot plate in 107.94% and 134.79%. Fentanyl presented higher percentages of activities at 30 min (181.67%) and 60 min (167.37%). It is interesting to note that 90 min after the onset of treatment, the analgesic percentage shown with fentanyl (53.65%) was lower than that presented for the Polygala paniculata ethanolic extract, that has shown its maximum effect. These results indicate Polygala paniculata as a plant possessing compounds with very interesting central analgesic activity, justifying by this way, its popular use for the treatment of bruises and other algesic processes.



Analítica micrográfica cuali-cuantitativa de Celtis iguanaea (Jacq.) Sarg. (Celtidiaceae), N.V. "tala gateador"

Gatelli E.B., Aquila S., Debenedetti S.L., Carpano M., Castro M.T. y Spegazzini E.D.

LABRAM-Farmacobotánica y Farmacognosia, Depto. Cs. Biológicas. Facultad de Ciencias Exactas. Universidad Nacional de La Plata. Argentina.
E-mail: labram@biol.unlp.edu.ar

Celtis iguanaea, n.v. "tala gateador", es una especie que habita en regiones tropicales, entre 800 y 1200 m, desde México hasta Argentina. Es una planta leñosa, generalmente trepadora, con espinas y garfios, hojas simples con 3 venas desde la base, diclino-monoica.
Las partes aéreas son utilizadas en forma de infusión en casos de indigestión y desarreglos del estómago; edulcorado con miel para curar catarro y en el tratamiento de diarreas y disenterías y en el lavado de heridas. Se ha demostrado actividad antifúngica contra Candida albicans.
En el presente trabajo se describen los caracteres exo y endomorfológicos de los tallos y las hojas
Se analizó el material vegetal fresco y seco proveniente de dos instituciones reconocidas (LP y LPE). Las hojas fueron diafanizadas y se observó la epidermis para establecer valores cuantitativos índice de estomas e índice de empalizada, se realizaron transcortes de hoja y tallo y se tiñeron con safranina-fast-green. Se efectuaron observaciones y fotomicrografías con MO y MEB.
Hoja: Epidermis abaxial y adaxial de células irregulares de bordes lisos, interrumpida por tricomas con cistolitos y tricomas glandulares con cabeza y pie pluricelulares, hipostomática. En el corte transverso las epidermis son uniestratificadas, con mesófilo dorsiventral con parénquima en empalizada de 2-3 hileras de células, 5-6 hileras de parénquima lagunoso, en ambas idioblastos con drusas de oxalato de calcio. Estructura vascular de la nervadura media formada por un haz colateral con una hemibanda de idioblastos con drusas de oxalato de calcio. Abundante presencia de litocistes con cistolitos de CO3Ca en ambas epidermis. A nivel de la nervadura media se pueden observar domacios tipo bolsillo.
Tallo: En corte transverso presenta un sistema vascular anfivasal con un casquete de fibras sobre cada haz, médula colenquimatosa y tricomas tectores unicelulares.
El análisis exo-endomorfológico de hojas y tallos de Celtis iguanaea permite establecer parámetros micrográficos que permitan su reconocimiento y aportan datos útiles en el control de calidad de esta droga vegetal.



Tamizaje de la actividad antimicrobiana de 37 especies vegetales en el tratamiento de infecciones en Guatemala

Del Cid N.E, Solís G., Lorenzana L., Gaitán I., Paz A.M. y Cáceres A.

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala.

El presente estudio realizado durante los años 2002 y 2003 incluyó el tamizaje de 48 extractos etanólicos de 37 especies vegetales consideradas medicinales en Guatemala, con el objeto de evaluar su actividad in vitro contra bacterias y hongos levaduriformes.Para el tamizaje de la actividad antimicrobiana se utilizó un método de dilución en placas de agar-planta con una concentración de 1 mg/ml y una suspensión estándar de los microorganismos. Se hicieron cuatro repeticiones para cada microorganismo siguiendo el patrón de una plantilla de referencia. Las placas inoculadas se incubaron a 37ºC durante 24 horas, haciendo la lectura e interpretación del crecimiento después de este tiempo. Los microorganismos usados fueron: Bacterias gram positivo Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Bacillus subtilis ATCC 6051; Bacterias gram negativo Salmonella typhi ATCC 14028, Escherichia coli ATCC 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853; Bacteria alcohol ácido-resistente Mycobacterium smegmatis ATCC 607 y hongos levaduriformes Candida albicans ATCC 10231 y Cryptococcus neoformans CCQQ C-13.
La interpretación se hizo de la siguiente manera: se consideró un extracto con acción antimicrobiana al que mostró una placa sin crecimiento microbiano; extracto con acción negativa: placa que muestra crecimiento homogéneo. A todo extracto activo se le determinó la Concentración Inhibitoria Mínima en concentraciones decrecientes del agar-planta (1.0, 0.5 y 0.25mg/ml) y se interpretó de la manera descrita anteriormente.
De los 48 extractos incluidos en el estudio 33 no presentaron actividad y 15 fueron activos al tamizaje: 5 activos contra un solo microorganismo, 4 a dos microorganismos y 6 contra 3 o más microorganismos. Las especies que presentaron la menor concentración inhibitoria contra las bacterias y levaduras fueron: Cornutia pyramidata, Quercus crispifolia, Smilax domingensis y Piper aeroginosibaccum.



Efectos de las cargas parciales en los desplazamientos químicos de RMN de 13c de derivados de acidos 3-or-5-oxo-5,6-seco-colestan-6-oico

del Río R.E.1, Bohé L.2, Sandoval J.3, Achab S.2, Salvador J.L.1, Tapia I. 1 y Armenta C.1

1Instituto de Investigaciones Químico Biológicas de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, México.
2Insitut de Chimie des Sustances Naturalles, CNRS, 91198 Gif-sur-Yvette, Francia
3Facultad de Ciencias Químicas BUAP, Puebla, Pue., México

Recientemente se ha reportado la síntesis de unos derivados de ácidos carboxílicos esteroidales con una marcada actividad anticancerígena, estudios de relación estructura actividad revelaron que la parte hidrofóbica de la cadena lateral del colesterol y ácidos carboxílicos libres son cruciales para la actividad, por esta razón hemos iniciado el presente estudio.
Se realizó un estudio por resonancia magnética nuclear de 13C a 75.4 MHz de una serie de 12 derivados de ácidos carboxílicos de 5,6-seco-colesterol, se discuten los métodos de preparación y se analizó el efecto de las cargas parciales sobre el desplazamiento químico, principalmente de los carbonos de los carbonilos de derivados de los ácidos carboxílicos.
Las densidades de carga para todos los derivados se calcularon mediante el programa HYPERCHEM 5.11 Pro, usando método semiemípirico AM1 para realizar la optimización de la geometría. En la fígura de la derecha se muestran los resultados para el 3-acetoxi-5-ceto-5,6-seco-colesterol-6-azido.
Este estudio demuestra que hay una correlación lineal entre los desplazamientos químicos de los carbonilos de los derivados de ácido carboxílico y las cargas parciales, para estos átomos, a excepción de los derivados 3-OMe-5,6-seco-colesterol.
Los desplazamientos químicos de 13C se determinaron en soluciones clorofórmicas.



Antioxidant and anti-inflammatory activities of Penstemon gentianoides (Scrophulariaceae) and Barkleyanthus salicifolius (Asteraceae)

Dominguez M.1, Nieto A.1, Jeffery E.2 and Cespedes C.L.1

1Chemical Ecology Lab. Chemistry Institute, UNAM, Coyoacan 04510, Mexico DF, Mexico
2Department of Food Science and Human Nutrition, University of Illinois at Urbana-Champaign.(USA).

E-mail: ccespede@servidor.unam.mx

Penstemon gentianoides (Scrophulariaceae) and Barkleyanthus salicifolius (Asteraceae), are popular medicinal species employed by different indigenous people from Mexico, for the treatments of diverse ailments and other uses as insect repellent. Previous works report the presence of iridoids, terpenes and flavonoids; however there are not report about anti-inflammatory and antioxidant activities. Extracts and fractions were assayed against in vitro experiments, with the purpose of corroborate the anti-inflammatory activity, in the induce rat paw-edema by carrageenan and TPA (12-O-tetradecaoylphorbol acetate) induced mouse ear edema. In addition, is known that the antioxidant effects of some secondary metabolites is strongly related with anti-inflammatory activities, by this was carried out a screening of the extracts and fractions obtained from these plants, on the diverse antioxidant measurements for to relate both activities.
This work was supported in part by DGAPA-UNAM grant IN243802 and USAID-TIES-ENLACES-PROGRAM.

 

Caracterización fenotípica in vitro, mediante la expresión de vaca, de cepas de Helicobacter pylori y evaluación de la inhibición de la toxina por decocción de Minthostachys verticillata

Escobar F.1, Mattana C.2, Vega A.2, Demo M.1 y Sabini L.1

1Dpto. de Microbiología e Inmunología, Fac. de Cs. Ex.Fco-Qcas y Nat. UNRC. Córdoba, Argentina
2Dpto. de Microbiología, Fac. de Farmacia y Bioquímica, UNSL. San Luis, Argentina

Email: rlsabini@exa.unrc.edu.ar

Introducción:
Helicobacter pylori es una bacteria que habita el estómago humano induciendo desde gastritis a úlceras pépticas y neoplasias. Su virulencia depende de la presencia de los genes vacA y cagA que codifican para proteínas indicadas como factores de virulencia, una de ellas (VacA) exhibe capacidad vacuolizante en cultivos celulares, aunque solo el 50% de las cepas la producen.

Objetivo:
Caracterizar cepas de H. pylori aisladas de pacientes con sintomatología gástrica, sobre monocapas de células Vero, en su capacidad de expresar fenotípicamente la citotoxina VacA, evaluando en paralelo si dicha proteína es inhibida por decocción (D) de M. verticillata.

Metodología:
Producción de toxina: 18 cepas de H. pylori se cultivaron en caldo Müller-Hinton (CMH), con 5% de suero fetal bovino (SFB) y se incubaron a 37ºC en microaerofilia. Los sobrenadantes se filtraron por papel Whattman Nº2, se concentraron 30 veces mediante unidades de ultrafiltración y se esterilizaron con filtros Millipore (0,2 m).
Ensayo de citotoxicidad: Células Vero desarrolladas con el medio de crecimiento (MC): Eagle-Earle más 8% de SFB, 30 g/ml de glutamina y antibióticos, pH 7,2, fueron inoculadas con los sobrenadantes diluidos en el mismo medio, excepto que contenía 2% SFB (MM), más el agregado de 10mM de NH4Cl. Luego de ser incubadas 5 días a 37ºC se evaluó la alteración celular por visualización directa al microscopio óptico, previa tinción con May Grunwald-Giemsa. El control del sistema consistió en monocapas celulares más el agregado de: a) MM sólo, b) MM más NH4Cl y c) CMH.
Producción de decocción de M. verticillata: Para la obtención de esta fracción se siguió la metodología descripta por Mongelli y col 1995 . La concentración se determinó en el orden de 36,76 mg/ml. Determinación de la máxima concentración no citotóxica (MCNC) de decocción: Fue evaluada siguiendo la metodología descripta por Zanon y col 1999. El valor de MCNC registrado fue de 2,45 mg/ml.
Inhibición de la toxina por la decocción: Para evaluar la acción de D sobre la capacidad vacuolizante de las toxinas se siguió idéntico protocolo al del ensayo de citotoxicidad, sólo que el medio de inoculación además de la toxina contenía D a su MCNC. Fue incorporado un nuevo control consistente en células bañadas con MM más D a su MCNC, sin toxina.

Resultados:
Las toxinas indujeron modificaciones celulares con aparición de vacuolas intracitoplasmáticas. La tinción reveló alteración citotónica, núcleo normal desplazado y desprendimiento celular vs. células controles normales. La expresión del fenotipo vacuolizante fue positivo en un 72% de las cepas evaluadas, con títulos de 5 a 640. La fracción decocción de M. verticillata, a su MCNC, no ejerció acción inhibitoria sobre la capacidad vacuolizante de las toxinas a ninguna de sus diluciones ensayadas.

Conclusión: Los ensayos realizados en este estudio sobre cultivos de células Vero permitieron diferenciar cepas de H. pylori Tox+ de cepas Tox-, indicando la utilidad de este sistema celular para este tipo de ensayos.La alta frecuencia de cepas de H. pylori que indujeron alteraciones celulares revelan su impacto epidemiológico en la población humana evaluada con fuerte asociación a cuadros gástricos severos, tal como lo indica la historia clínica de cada paciente.Por la falta de inhibición de la decocción sobre la toxina VacA, señalada como uno de los factores de virulencia más importante para esta bacteria, se infiere que no se podría emplear esa fracción vegetal para disminuir la agresión ejercida por esa proteína vacuolizante. No obstante, estudios posteriores deberían realizarse empleando la misma fracción con el propósito de evaluar su capacidad para inhibir el desarrollo de cepas de H. pylori, productoras de VacA.



Estudo da atividade antimalárica e analgésica de Maytenus rigida Mart.

Estevam C.S.1, Neto V.F.2, Krettli A.U.2, Marcal R.M.3, Antoniolli A.R3 e Sant'Ana A.E.1

1Universidade Federal de Alalgoas - CCEN; Departamento de Química 57072-970, Maceió- Al Brasil
2Centro de Pesquisa René Rachou-FIOCRUZ 1715 30.190-002, Belo Horizonte - MG Brasil
3Universidade Federal de Sergipe-CCBS; Departamento de Fisiologia 49160000, Aracaju-SE Brasil

A família Celastracea que compreende cerca de 85 gêneros e contém de 800 a 900 espécies, possui uma ampla distribuição nas regiões tropicais e subtropicais de todo o mundo. São plantas lenhosas, arbustivas ou arbóreas com folhas inteiras. Quimicamente é caracterizada pela presença de compostos terpenoídicos de natureza fenoldienônica com propriedades quelantes e que apresentam grande atividade biológica. Os compostos triterpênicos até agora obtidos são pentacíclicos das séries friedelano, oleanano e lupano que possuem comprovada ação antiinflamatória. Varias plantas desta família são de uso na medicina popular no Brasil, principalmente aquelas pertencentes ao gênero Maytenus. São espécies arbustivas ou arbóreas. Neste gênero vários compostos têm sido isolados tais como triterpenos com atividade antitumoral, triterpenos quinônicos e diméricos com atividade cititóxica, alcalóides piridinicos sesquiterpênicos com atividade imunossupressora e repelente de insetos. A espécie Maytenus rigida Mart, conhecida como Bom-homem, Bom-nome, Cabelo-de-negro, Casca-grossa e Pau-de-colher é uma arvore de pequeno porte de uso na medicina popular. A entrecasca do caule entra na composição do vinho da jurema nos cultos afro-brasileiros. É utilizada pela medicina popular para os casos de dores em geral, infecções e inflamações. Trabalhos anteriores relatam a ocorrência do triterpeno 6 -Hidroxi-3-oxo-lupan-20(30)-eno, no extrato etanólico de M. rigida. Em nosso trabalho o extrato etanólico da entrecasca apresentou atividade antimalárica in vivo e in vitro e ação analgésica in vivo.



Estudo da atividade larvicida de uma Annona do cerrado brasileiro

Ferreira M.R.1, de Souza J.2 e Goulart A.E.1

1 Departamento de Química-CCEN, Universidade Federal de Alagoas, Brazil
2 Departamento de Química Fundamental-CCEN, Universidade Federal de Pernambuco, Brazil

A família Annonaceae, em especial o gênero Annona tem sido alvo de investigação constante por apresentar inúmeras substâncias de interesse biológico. O gênero Annona se destaca pela diversidade estrutural de substâncias isoladas e pelo amplo espectro de atividades biológicas observadas, sendo as mais comuns as atividades antimicrobiana, pesticida e antitumoral. Como exemplos podemos citar as acetogeninas e os alcalóides.
Uma espécie desta família e do gênero Annona, do cerrado brasileiro, foi selecionada para o estudo da atividade larvicida frente às larvas do mosquito Aedes aegypti. A espécie Annona crassiflora Mart é nativa do Brasil e é popularmente conhecida como araticum. Seus frutos são comestíveis e sua semente é utilizada na medicina popular contra picada de cobra e para combater a diarréia. Desta espécie já foram isolados alcalóides como a reticulina, anonaina, assimilobina e liriodenina, e acetogeninas como a crassiflorina e araticulina que possuem atividade citotóxica e antitumoral respectivamente
Um dos mais importantes problemas de saúde da América Latina tropical e em especial do nordeste brasileiro é a dengue. A descoberta de plantas que possam ser úteis no controle do vetor é extremamente valiosa já que os larvicidas e inseticidas sintéticos apresentam sérios problemas de toxicidade.
Uma seleção inadequada de uma determinada planta pode levar ao desperdício de tempo e de recursos. Acredita-se que plantas que apresentam pelo menos um tipo de atividade biológica possam apresentar outras atividades e o conhecimento do uso etnobotânico de plantas trás uma vantagem enorme sobre o uso randômico de extratos na procura de novos inseticidas e larvicidas.
A Annona crassiflora foi selecionada para estudo de sua atividade larvicida de acordo com suas informações etnobotânicas. Neste trabalho o extrato etanólico bruto das sementes desta planta apresentou atividade larvicida frente às larvas do mosquito Aedes aegypti com concentração letal (CL50) igual a 33,4ppm. O isolamento guiado pelo bioensaio levou ao isolamento de duas amidas e tres acetogeninas.



Antiproliferative action of aqueous extract of Ilex paraguariensis on a lymphoma T line

Anesini C.1, Filip R.1, Barreiro M.L.2, Cremaschi G.2, Ferraro G.1

1Instituto de Química y Metabolismo del Fármaco (IQUIMEFA-UBA-CONICET)
2Centro de estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFYBO-CONICET). Junin 956 (1 113), Buenos Aires, Argentina.

E-mail: canesini@yahoo.com.ar

Ilex paraguariensis St. Hil. (Aquifoliaceae) is widely used in northeastern Argentina, southern Brazil and eastern Paraguay. The product of its industrialization, "Mate" or "Yerba Mate" is used to prepare a tea like beverage (infusions or decoctions) appreciated for its peculiar flavor, stimulating and nutritional properties. Caffeoyl derivative compounds, flavonoids and xantine have been isolated from this specie. In the present study, the antiproliferative activity of an aqueous extract from I. paraguariensis, was analyzed on a murine Lymphoma T line (BW 5147) and on normal lymphocytes isolated from mice lymphatic nodules. Chlorogenic acid and caffeic acid were identified, isolated, quantified and the antiproliferative action of these compounds on the same cells, was determined in order to relate the antiproliferative action with the presence of these substances in the analyzed extract.
Leaves of I. paraguariensis were collected in their original habitat and identified employing morphological, anatomical and histochemical techniques. The material was ground to a fine powder, boiled with water during 20 min and cooled at room temperature down to 40-45°C. After filtration, extracts were lyophilized. Chlorogenic and caffeic acids were determined by high Performance Liquid Chromatography with UV detection (column: IB-SIL RP 18 (5um., 250x 4.6 mm. I.D.). The antiproliferative activity was determined by the uptake of tritiated thymidine. The results are expressed as effective medium concentration (EC50) (µg/ml) and represent the Media SEM of three or more experiments performed by triplicate. Student's "t" test for unpaired values were used to determine the levels of significance. Significantly differences if P < 0.05.
Chlorogenic acid and caffeic acid were identified and quantified (chlorogenic acid: 2.80 0.30; Caffeic acid: 0.023 0.004 (g/100 g dried plant material).
I. paraguariensis extract presented antiproliferative action on tumoral and normal lymphocytes, being more potent on tumoral cells: - Tumoral cells EC50: 18 + 1,0 µg/ml; - Normal lymphocytes EC50: 64 + 5,0 µg/ml). Chlorogenic acid presented antiproliferative action on tumoral and normal lymphocytes. On tumoral cells the potency was higher at a culture time of 72 h: EC50 24 h: 260 + 20 µg/ml; EC50 72 h: 180 + 10,0 µg/ml); on normal cells, there was not differences between 24 nor 72 h of cell culture: EC50 24 h: 310 + 30 µg/ml; EC50 72 h: 319 + 25,0 µg/ml). Caffeic acid did not exert antiproliferative action.
The extract from I. paraguariensis presented a selective antiproliferative action on tumoral lymphocytes cells, Chlorogenic acid was one of the compound that exerted selectively antiproliferative activity on tumoral cells. The pure isolated compound presented low activity in comparison with the crude extracts, this could be possible by the fact that, the extracts also presented others compounds like flavonoids and saponins which could exert also antiproliferative activity.



Evaluation of the choleretic and antioxidant properties of Eupatorium buniifolium aqueous extract

Muschietti L., Gorzalczany S., Kartin L., Repetto M., Ferraro G., Martino V. and Acevedo C.

Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Argentina.

Higher plants used in ethnomedicine can provide important lead compounds in modern drug development. However, the search of pure active principles is time consuming and expensive. A standardized active extract or a standardized fraction may provide effective herbal formulations.
Thus, the aim of this study was to evaluate the choleretic and antioxidant activities of the aqueous extract of E. buniifolium in order to validate the traditional uses as a digestive and for the treatment of liver diseases (Saggese, 1959). Moreover, the total polyphenol and flavonoid content was determined.
The results showed that the oral administration of E. buniifolium tested at different doses significantly increased the bile flow in rats, in 50% (500 mg/kg p.o). The hypercholeresis persisted during 60 min. The reference drug, sodium dehidrocolate (500 mg/kg, p.o), induced a strong, although short, acting stimulation (95%) which decreased quickly in the following 15 min.
Total bile acids were determined in bile's samples within the first 15 minutes, but no changes in the concentration (Control: 23.5 ± 0.81 mM, E. buniifolium 500 mg/kg: 21.7 ± 3.9mM; E. buniifolium 750 mg/kg: 21.9 ± 1.6 mM) nor in bile acid output were observed (Control: 169.3 ± 19.5 nmoles/min/100g; AE 500 mg/kg: 244.6 ± 63.4 nmoles/min/100g; AE 750 mg/kg: 177.8 ± 24.0 nmoles/min/100g).
The antioxidant activity of AE was evaluated by measuring the total reactive antioxidant potential (TRAP) and the total antioxidant reactivity (TAR) in vitro. The TRAP value obtained from the quenching of luminol enhanced chemiluminiscence was 165 M Trolox (dilution 1/100). The TAR value for the same solution was 167 M Trolox. These equivalent results for TRAP and TAR values may be due to the presence of antioxidants of high reactivity (Lissi et al.,1995) such as phenolic (8.33 ± 2.09 g/100g dried plant material) and flavonoid (4.35 ± 0.38 g/100g dried plant material) compounds, extensively reported as free radicals scavengers.
On the basis of these experiments, it can be concluded that E. buniifolium aqueous extract exerts a choleretic activity, being the bile flow enhancement independent of bile acids excretion.
The antioxidant activity of this extract may have beneficial effects on liver and gallbladder diseases, where reactive oxygen species are involved (Blázovics, 1996).



Comparación de los perfiles de disolución de tres formulaciones que contienen extracto de alcachofa

Alonso M.R., Spagnuolo A., Rubio M. y Ferraro G.

Cátedra de Farmacognosia. IQUIMEFA.Facultad de Farmacia y Bioquímica, Junín 956 -1113 - Buenos Aires. Argentina
E-mail: mralonso@ffyb.uba.ar

En los últimos años se esta observando un notable aumento en la elaboración y producción de fármacos que contienen extractos vegetales con actividad colagoga y colerética, que contienen extractos de alcachofa (Cynara scolymus).
Con el objeto final de estudiar la bioequivalencia in vitro de los extractos y preparaciones sólidas farmacéuticas que los contienen, se seleccionaron tres formulaciones existentes en el mercado que contienen extracto de alcachofa en su composición, se valoró su contenido en ácido clorogénico y se estudió el perfil de disolución en agua durante cuatro horas.
Las condiciones del ensayo fueron: disolución en 500 ml de agua a una temperatura de 37ºC, aparato 2:100 rpm. La toma de muestra se realizó a los 30, 60, 90, 120 180 y 240 minutos.
Las muestras fueron analizadas por H.P.L.C en fase reversa con detector U.V.- Vis y se cuantificó el ácido clorogénico presente en cada vaso.

Resultados: Los resultados obtenidos se muestran en el gráfico.
Las tres formulaciones demostraron tener un perfil de disolución claramente diferente.
Se discuten los resultados obtenidos

 

Induction of apoptosis on hepatoma cell lines by an 5-alkyl(en) resorcinol from Lithraea molleoides

Barbini L.1, Ruffa J.1, López P.2, Martino V.2, Ferraro G.2, Campos R.1 y Cavallaro L.1

1Cátedra de Virología
2Cátedra de Farmacognosia, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. Argentina.

E-mail: lcavalla@ffyb.uba.ar

Since cell homeostasis depends on the balance between proliferation and apoptosis, effective compounds inducing apoptosis appear to be a relevant strategy to suppress tumor growth. Hepatocellular carcinoma is the most common solid organ tumor in the world and is responsible for a million deaths per year. Many compounds contained in plant extracts exhibit the capability to regulate cell activities and have anti-tumor potential. Lithraea molleoides (Vell.) Engl. (Anacardiaceae), commonly known as "chichi" or "molle de Cordoba", is a tree that grows in South America, specially in Argentine, Brazil and Uruguay and is well known by rural people of these countries as: antiarthritic, haemostatic, diuretic, tonic and useful for the treatment of respiratory diseases. Previous investigations on different extracts of this plant have reported antiviral and antimicrobial activities.
The dichloromethane extract from leaves of L. molleoides present cytotoxic activity on human hepatocellular carcinoma cell lines [HepG2 (IC50 S.D.= 68 ± 2 µM/mL) and Hep3B (IC50 S.D.= 44.7 + 24.8 µM/mL)] by the MTT assay. An 5-alkyl(en)resorcinol "1,3-dihydroxy-5-(tridec-4',7'-dienyl) benzene" was isolated by bioassay-guided fractionation from the dichloromethane extract. To determine if the detected cytotoxic effect of the 5alkyl-(en)-resorcinol on HepG2 and Hep3B (by the MTT assay), was due to programmed cell death, in this work, we determined if the addition of this purified compound induced apoptosis in both cell lines: HepG2 and Hep3B (deleted p53). These cell lines were treated for 24 hours with 35 and 50 g/mL, and 30 and 40 g/mL of this compound respectively, considering the ED50% and ED90% calculated by the cytotoxicity assay. To analyze if this compound induced morphological changes typical of apoptosis, the treated cells were studied under contrast phase microscopy. Apoptosis was determined by acridine orange and propidium iodide staining, detection of DNA fragmentation on agarose gels and DNA content by flow cytometry. Compared with the control cells the treated ones showed significant morphological changes typical of apoptosis and all compatible with programmed cell death. The treated cells stained with acridine orange and propidium iodide showed a greater percentage of red cells that corresponded to the ones with altered cytoplasmic membrane (late apoptotic and necrotic). The green cells, predominant in the control preparations corresponded to live or early apoptotic hepatocytes with intact plasma membrane. Also, both cell lines showed the characteristic DNA fragmentation of apoptosis in agarose gels, exhibiting a ladder of DNA fragments multiple of 200 base pairs. The typical hypoploid population or subG0 peak corresponding to cells with low DNA content was detected when the treated cells were subjected to cytometry analysis. In conclusion, based on these results, the 5alkyl-(en)-resorcinol isolated from L. molleoides can exert its cytotoxic effect in these hepatocellular carcinoma cell lines through apoptotic cell death. The fact that Hep3B cells have mutated p53 suggests that in these cells apoptosis induced by this compound proceeds by a p53 independent pathway. Further analysis will be done to elucidate the intracellular pathways that mediate apoptosis in both cell lines.



Evaluación de la acción de extractos de plantas nativas de Río de La Plata en lesiones bucales

Forte L.1 y Sharry S.2

1Universidad Nacional de La Plata, Calle 55 Nro, La Plata (1900), E-mail: liviforte@hotmail.com
2CEPROVE, UNLP.CICPBA. CC31, La Plata (1900), E-mail: ceprove@agro.unlp.edu.ar

En la cavidad bucal, como en otras partes del cuerpo, la capacidad de regeneración de un tejido lesionado varía mucho. Reparación es un término global que incluye tanto la regeneración como los procesos mediante los cuales el tejido lesionado es reemplazado por células disímiles. Existe gran variedad de patologías que pueden afectar la mucosa bucal. Entre ellas nos abocaremos a lesiones frecuentes como las úlceras aftosas caracterizadas por ulceraciones superficiales en la túnica interna del labio, mejillas, lengua, piso de la boca paladar y encías, siendo muy dolorosas. Por otro lado, las boqueras o queilitis y queilosis angulares caracterizadas por fisuración, grietas, ardor y sequedad de las comisuras de la boca. Diversas plantas medicinales se han utilizado por su actividad cicatrizante o regenerativa. Dentro de un proyecto de estudio de plantas nativas de Río de La Plata, se intenta evaluar el uso de las mismas en odontología. La utilización de plantas medicinales en patologías bucales es un área poco investigada. La fitoterapia puede ser una opción a las tratamientos de odontología tradicional, en determinandas dolencias. Erythrina crista-galli L. (Leguminosae) es una especie vegetal popularmente conocida como "seibo", "ceibo", "ceibo colorado", "zuinandí" o "coral tree", es un árbol generalmente de poca altura El origen del nombre proviene del griego, erythrina (rojo) y crista-galli que alude al tono del rojo de la cresta del gallo. Esta especie está distribuida en el Sur de Brasil, Paraguay, Uruguay y en la Argentina en las provincias de: Jujuy, Salta, Tucumán, Santiago del Estero, Formosa, Chaco, Misiones, Corrientes, Entre Ríos, Santa Fe y Buenos Aires. Forma seibales en lugares inundables, bordeando ríos y arroyos, sobre todo en las islas del delta del río Paraná, llegando hasta Río de La Plata. Se cultiva como planta ornamental en zonas templadas de nuestro país. El cocimiento y maceración de la corteza y de las hojas es utilizado en medicina popular, que le atribuye propiedades antiinflamatorias, narcóticas y sedantes, mencionándose también su uso como emoliente y antitusivo. Externamente se aplica como desinfectante y cicatrizante de heridas y úlceras. En otras investigaciones se hace referencia a la actividad antimicrobiana de E. crista-galli. Los estudios fitoquímicos realizados con esta especie reportaron el aislamiento de pterocarpanos, alcaloides, flavonoides y cafeil derivados. Huang y Liou (1997) aislaron de las hojas de esta planta seis triterpenos conocidos, un fitoesteroide y su glucósido y un glucósido flavonoide. Se están ensayando extractos alcohólicos y acuosos de diferente concentración, con el propósito de evaluar las propiedades cicatrizantes, analgésicas y antiinflamatorias de esta especie medicinal. Los resultados están siendo evaluados, pero hasta el momento la respuesta de los tratamientos es altamente positiva.



Extractos obtenidos de esponjas marinas del género Xestospongia presentan actividad antiinflamatoria

Gaitán R., Franco L. y Gómez H.

Universidad de Cartagena, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas
Departamento de Farmacia. Campus de Zaragocilla, Cartagena-Colombia

E-mail: rigaitan2003@yahoo.es

Las enfermedades inflamatorias, incluyendo diferentes tipo de reumatismo, son muy comunes mundialmente. Aunque el reumatismo es una de las enfermedades más antiguas que afecta a una gran población, aún no existe una sustancia que garantice su cura permanente. La búsqueda y desarrollo de fármacos antiinflamatorios que además tengan efectos secundarios mínimos, es por lo tanto una prioridad (Vane, et al. 1995; Yesilada, et al. 1997). El aporte hecho por la fitoquímica en este campo ha sido considerable, y aún hoy día se esperan importantes contribuciones de ésta, a pesar del desarrollo experimentado por la síntesis química y la biología molecular en la búsqueda de fármacos cada vez más efectivos. (Farnsworth N.R., et al. 1977). Otra fuente natural que ha contribuido en este campo la constituyen los organismos marinos, entre los que se destacan las algas y los corales, sin embargo, organismos como las poríferas (esponjas marinas), en los que se han reportado moléculas con importante y variada actividad, han sido poco estudiadas como antiinflamatorios. Consecuentemente, resulta importante indagar por este tipo de actividad, principalmente si existen antecedentes de moléculas, que como luffolide y luffariellolide, obtenidas de la esponja marina Luffariela sp con importante respuesta antiinflamatoria ( Kernan M.R, et al. 1989; Albizati K.F., et al. 1987). En el presente estudio, se evaluó la posible actividad antiinflamatoria de los extractos totales y parciales de baja, mediana y alta polaridad de cuatro especies de esponjas marinas pertenecientes al género Xestospongia a saber rosariensis, muta, proxima, subtriangularis y carbonaria, utilizando para ello, el modelo del edema plantar inducido por carragenina. (Winter, C.A., et al. 1962; Sugishita, et al. 1981). Los grupos en estudio fueron tratados con los extractos a dosis de 100 mg/kg (IP), un grupo denominado control positivo recibió fenilbutazona 10 mg/kg (IP), el grupo control recibe solo el vehículo. Los datos se expresan como la media D.S. del porcentaje de inflamación. Las diferencias entre el grupo control y los grupos en estudio fueron evaluadas mediante ANOVA (P<0.05) utilizando el test de Dunnet, encontrándose que tanto el extracto total como los parciales de Xestospongia rosariensis muestran una significativa respuesta antiinflamatoria, mientras que para Xestospongia proxima la actividad parece concentrarse en el extracto total, con valores de inhibición superiores a los mostrados por el control positivo, a las condiciones de ensayo. Algunos extractos de las especies muta y subtriangularis no fueron evaluados por problemas de solubilidad (Tabla 1).Este es uno de los pocos estudios realizados sobre esponjas marinas, los resultados obtenidos ameritan continuar su estudio en otros modelos de inflamación así como intentar aislar las sustancias puras a fin de determinar posibles mecanismos implicados en el efecto. Teniendo en cuenta los resultados resulta importante llevar a cabo estudios de actividad antiinflamatoria en otras especies y géneros.

Tabla 1. Efectos del fármaco de referencia y los extractos sobre el edema plantar inducido por carragenina

Grupo
Dosis (mg/kg)
Inflamación (%)
Inhibición (%)
Control
-
73.2 ± 3,1
-
Fenilbutazona
10
31,0 ± 3,3 a
57,7
X. rosariensis
E. Total
100
20,6 ± 0,8 a
71,9
E. Hexano
100
58.0 ± 2.0 a
20.9
E. Diclorometano
100
43,4 ± 1,8 a
40,8
E. Metanol
100
38,0 ± 3,1 a
48,1
X. proxima
E. Total
100
-6,5 ± 4,1 a
108,9
E. Hexano
100
83.6 ± 7,1
-
E. Diclorometano
100
86.8 ± 4,0
-
E. Metanol
100
71,1± 7,3
-
X. Subtriangularis
E. Metanol
100
54.7 ± 9.0
25.3
E. Diclorometano
100
41.43 ± 3.4 a
43.4
X. Muta
E. Metanol
100
57.0 ± 1.84 a
22.23

Valores representan la media ± D.S. de 5 animales por grupo.
a Estadísticamente significativo frente al control P 0.05
- No muestra actividad

 

Establecimiento de un método para evaluar la actividad vegetal contra hongos subcutáneos (Sporothrix schenckii y Fonsecaea pedrosoi)

Gaitán I., Del Cid N.E. Logemann H.E., Paz A.M. y Cáceres A.

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala, Guatemala.

Las micosis subcutáneas son infecciones causadas por hongos patógenos que ingresan al tejido subcutáneo por algún traumatismo. La lesión inicial puede ser única, pero generalmente la tendencia es el desarrollo de otras lesiones que siguen el trayecto de los vasos linfáticos. La infección puede también progresar y afectar articulaciones, huesos, sistema nervioso central, tracto respiratorio, sistema genitourinario, entre otros. En Guatemala la más frecuente es la esporotricosis, seguida de los micetomas y la cromoblastomicosis.
Los agentes causales son microorganismos dimórficos, con una fase saprofítica (micelio) y una parasítica. Sporothrix schenckii es el agente etiológico de la esporotricosis, los micetomas son causados por eumicetos (hongos) o por actinomicetos (bacterias) y en Guatemala Fonsecaea pedrosoi es el único agente causal de la cromoblastomicosis.
El tratamiento de elección para la esporotricosis es el yoduro de potasio y en los micetomas y cromoblastomicosis se recomiendan procedimientos quirúrgicos. Si existe compromiso de órganos internos en cualquiera de las tres patologías, se utiliza anfotericina B combinada con otros medicamentos adyuvantes. Los tratamientos farmacológicos recomendados han demostrado buenos resultados; sin embargo producen efectos secundarios a nivel gástrico, cutáneo, respiratorio y medular, algunos de los cuales son irreversibles. Es por esto que el estudio de productos naturales que derivan de plantas medicinales ha ocupado un lugar importante en la búsqueda de alternativas terapéuticas como fuente de nuevos fármacos y materia prima para la síntesis de compuestos con actividad farmacológica y menores efectos secundarios.
En el presente trabajo se estableció un método para evaluar la actividad antifúngica de extractos de plantas usadas popularmente para el tratamiento de afecciones dérmicas sobre cepas de dos hongos subcutáneos (S. schenckii y F. pedrosoi). Se usó como método de referencia la técnica para hongos filamentosos de Brancato & Golding, obteniéndose un crecimiento óptimo de S. schenckii en 21 días y de 28 para F. pedrosoi.
Como un paso preliminar y con el objeto de evaluar la metodología establecida se enfrentaron los dos hongos contra 17 extractos etanólicos de 12 plantas nativas guatemaltecas, obteniéndose una actividad antifúngica con Lippia graveolens (25 µg/ml) y Valeriana prionophylla (100 µg/ml) para S. schenckii; y para F. pedrosoi con Lippia graveolens (100 µg/ml).

 

Aceite esencial de la especie Lepidophylum quadrangulare

Guerrero Sandoval J.H.

Escuela De Química De La Facultad De Ciencias De La U.N.I.. Lima Perú

El presente trabajo se basa en el estudio fitoquímico y caracterización del aceite esencial de la especie Lepidophylum quadrangulare del Valle de Aymaraes Apurímac - Perú, además de dar a conocer los componentes activos a los que se le atribuyen sus propiedades antitumorales y de acelerar el proceso de soldadura de huesos rotos.



Estudio fitoquímico y caracterización del aceite esencial de la especie Lepidophylum quadrangulare del valle de Aymaraes Apurímac - Perú

Guerrero J.H.

El presente trabajo se basa en el, además de dar a conocer los componentes activos a los que se le atribuyen sus propiedades antitumorales y de acelerar el proceso de soldadura de huesos rotos.



Base de datos sobre etnobotánica del norte del departamento de Bolívar- Colombia

Gómez H.1, Gaitán R.2, Rodríguez E.2, Méndez D.2, Mercado J.2 y Díaz F.2

1Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Campus de Zaragocilla. Universidad de Cartagena. Cartagena-Colombia. E-mail: hgomez_02@usa.com
2Grupo de Productos Naturales de la Universidad de Cartagena. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad de Cartagena. Cartagena de Indias - Colombia.

La etnobotánica en Colombia se ha venido desarrollando en varias líneas de investigación entre las que se cuenta la etnomedicina, recopilando información sobre plantas medicinales utilizadas en zonas campesinas, indígenas o mercados urbanos. Aunque las políticas del Ministerio del Medio Ambiente y el Instituto Colombiano para el Desarrollo de la Ciencia y la Tecnología Francisco José de Caldas (COLCIENCIAS) impulsan la investigación sobre el conocimiento y prácticas de comunidades locales, las cuales servirán de fundamento a las decisiones ambientales del Estado, en Colombia el desarrollo de este tipo de trabajos ha sido un poco más lento y por eso en el departamento de Bolívar aún no tenemos trabajos consolidados y difundidos en este campo.
El trabajo de campo se llevó a cabo en el norte del Departamento de Bolívar (poblaciones de Cartagena, Turbaco, Arjona, Sincerin, Malagana, San Bacilio de Palenque, Santa Rosa, Villanueva, Bayunca, Clemencia, Santa Catalina, Galerazamba, Barú y la región insular de Tierra Bomba, al suroccidente de Cartagena) entre Agosto de 1998 y Junio de 2004.La información recolectada permitió la creación de una base de datos sobre nuestra flora medicinal. Para la recolección de los conocimientos etnobotánicos en medicina tradicional, se realizaron entrevistas semiestructuradas, basadas en un formato-guía de encuesta y se obtuvo información referente al uso, parte usada, forma de uso y vía de administración de las distintas plantas reportadas por los informantes, los cuales en su mayoría eran personas cabezas de familia mayores de cincuenta años. Se realizaron 650 encuestas a informantes de 15 poblaciones. Los resultados señalan una relativa consistencia del conocimiento entre los pobladores con relación al uso de las plantas medicinales.
A la fecha han sido reportadas 257 especies para 92 usos, Las especies con mayor popularidad entre los informantes resultaron ser Allium sativum (uso popular, hipertensión), Eucalyptus globullus (gripa), Chenopodium ambrosioides (parasitosis), Gliricidia sepium (Jacq.) Kunth ex Walp (alergias en la piel), Heliotropium indicum L. (parasitosis), Matricaria chamomilla (diarrea), Momordica charantía (parasitosis), Coleus amboinicus Lour (dolor de oído), Petiveria alliaceae (fiebre) y Citrus sinensis (hipertensión). Afecciones como gripa, resfriados y fiebre reciben tratamiento con plantas medicinales, existiendo el mayor radio de consenso de informantes para esta categoría (infectología: 0.913). Seguidamente se encuentran las categorías correspondientes a otorrinolaringología y estomatología (0.884), parasitología (0.881), urología (0.837) y gastroenterología (0.821). Los datos recopilados se ordenaron y registraron en una base de datos que permite su fácil manejo, análisis y consulta.



Ensayos clínicos en plantas medicinales

Hernández A.

Profesor titular de Farmacología.Universidad Médica de la Habana. Centro Nacional Coordinador de Ensayos Clínicos (CENCEC). Playa.Ciudad de la Habana.Cuba. E-mail: alberto@cencec.sld.cu

El crecimiento que en la pasada década tuvo el comercio mundial de plantas medicinales, es algo verdaderamente impresionante, en 1996 excedía los $2,5 billones, con un probable crecimiento anual del 25%, ya en el año 2000, más de 800 compañías estaban incorporadas en la producción de productos de plantas medicinales con ingresos anuales que excedían los $4,5 billones.
Este enorme crecimiento, casi el 100% en cuatro años, se debe entre otras cosas, a que:
" Usuarios de esta medicina en países desarrollados, buscan una opción menos cara y más"segura", para aquejar dolencias leves y moderadas.
" Usuarios de países subdesarrollados tienen en esta medicina su principal alternativa (medicina tradicional en general, no solo herbaria).
" No existe una política reguladora exigentes con respectos a estos productos en la mayoría de los países, y en otros, ni cuentan al menos con regulaciones por agencias reguladora nacionales.
Por tanto, si la demanda es cada vez mayor, y las agencias reguladoras son cada vez menos exigentes, las ganancias se multiplican, convirtiéndose esto en un mercado muy llamativo.
Ante esta avalancha, la Organización Mundial de la Salud lanzó las Estrategias de la OMS sobre medicina tradicional 2002-2005 .
Uno de sus objetivos, garantizar la eficacia, seguridad y calidad de este tipo de medicina.
Por todo lo anterior, se debe reflexionar ante la siguiente pregunta, ¿Son seguros y efectivos los productos herbarios terminados que abarrotan el mercado del medicamento en la actualidad?
Este tipo de pregunta solo puede ser contestada afirmativamente, si existiera una política racional, exigente y científica, hacia este tipo de medicamentos, que contemplara la investigación pre-mercado (pre-clínica y clínica) como la post-mercado, como herramienta para el control de estos productos.
Las agencias reguladoras mas exigentes (las menos), hacen mayor énfasis, en los estudios pre-clinicos, y no exigen el ensayo clínicos como la regla de oro, para garantizar la eficacia y seguridad de estos productos. Al obviarse este tipo de investigación, se dejan de detectar múltiples riesgos y problemas, a los que posteriormente se somete el paciente cuando consume este tipo de medicamento.
Estos riesgos y problemas se pueden agrupar dentro de cuatro grandes areas:
" Vinculados con la Farmacología
" Vinculados a la Metodología de Investigación
" Vinculados a la Etica
" Vinculados a otras áreas, no menos importantes (Agricultura, Etnobotánica, Químico-farmacéutica, etc)
Cuando un producto no es sometido a las diferentes fases del ensayo clínico, por ejemplo, ensayos fase I y fase IIa, no se pueden estudiar adecuadamente su faramcocinética y farmacodinamia, en el humano, y por ello se desconocen muchos datos importantes vinculados con su eficacia y seguridad, como por ejemplo, la dosis terapéutica, el intervalo de dosis, las interacciones medicamentosas, con alimentos etc, que pueden ir desde la fase de absorción hasta la excreción. Este es un aspecto que muchas veces no se le da importancia en la terapéutica habitual, y puede ser el causante o de una ineficacia o de una reacción adversa.
Por otra parte, se deja de evaluar y confirmar o no en el humano, sus acciones faramacológicas y mecanismos o posibles mecanismos de acción, de manera que puedan siempre que sea posible, buscar una explicación a las reacciones adversas, que se detecten.
Por último, cuando no se someten a los ensayos clínicos fase III, se deja de comprobar de forma científica la eficacia y seguridad de los mismos.
Desde el prisma metodológico, al no utilizarse diseños de investigación adecuados, los supuestos resultados que se expresen de un producto determinado, están sometidos a múltiples errores, aleatorios y sistemáticos, todo lo cual hace, que esos resultados tengan una disminución de su validez interna y externa de los mismos. Dicho en otras palabras, los resultados no son científicamente confiable y no son extrapolables a la población diana.
En lo ético, se está dejando de cumplir cuando menos, con dos principios, el de Beneficencia y el de No Malificencia. Cabría preguntarse, ¿Se está totalmente seguro que estos medicamentos pueden ser, sino la mejor, una buenas opción, para los pacientes?, ¿No se estarían privando de un tratamiento verdaderamente eficaz y seguro?.
En relación a las otras áreas, al no someterse el producto a este tipo de investigación, no siempre puede garantizarse la calidad del producto. Por lo que pueden surgir interrogantes como estas, ¿es en realidad la planta?. De acuerdo a las normas de cultivo, cosecha, almacenamiento, etc, ¿está el principio o el ingrediente por el que se estandarizó el producto en los indicadores adecuados?, ¿Estaba contaminada el material vegetal?, ¿se cultivó con agroquímicos?, ¿El producto esta adulterado?.
Estas y otras muchas preguntas deben ser controladas y documentas cuando se realiza un ensayo clínico y de esta forma se garantiza la calidad del producto que va al mercado, independientemente al cumplimiento que después hagan los centros productores de las Buenas Prácticas de Manufactura.
Por último, aunque no cabe duda, que el ensayo clínico controlado, es la regla de oro para evaluar la eficacia y seguridad de un producto, hay que tener presente que el mismo puede ser aplicado, si el producto herbario terminado, se aplica siguiendo el método alopático, ya que si lo aplica siguiendo una concepción holística, la metodología pura de ensayo clínica, no es aplicable, debe sufrir ciertas modificaciones, que permitan la evaluación de los resultados de la manera mas científica y confiable posible.
Siempre se debe contar con la máxima "Potencializar el uso de la medicina herbaria con la investigación clínica, no frenarla".


Situación actual de los ensayos clínicos en plantas medicinales. Errores, problemas y limitaciones

Hernández A.

Profesor titular de Farmacología.Universidad Médica de la Habana. Centro Nacional Coordinador de Ensayos Clínicos (CENCEC). Playa.Ciudad de la Habana.Cuba. E-mail: alberto@cencec.sld.cu

En el año 1998, los editores de la New England Journal Medicine declararon: "es tiempo que la comunidad científica detenga el libre andar de la medicina alternativa". Entre otros elementos, sus planteamientos estaban fundamentados en las pocas publicaciones científicas de este campo. A partir de esta declaración, los practicantes e investigadores de este tipo de medicina, comienzan a defenderla realizando publicaciones de investigaciones clínicas, las que se han ido incrementando durante estos años. Sin embargo, a 4 años de aquel momento, se presenta un problema igual o de mayor magnitud al planteado. Un número importante de los ensayos que se publican sobre esta temática adolecen de deficiencias y errores que no permiten con los resultados alcanzados, llegar a conclusiones definitorias. Determinar estos errores, problema o limitaciones constituyó el objetivo de este trabajo. Para el logro del mismo se estableció una estrategia de búsqueda de información en bases de datos relacionadas con el tema limitada a los años 1998-2002.
Las deficiencias, errores, problemas o limitaciones detectados se pueden agrupar de la siguiente forma: relacionado con el producto en investigación y relacionado con la metodología de investigación empleada
En el primer caso, uno de los problemas que a menudo se presentan, es la no identificación correcta de la planta o plantas que conforman la formulación. Así como la realización de ensayos clínicos, con diferentes formulaciones de una misma planta, la mayoría no estandarizada, para una misma indicación. Otro problema, no menos importante, es el de estandarizar una formulación de un producto herbario por un marcador activo y no por su principio activo
Otros problemas son, la no verificación botánica o química de las plantas, la no precisión de la parte empleada, la no especificación de los solventes y concentraciones de los extractos, falta de especificación del tiempo de disolución de la tabletas y cápsulas, no precisión de dosis, frecuencia y vías de administración y falta de equivalencias entre la distintas presentaciones de una misma planta, entre otros
Con respecto al segundo caso, metodología de investigación, tenemos que el ECC, es la regla de oro para evaluar la eficacia y seguridad de un producto en una indicación dada, y una norma importante, es que todo lo que se realice hay que documentarlo. Sin embargo, existen ensayos clínicos publicados que no cumplen con lo anterior, declaran ser aleatorizados, pero no plantean el método, lo que limita su calidad.
Otro elemento es el uso de placebos como grupo control. Este diseño conlleva que los participantes sean "cegados", y debe especificarse como se logró. Sin embargo hay plantas que por sus características organolépticas, no permite un fácil "cegamiento", y no se especifica como se obtuvo este.
Otro problema es que la mayoría de los estudios son de corta duración y con variables intermedias, para enfermedades crónicas, no se usa variables duras. Cuando se evalúan los aspectos estadísticos en algunos de estos ensayos, se observan que faltan aspectos de verdadera importancia, no se declara una hipótesis de trabajo, no se expresa con claridad cual es la n del estudio, o como se obtuvo cuando esta existe. Por otro lado, el manejo y el análisis de los datos presentan limitaciones y errores. Hay perdidas importante de sujetos, y no se precisa nada con respecto a estos. No se realizan análisis por intención de tratar.
Estos problemas, limitaciones y errores, hacen que la credibilidad en esta medicina no alcance las aspiraciones de los que la practican y fundamentalmente la seguridad y el bienestar de quienes la consumen. Cambiémosla.



Acción cicatrizante del azúcar en lesiones residuales post-quirúrgicas y úlceras neurotróficas de pacientes diabéticos

Hernández A.

Profesor titular de Farmacología.Universidad Médica de la Habana. Centro Nacional Coordinador de Ensayos Clínicos (CENCEC). Playa.Ciudad de la Habana.Cuba. E-mail: alberto@cencec.sld.cu

Se realizó un ensayo clínico de exploración terapéutica, fase II temprana, abierto, controlado y aleatorizado con una muestra de 40 ( 20 por grupo) pacientes diabéticos tipo I y II que presentaban Ulceras Neurotróficas y Lesiones Residuales Post quirúrgicas.En este estudio se evaluó la eficacia cicatrizante del azúcar blanca refino en su aplicación local contra tratamiento convencional, mediante evaluaciones quincenales. Además se evaluó la seguridad de este producto en este tipo de pacientes.
La variable principal de respuesta utilizada fue la cicatrización (granulación y epitelización), evaluándose a través de un criterio objetivo, medición del área de la lesión y uno subjetivo, evaluación del estado del paciente, y examen físico de la lesión. Conjugándose ambos en una escala con las categorías de curados, mejorados, estables y empeorados
En el 50 % de los pacientes del grupo estudio (34% en el control), se apreció una aceleración del proceso de cicatrización durante este tratamiento (p<0,05). El 94% de la muestra del estudio tuvo una dinámica de cicatrización de las lesiones muy favorable (71% en el control, p<005). Dos pacientes del grupo estudio abandonaron el mismo (10%) y 1 (5%) paciente del mismo grupo, fue excluido en la cuarta semana del tratamiento ya que presentó sepsis a germen invasor (Pseudomonas). No se encontraron diferencias con el control.
Hay que señalar que en ninguno de estos pacientes, tanto estudio como control, apareció reacción adversa alguna.
Durante este estudio se relacionaron varias características de los pacientes, y se obtuvo como resultado, que existía relación entre la exposición de planos óseos, la deambulación y la combinación raza-estado del árbol vascular con la cicatrización, en ambos grupos, (p 0,05)
Por lo anterior expuesto se puede plantear, que el azúcar blanca refino parece ser una buena opción terapéutica local en pacientes diabéticos portadores del lesiones residuales quirúrgicas y neurotróficas.



Alchornea triplinervia (Euphorbiaceae): a brazilian "cerrado" medicinal plant source of antiulcer compounds

Hiruma C.A.1, Lima Z.P.1, R.Ballesteros K.V.1, Silva J.S.1, Rocha R.M.1, Brito M.S.2, Calvo T.3 y Villegas W.3

1Department of Physiology, Biosciences Inst., UNESP, Botucatu, SP, Brazil (E-mail: hiruma@ibb.unesp.br).
2Department of Physiology, Biology Inst., UNICAMP, Campinas, SP, Brazil (E-mail: abrito@unicamp.br)
3Department of Organic Chemistry, Chemical UNESP, Araraquara, SP, Brazil (E-mail: wvillegas@ iq.unesp.br)

A. triplinervia is a specie used in folk medicine as infusion to treat pain, ulcer, and gastric pain in general. The methanolic extract (MEL) and chloroformic extract (CEL) of leaves of A. triplinervia were investigated for their ability to prevent ulceration of the gastric mucosa. When previously administered (p.o.) at the dose of 500 and 1000 mg/kg, the MEL significantly reduced (p<0.01) gastric injury induced by absolute ethanol (57% and 85%, respectively) in rats, when compared with the control group. In the ethanol/acetic acid-induced gastric ulcer model in mice, the MEL (250 and 500 mg/kg) significantly reduced (p<0.05) the formation of gastric lesions in 64% and 46% respectively, when compared to the control group. The CEL (500 and 1000 mg/kg) was more potent antiulcer effect when significantly reduced (p<0.01) the gastric lesions in (94 and 98%) respectively, when compared to the control group. The MEL also significantly reduced gastric lesion induced by piroxicam (non-steroidal anti-inflammatory drug) in mice when protected by the gastric mucosa at 45% (250 mg/kg), 80% (500 mg/kg) and 52% (1000 mg/kg) when compared with the control group. Only the highest dose of CEL (1000 mg/kg) was effective in reduced gastric lesions (57%). The results suggest that MEL and CEL presents a significant anti-ulcer effects when assessed in these ulcer-induced models and, through phytochemical analyses, the antiulcerogenic effects are probably related to flavonoids and alkaloids present in this extract.

 

Constituyentes químicos en Araceae

Collantes I.E. y Yoshida M.

Instituto de Química, Universidade de São Paulo, São Paulo-SP, Brasil

La familia Araceae típica de regiones tropicales, está constituida por 150 géneros y 1800 especies. En América del Sur se presentan 30 géneros y cerca de 1200 especies. En el Brasil, 12 géneros y 55 espécies. Con la intención de comparar la variabilidad de la composición química entre los géneros y la diferencia entre hoja y raíz, esta comunicación relata el estudio fitoquímico de diez espécies, pertenecientes a los géneros Anthurium, Caladium, Dracontium, Monstera, Philodendron, Pistia y Xanthosoma, cuyo material en estudio fue colectado en la Mata Atlántica del Estado de São Paulo, Reserva de Picinguaba, y las especies fueran identificadas por el Dr. Eduardo Gonçalves.
Las espécies de estas familia contienen, según la literatura, alcaloides, lignoides, esteroides, esteroides acilglicosilados, etc.
La primera parte del trabajo [SILAE, 2003] fue observar en el extracto hexánico los cambios en composición de ácidos grasos de especie para especie y entre hoja y raíz, confirmándose la presencia del ácido laurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido araquinoico y ácido behenico, con la predominancia de ácidos grasos saturados en raíces y de insaturados en las hojas.
En esta comunicación se relata lo observado en el extracto etanólico. El residuo metanólico es el de mayor proporción y el residuo de acetato de etilo, el de menor masa, lo que significaría que la composición química del extracto etanólico sería en su mayoría constituida por compuestos polares. También se observó la precipitación de cristales de oxalato de calcio en el extracto etanólico de los géneros Anthurium, Monstera, Philodendron, Pistia y Xanthosoma.
Los residuos hexánico y cloroformico fueron cromatografiados en una columna filtrante de silica gel con hexano, hexano:acetona (4:1), acetato de etilo:cloroformo (1:1) y metanol, observándose que la subfracción metanólica era la de mayor masa. Por estudio de los espectros de resonancia magnética nuclear de las subfracciones hexanica y hexano:acetona, se constató que el mayor porcentaje en composición eran triglicerídos, alcoholes grasos, esteroides como sitosterol, estigmasterol y sus derivados 3 -hidroxi-5-eno-7-oxo, ya en las subfracciones de cloroformo:acetato de etilo comienzan aparecer en pequeñas proporciones los esteroides acilglicosilados, por lo contrario en las subfracciones de metanol, que además de ser la más abundante es la que presenta en mayor proporción los esteroides del tipo 3-O-[6-O-palmitoil-D-glicosil]-colest-5-eno y 3-O-[6-O-palmitoil-D-glicosil]-colest-5-eno-7-ona.
Los residuos de acetato de etilo y metanol - agua del extracto etanólico serán analizados los compuestos polares que están presentes así como también los monosacaridos.


Studi fitochimici e attività biologica di Anagyris foetida

Innocenti G.1, Dall'Acqua S.1, Agradi E3, Viola G.1 y Loi M.C.2

1Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Via F. Marzolo 5, Università di Padova
2Dipartimento di Scienze Botaniche, Viale Frà Ignazio 13, Università di Cagliari
3Dipartimento di Scienze Farmacologiche, via Balzaretti 9, Università di Milano

Anagyris foetida L. (Fabaceae) è un arbusto fetido ampiamente distribuito in tutto il bacino del Mediterraneo e nelle aree meridionali del Portogallo; in Italia è presente nelle regioni del centro sud e Isole. Diversi sono gli effetti attribuiti a questa pianta. Nell'antichità veniva utilizzato il decotto delle foglie insieme alla sapa per alleviare gli stati asmatici e per provocare il flusso mestruale. I semi venivano invece utilizzati come emetici. In Gastaldo ritroviamo citazioni simili, le droghe sono i semi e le foglie, i primi usati come emetici e purgativi (anche se decisamente tossici), e l'infuso delle seconde come leggero lassativo e in dosi più elevate come emetico ed emmenegogo. Pochi sono gli studi fitochimici su A. foetida. In letteratura è presente un solo lavoro riguardante l'isolamento di scopoletina, isoscopoletina e 5-idrossi-7-metossi cumarina. La pianta è nota contenere anagirina, un alcaloide chinazolidinico tossico e teratogeno.
Nel corso delle indagini su fonti di fitocostituenti ad attività estrogenica da piante della medicina popolare italiana abbiamo considerato A. foetida. Nella medicina popolare sarda infatti, le foglie di questa pianta vengono utilizzate come infuso in casi di amenorrea e a concentrazioni maggiori come abortivo, emetico ed emmenagogo .
Le parti aeree di A. foetida sono state estratte con metanolo e in secondo tempo con solventi a polarità crescente. E' stata valutata l'attività estrogenica dei vari estratti su cellule di lievito (YES) e successivamente su cellule di tumore umano mammario (MCF-7). Inoltre è stata valutata la citotossicità degli estratti su due linee cellulari, HL-60 e LoVo. Il frazionamento degli estratti attivi ha portato all'isolamento di diversi composti alcuni dei quali identificati mediante varie tecniche spettrometriche (MS, NMR mono e bidimensionale incluso HMQC, HMBC, COSY e NOESY) come anagirina, batifolina, diosmetina.



La tutela della pizza tradizionale campana artigianale. Il contributo del comitato tecnico scientifico della festa della pizza - sapori, colori e tradizioni della campania

Iorio E.L., Mogavero C.

La pizza è uno dei prodotti gastronomici italiani più famosi del mondo. Miracolo della semplicità e della creatività, essa costituisce una preziosa risorsa economica e, contemporaneamente, il simbolo di un modello alimentare, quello mediterraneo, che nutrizionisti di tutto il mondo hanno indicato come il "golden standard" da seguire per una migliore qualità della vita.
Ma cosa è la pizza? Definire in maniera esauriente questo prodotto è un'impresa particolarmente ardua, dato l'enorme numero di variabili che entrano in gioco nella sua preparazione. Tuttavia, tra le diverse tipologie, quella che più rigorosamente interpreta nella forma e nella sostanza la tradizione è la pizza preparata per cottura, mediante forno a legna, di un disco di pasta - ottenuto per lievitazione naturale di una miscela di acqua, farina e sale - opportunamente disteso a mano e variamente guarnito con prodotti tipici di origine vegetale e /o animale.
Questo tipo di pizza trova in Campania la sua patria di origine, la terra in cui fioriscono le sue materie prime, la fucina sempre calda delle sue più svariate interpretazioni, la sede dei locali di degustazione che l'hanno resa celebre in tutto il mondo e, soprattutto, i pizzaioli più esperti e gli operatori più qualificati dell'intera filiera.
Purtroppo, l'immenso patrimonio culturale di sapori, colori e tradizioni che la pizza campana reca con sé è continuamente minacciato dalla commercializzazione di prodotti analoghi che - pur rispondendo a standard di qualità e di sicurezza alimentare - hanno spesso in comune solo il nome con la pizza tradizionale. La confusione che inevitabilmente viene generata - anche nel consumatore più attento - da tale ampia offerta commerciale contribuisce ad omologare l'immagine della pizza ad uno dei tanti prodotti anonimi da forno, a scapito della tradizione e della tipicità, oltre che del gusto e della salubrità, con danni potenzialmente gravissimi per l'intera economia regionale, che nella filiera della pizza investe ingenti risorse.
Di fronte a questo quadro preoccupante, il Comitato Tecnico-Scientifico (CTS) della Festa della Pizza di Salerno - un grande evento culturale e gastronomico ideato da Maurizio Falcone - ha da tempo avviato un progetto ambizioso volto alla tutela dell'identità della pizza campana artigianale intesa non solo come prodotto gastronomico in sé, ma anche come strumento finalizzato a promuovere e valorizzare i prodotti campani tipici e di qualità impiegati per prepararla (farina, pomodoro, olio, mozzarella, ecc.) e per accompagnarla nella sua degustazione (verdure, vino, ecc.).
Il CTS è un gruppo di lavoro, costituito da circa 20 esperti altamente qualificati nel settore della filiera della pizza, coordinato dal nutrizionista Eugenio Luigi Iorio (direttore scientifico) e dal maestro pizzaiolo Cosimo Mogavero (direttore tecnico). Otto le aree di attività, della quale l'area alimentazione e gastronomia coordinata da Francesco de Simone, professore Ordinario di tecnologia, socioeconomia e legislazione farmaceutiche presso la Facoltà di Farmacia dell'Università di Salerno.
Fin dalla sua costituzione, il CTS ha promosso numerose iniziative, dalla manifestazione a Strasburgo in difesa della cottura del forno a legna (novembre 1999) fino alla recentissima partecipazione alla kermesse culturale e gastronomica CIBUS, a Parma (maggio 2004).
Il CTS, inoltre, rivendica il primato assoluto della produzione di tre pizze davvero singolari: la prima verace pizza napoletana artigianale certificata al mondo secondo la norma UNI 10791:98 (Roma, 2001), una pizza completamente priva di glutine - indistinguibile dal punto di vista organolettico da quella "normale" - per soggetti affetti da celiachia (Salerno, 2001) e la prima pizza fitness al mondo, un prodotto nutrizionalmente bilanciato per chi svolge attività sportiva (Rimini, 2002).
Il CTS è anche sceso in campo a tutela della pizza campana, facendo sentire la sua voce, attraverso i media nazionali, contro le affermazioni di un gruppo di nutrizionisti americani che voleva "bocciare", insieme con la pizza, la dieta mediterranea (Corriere della Sera, luglio 2002). Ha anche accettato la sana competizione gastronomica in occasione della "Disfida pizza-piadina" (Parma, novembre 2002).
Attento alle esigenze dei consumatori, inoltre, il CTS ha istituito una pagina speciale a tutela delle sofisticazioni ("Pizza…the day after") sul sito ufficiale della manifestazione, www.festadellapizza.it (luglio 2000).
Infine, va sottolineato che, nel corso di ogni edizione estiva della Festa della Pizza, il CTS promuove una serie di iniziative culturali volte specificamente alla tutela dell'identità della pizza tradizionale campana artigianale, tra cui l'organizzazione di un'ampia area espositiva dedicata agli operatori della filiera e una serie di appuntamenti serali a carattere monotematico ("Tranci di cultura").
Le iniziative ed i progetti del CTS - tra i cui i due recentissimi corsi di formazione professionale per pizzaiolo - hanno raccolto l'apprezzamento di personalità del mondo della cultura, dello spettacolo e della comunicazione.



Attivita' antifungina di oli essenziali da specie mediterranee contro Funghi fitopatogeni

Camele I.1, De Feo V.2, Quaranta E.2 y Rana G.1

1 Dipartimento diBiologia, Difesa e Biotecnologie Agro-Forestali, Università degli Studi della Basilicata
2 Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno

Le crescenti problematiche legate alla presenza di residui di pesticidi sintetici nell'ambiente, al loro impatto sulla salute umana ed allo sviluppo di patogeni resistenti hanno fortemente rilanciato la ricerca di composti con nuovi meccanismi di azione. In questa ottica, anche l'uso di pesticidi a basso impatto ambientale è diventato una priorità (Bouchra et al., 2003, Scarito et al., 2003).
I fungicidi naturali basati su oli essenziali sono così diventati un'alternativa maggiormente sostenibile anche perchè la letteratura scientifica riguardante le loro proprietà antifungine (Shimoni et al., 1993; Cutler et al., 1996) è divenuta più consistente e significativa.
In questo lavoro è stata studiata l'attività inibitrice degli oli essenziali ricavati da 12 specie vegetali mediterranee nei confronti di tre funghi fitopatogeni.
Gli oli essenziali, ottenuti per distillazione in corrente di vapore secondo le procedure standard previste dalla Farmacopea Europea, sono stati estratti da Carum carvi L., Foeniculum vulgare Miller, Pimpinella anisum L. (Apiaceae); Hyssopus officinalis L., Lavandula angustifolia L., Majorana hortensis L., Melissa officinalis L., Ocimum basilicum L., Origanum vulgare L., Salvia officinalis L., Thymus vulgaris L. (Lamiaceae) e Verbena officinalis L. (Verbenaceae).
I funghi fitopatogeni contro cui i suddetti oli sono stati saggiati, sono Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, Fusarium oxysporum Schl. f. sp. melonis Sn. et Hans. e l'anamorfo della Botryotinia fuckeliana (de Bary) Whetzel che arrecano spesso gravi danni alle colture agrarie ed il cui controllo con anticrittogamici risulta difficile. Tutti gli oli sono stati saggiati in vitro tal quali e diluiti 10, 100 e 1000 volte. In piastre Petri, contenenti come substrato nutritivo agar patata destrosio (PDA), sono stati contrapposti ai vari oli i singoli patogeni fungini in prova e dopo una settimana se n'è misurato l'accrescimento della colonia. Ogni tesi è stata replicata tre volte in presenza di opportuni controlli. I risultati sono stati sottoposti ad analisi statistica mediante l'analisi della varianza (ANOVA). Le medie risultate statisticamente diverse sono state separate con la minima differenza significativa (MDS). In generale, tutti gli oli hanno mostrato, ad alta concentrazione buona efficacia nel contenere lo sviluppo dei micromiceti considerati. Alla diluizione 1/1000, S. sclerotium si è mostrata più sensibile a tutti gli oli saggiati, con eccezione di quelli di verbena e timo; gli oli essenziali di verbena e melissa hanno mostrato potente attività inibitoria nei confronti di F. oxysporum e quelli di melissa ed origano contro B. cinerea. Degna di approfondimento è risultata la capacità di alcuni oli di inibire la produzione di sclerozi delle due sclerotiniacee saggiate e, in particolare, di B. fuckeliana.
E' in corso la caratterizzazione dei suddetti oli essenziali, al fine d'identificarne i composti responsabili dell'attività inibitoria riscontrata nella prova.



Evaluación comparativa de los efectos sobre la glicemia, y otros parámetros bioquímicos, producidos por la administración diaria de tres plantas hipoglicemiantes

Romero E., Martínez A., Ruiz C., Vázquez L.I., Flores J.L., Román R., Alarcón F.J. y Rivas J.F.

Universidad Autónoma Metropolitana, Departamento de Ciencias de la Salud, Área de Investigación Médica, Laboratorio de Farmacología. E-mail: aaasj2@prodigy.net.mx

Objetivo:
En México la diabetes mellitus (DM) tipo 2 es una de las tres enfermedades de mayor incidencia y la primera causa de mortalidad en el grupo de edad de 55 a 64 años. El tratamiento farmacológico de la DM se realiza con base en la administración de hipoglucemiantes orales y/o insulina. Sin embargo, ninguno de los agentes hipoglicemiantes usados hasta ahora se puede considerar como el tratamiento ideal, ya sea por los efectos tóxicos que producen, o bien, por la disminución en la respuesta después de un tiempo prolongado de empleo. Cabe señalar que en la búsqueda de nuevos medicamentos hipoglicemiantes se estudiaron numerosas plantas medicinales, algunas de las cuales mostraron actividad notable. Las plantas Cucurbita ficifolia Bouché (Cucurbitaceae; chilacayote), Ibervillea sonorae Green. (Cucurbitaceae; guareque) y Psacalium peltatum H.B.K. (Asteraceae, matarique) son tres plantas usadas actualmente como antidiabéticas en nuestro país y las tres mostraron efecto hipoglicémico agudo importante en diferentes modelos experimentales, sanos y diabéticos. Sin embargo, aún no se han estudiado sus efectos farmacológicos después de su administración crónica. El objetivo del presente trabajo fue estudiar comparativamente los efectos sobre la glucemia y otros parámetros bioquímicos producidos por la administración diaria de los extractos hipoglicemiantes de cada una de las plantas mencionadas, en ratones diabéticos.

Método:
El jugo del fruto inmaduro de C. ficifolia, el extracto acuoso de P. peltatum y el extracto diclorometánico de I. sonorae fueron administrados diariamente (vía intragástrica), por 14 días a razón de 500mg/kg (4ml/kg), a ratones con diabetes inducida con aloxana (150 mg/kg por vía intravenosa en dos administraciones), cuyas glicemias oscilaron entre 300 y 500 mg/dl. Antes de la primera administración de los extractos, y cada siete días después, se determinaron los niveles sanguíneos de glucosa, colesterol, transaminasa glutámico pirúvica (TGP), transaminasa glutámico oxalacética (TGO) y triglicéridos. La glucemia se midió usando tiras reactivas para la determinación cuantitativa de glucosa en el Acutrend Sensor (Roche) y los demás parámetros utilizando tiras reactivas del sistema Reflotrón (Roche).

Resultados:
Se encontró que los tres extractos redujeron en forma significativa la glicemia y el peso corporal, con respecto al control, de ratones diabéticos. Ninguno de los extractos mostró modificaciones importantes en los niveles de colesterol y TGP. Además, el jugo del fruto inmaduro de C. ficifolia tampoco modificó notablemente los niveles de triglicéridos y TGO. Sin embargo, los animales tratados con el extracto acuoso de P. peltatum mostraron valores anormalmente bajos de TGO; Así mismo, los animales tratados con el extracto diclorometánico de I. sonarae redujeron los niveles de triglicéridos y TGO. Cabe señalar, por último, que los extractos de I. sonorae y P. peltatum produjeron efectos letales a las dosis administradas en los animales de experimentación. El jugo del fruto inmaduro de C. ficifolia no produjo efectos letales.

Conclusión:
Se considera importante continuar con el estudio farmacológico y toxicológico con los extractos hipoglicemiantes de estas plantas antidiabéticas, con la finalidad de fundamentar su uso en el control de la diabetes mellitus tipo 2, así como informar sobre los posibles efectos tóxicos y letales producidos por ellas.



3,5-di-caffeoylquinic acid from the fruits of Vitex cymosa bertero (Verbenaceae)

Fonseca E.N., Figer A. y Leitão S.G.

Departamento de Produtos Naturais e Alimentos, Faculdade de Farmácia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Centro de Ciências da Saúde, Brazil, E-mail: sgleitao@pharma.ufrj.br

Vitex species (Verbenaceae) are small trees or shrubs which occur in tropical and subtropical regions, and their chemistry has been widely studied all over the world. In Brazil, there are more than 50 different species1 but, so far, only two have been phytochemically studied, mainly by our group. Vitex polygama Cham. is a small tree found mainly in the states of Bahia, Minas Gerais and Rio de Janeiro, and the bark and fruits of this plant are traditionally used as emenagogue and diuretic1. V. cymosa Bertero is a small tree widely distributed in the Central and Amazon regions of Brazil, where it is popularly known as "Tarumã-do-Igapo" and "Taruma-do-alagado"1. The chemistry of the genus is characterized by the presence of C-glycosyl flavonoids (such as vitexin and orientin), steroids, triterpenes, ecdysteroids and iridoids. In a previous investigation on the leaves of the species Vitex polygama2, 3,5 and 3,4-di-caffeoylquinic methyl esters were isolated and purified by HPLC. In this way we decided to look for the presence of these derivatives in the fruits of another Brazilian species - Vitex cymosa Bertero. Eight kilos of V. cymosa fruits were freeze-dried and then crushed with the help of a blender. After that, the fruits were defatted with hexane, followed by extraction with ethanol. The ethanol extract was dried under reduced pressure; the residue was suspended with water and then partitioned between water and solvents of increased polarity range such as hexane, dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol. The ethyl acetate extract was chromatographed in a silica gel-column resulting in twelve different fractions. Fractions 14-17 were pooled together and then chromatographed over Sephadex LH 20 with methanol, affording a pure fraction which was submitted to 1H-NMR and 13C analysis. This fraction was characterized as pure 3,5-di-caffeoylquinic acid (Figure 1). This is the first time that substances like these are reported in the genus, and it also reinforces the tendency, observed in many different Vitex species, to produce caffeoyl derivatives such as: 7-O-trans-p-coumaroyl-6'-O-trans-caffeoyl-8-epiloganic acid (agnucastoside C), luteolin 6-C-(4''methyl-6''-O-trans-caffeoyl-glucoside), and 2''-O-caffeoyl-orientin.

Figure 1. 3,5-Di-caffeoylquinic Acid


Actividad antimicrobiana de aceites esenciales de Origanum vulgare (orégano) y Thymus vulgaris (tomillo) sobre distintas cepas aisladas de alimentos

Lombardo D.1, Daghero J.2, Ybarra F.1, Sabini L.1 y Demo M.1

1 Dpto. Microbiol. e Inmunol. Fac. Cs. Ex.Fco Qcas y Naturales UNRC, Córdoba, Argentina
2 Dpto. de Tec. Qca. Fac. de Ingenieria, UNRC, Córdoba, Argentina

E-mail: mdemo@exa.unrc.edu.ar

Los aceites esenciales extraídos de diferentes plantas aromáticas poseen actividades antifúngicas, insecticidas y antimicrobianas. El uso de estos compuestos antimicrobianos naturales es de suma importancia en la conservación de alimentos y en el control de enfermedades de origen microbiano en humanos, animales y vegetales. Hoy en día existe un creciente interés en sustituir conservantes químicos alimentarios por conservantes naturales debido a la alta toxicidad de los primeros, teniendo ambos tipos propiedades antimicrobianas y antioxidantes. Los aceites esenciales de determinadas plantas aromáticas pueden ser utilizados como conservantes naturales, prolongando el periodo de almacenamiento de los productos alimenticios.
El objetivo de este trabajo fue determinar la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales extraídos de plantas cultivadas de Origanum vulgare (orégano) y Thymus vulgaris (tomillo) sobre cepas aisladas de alimentos.
La especies vegetales de oregano y tomillo fueron recolectadas de cultivos procedentes del Establecimiento Tres Arroyos, Villa de las Rosas, Córdoba, Argentina.
Los aceites esenciales fueron obtenidos por hidrodestilación siguiendo la metodología descripta por Bamba et al., 1993: Ciccio et al., 1999; De Feo et al., 1998. Sus componentes fueron analizados por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa.
Para la determinación de la actividad antimicrobiana se aislaron cepas de alimentos por los métodos convencionales. Se realizó un screening de los aceites esenciales por la técnica de difusión en disco según metodología descripta por De-Pooter et al., 1995, y a continuación se determinó la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) por la técnica de Microdilución en Caldo (Mann et al., 1998) y la Concentración Bactericida Mínima (CBM).
Se aislaron cepas Gram (+) y Gram (-) de diversos alimentos, entre ellas Staphylococcus aureus (res bovina), Staphylococcus aureus (leche de soja), Staphylococcus aureus (cuarto trasero de liebre congelada), Escherichia coli (agua), Escherichia coli (tripas naturales), Salmonella sp. (harina alimento balanceado para perros), Bacillus cereus (orégano), Pseudomonas aeruginosa (agua), Enterobacter sp. (agua) y Escherichia coli O157:H7 (hamburguesa de carne vacuna).
Por la téncica de difusión en disco, ambos aceites exhibieron actividad antimicrobiana sobre todas las cepas probadas, a excepción de P. aeruginosa.
Para la determinación de la CIM se utilizaron las cepas patógenas de alimentos que resultaron mejor inhibidas por el aceite esencial de orégano y tomillo. Se obtuvo una CIM para orégano de 56,25 g/ l sobre S. aureus (res bovina), B. cereus (orégano), Salmonella sp. (harina alimento balanceado para perros), E. coli O157:H7 (hamburguesa de carne vacuna), y sobre E. coli (agua) se obtuvo una CIM de 112,5 g/ l. La CIM obtenida para tomillo fue de 28,12 g/ l sobre todas las especies anteriomente mencionadas. Con respecto a la CBM se obtuvieron para orégano valores de 225 g/ l sobre S. aureus, 450 g/ l sobre Salmonella sp y 112,5 g/ l sobre E. coli O157:H7. Para tomillo se obtuvieron CBM de 56,25 g/ l para Salmonella sp, B. cereus y E. coli O157:H7. Estos resultados demuestran que tomillo tiene mayor actividad bactericida con respecto a oregano sobre las cepas mencionadas.
Se destaca la importancia de estos aceites como conservantes de alimentos, ya que tienen actividad bactericida sobre importantes cepas patógenas humanas. Estudios posteriores permitirán evaluar esta actividad antimicrobiana agregando los aceites individuales o en conjunto en el alimento de origen cárnico o de soja con el propósito de mejorar la calidad de los mismos



Estudio comparativo de polifenoles y determinación de la presencia de citoquininas en Lupinus mutabilis Sweet y Zea mays variedad de Nueva Granada

Campos R.Q.F. y Lourdes C.

Se realizó el análisis fitoquímico de las semillas del Lupinus mutabilis Sweet (Tarhui). En los extractos de tarhui se detectó la presencia de Isoflavonoides y Citoquininas (Hormonas Vegetales). Para la extracción de Isoflavonoides de Lupinus mutabilis Sweet (Tarhui), se utilizó un método de extracción de flavonoides con una solución de NaCl 3%. Los isoflavonoides de Tarhui pueden ser utilizados en la industria farmacéutica. Ambos grupos de compuestos han sido determinados mediante métodos cromatográficos y espectrofotométricos.
Las Citoquininas también fueron detectadas en los extractos de los diferentes órganos de la planta de Maíz morado (Zea mays Variedad de Nueva Granada). Se desarrolló un modelo bioquímico para la detección de citoquininas (Método de Amaranthus), donde se ha utilizado dos precursores: tirosina y ácido p-hidroxicinámico; este último se ha obtuvo mediante una síntesis química.
El análisis fitoquímico de los granos de Maíz morado (Zea mays Variedad de Nueva granada) permitió separar: antocianinas y flavonoides. Se desarrolló un método de obtención de antocianinas estables y totalmente solubles en agua, las cuales pueden ser utilizadas en la industria alimentaria y farmacéutica.


Influencia de los procesos de germinación y fermentación en la capacidad antioxidante y contenido en vitaminas C y E del Lupinus albus var. Multolupa

Luzmila M. y Zárate M.

Instituto de Fermentaciones Industriales del Consejo Superior de Investigaciones Científicas Madrid - España.

El objetivo del presente trabajo es estudiar la capacidad antioxidante así como el contenido en vitaminas C y E en semillas de Lupinus albus var. Multolupa crudas, fermentadas y germinadas. Para ello han sido sometidas a procesos de germinación y fermentación. La capacidad antioxidante ha sido determinada por espectrofotometría y expresado como capacidad antioxidante aquivalente a Trolox (TEAC), la cuantificación de vitamina C se ha realizado por electroforesis capilar y la vitamina E por cromatografía líquida de alta resolución. Las harinas de lupinos crudo presentaron un TEAC hidrofílico de 71,35±0,08 moles trolox/g y un TEAC lipofílico de 1,21±0,10 moles trolox/g. La germinación produjo un incremento significativo de la capacidad antioxidante, obteniendo después de 9 días de germinación un TEAC hidrofílico 104,20 moles trolox/g y un TEAC lipofílico de 1,86±0,04 moles trolox/g. La fermentación espontánea de semillas enteras presentó un TEAC hidrofílico de 55,10 moles trolox/g y un TEAC lipofílico de 0,99±0,12 moles trolox/g. La fermentación realizada con harinas de lupino de forma espontánea no mostró diferencias significativas. Las harinas de Lupino crudo presentaron un contenido de vitamina C de 6,48±0,09 mg/100 g. Los contenidos en -tocoferol, -tocoferol y -tocoferol fueron de 0,19±0,01; 20,11±0,86; 0,25±0,02 mg/100 g respectivamente. La germinación produjo un incremento significativo de vitamina C alcanzando valores de 56,12±0,78 mg/100 g a los 9 días de germinación. En cuanto al contenido en vitamina E; se obtuvo un contenido de 3,91±0,13; 13,35±0,42; 0,22±0,02 mg/100 g de -tocoferol, -tocoferol y -tocoferol respectivamente. La fermentación ocasionó un descenso drástico del contenido vitamínico. No se detectó vitamina C y el contenido de los isómeros de tocoferol disminuyeron significativamente. Las harinas fermentadas con Lactobacillus plantarum presentaron valores de 0,08±0,01 mg/100 g de -tocoferol, 2,35±0,16 mg/100 g de -tocoferol y 0,04±0,01 mg/100 g de -tocoferol. Los resultados son expresados en base seca. La germinación es la alternativa de elección para aumentar el TEAC así como el contenido en vitaminas antioxidantes C y E.



Descripción etnobotánica y estudio de la actividad antibacteriana, antimicótica y citotoxicidad de los extractos totales de cinco especies vegetales nativas de la provincia de Loja: Baccharis genistelloides (monte tres filos), Baccharis obtusifolia (chilca redonda), Baccharis latifolia (chilca larga), Piper barbatum (cordoncillo) y Bidens andicola (nachi)

Jaramillo X., Zaragoza T. y Malagón O.


Planta de Productos Naturales. Universidad Técnica Particular de Loja. Ecuador.
E-mail: omalagon@utpl.edu.ec

La investigación realizada está orientada hacia la descripción etnobotánica de cinco plantas medicinales de uso tradicional: Piper barbatum (Cordoncillo)[A], Baccharis latifolia (Chilca larga) [B], Baccharis obtusifolia (Chilca redonda) [C], Bidens andicola (Nachi) [D], Baccharis genistelloides (Monte tres filos) [E]; así como la evaluación de la bioactividad de los respectivos extractos metanólicos, frente a diversos microorganismos, algunos de ellos responsables de patologías comunes: Aspergillus niger, Neurospora crassa, Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa; a fin de determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) mediante ensayos de difusión en caja petri y dilución TC24 y TC96. El estudio muestra que todos los extractos tienen actividad antimicrobiana notoria frente a P. vulgaris y S. aureus; [A] y [C] son activos frente a K. pneumoniae; [A], [C] y [E] presentan actividad notoria frente a P. aeruginosa; [A] es activa frente a A. niger; [C] y [E] son activos frente a N. crassa; [E] resulta activo frente a S. cerevisiae; mientras que ningún extracto es activo frente a E. coli y C. albicans.
El estudio comprende, además, un análisis de la citotoxicidad frente a Artemia salina Leach para determinar la dosis letal media (DL50), resultando que los extractos [A] y [B] son tóxicos y [C], [D] y [E], medianamente tóxicos, frente al organismo.
La selección de plantas se basó en la información obtenida de comunidades rurales de la Provincia de Loja. Las encuestas aplicadas permitieron recoger importantes datos sobre: tipos de enfermedades tratadas, tipos de plantas usadas, estado fenológico, parte vegetal usada y forma de preparación.



Estudio del efecto de la catequina y del crisofanol sobre la actividad inflamatoria y hemorrágica inducida por el veneno de Bothrops asper

Malavasi P.1, Loaiza R.1, Chaves F.2 y Badilla B.1

1Instituto de Investigaciones Farmacéuticas (INIFAR), Facultad de Farmacia Universidad de Costa Rica
2Instituto Clodomiro Picado. Facultad de Microbiología Universidad de Costa Rica

En el presente trabajo se evaluó la potencial aplicación de la catequina y el crisofanol en el tratamiento del daño local producido por el envenenamiento con veneno de B. asper. Para ello se estudió la actividad antiinflamatoria, utilizando el modelo de edema de oreja de ratón inducido por TPA, en el cual ninguno de los compuestos fue eficaz en la disminución del edema a la dosis utilizada. El método Dole se realizó para comprobar la inhibición de la actividad de la PLA2 del veneno de B. asper, empleándose concentraciones de 1/50 y 1/100 (veneno/compuesto) tanto para la catequina como para el crisofanol. La actividad de la PLA2 no fue neutralizada en ninguno de los casos.
La evaluación de la actividad antihemorrágica se realizó según el modelo descrito por Kondo modificado por Gutiérrez, y no hubo disminución de la hemorragia con ninguno de los tratamientos.
La determinación de la actividad antirradicalaria con DPPH (100 M) confirmó la capacidad antioxidante de la catequina (concentración dependiente) El crisofanol, no posee actividad en este método.
Al estudiar el efecto de la catequina en la producción de NO por PMN neutrófilos de rata estimulados con LPS, se observó un aumento significativo de la producción independiente de la concentración utilizada (3,5, 35 y 350 M). El crisofanol también produjo un aumento de la producción de NO que fue mayor para todas las concentraciones probadas, al el aumento obtenido con catequina. En las células estimuladas con veneno de B. asper, se produjo una disminución de la producción de NO a la mayor concentración empleada (350 M). El tratamiento de estas células con crisofanol no modificó la producción de NO. Ni la catequina ni el crisofanol fueron tóxicos al evaluarlos en la prueba de viabilidad celular con MTT a las concentraciones empleadas.


Composition of the essential oils from four Myrtaceae species from ilha do Cardoso-sp

Watanabe F.K.1, Young C.M.2, Cordeiro I.2, Henriques A.T.3, Apel M.A.3, Limberger R.P.3 y Moreno P.R.H.1


1Instituto de Química, Universidade de São Paulo, Brasil, E-mail: prmoreno@iq.usp.br
2 Instituto de Botânica - Secretaria do Meio Ambiente- São Paulo SP
3 Faculdade de Farmácia- UFRGS- Porto Alegre -RS

The Myrtaceae family comprises ca. 3000 species distributed through 140 genus of 2 subfamlies Myrtoideae and Leptospermoideae. In Brasil, all native species belong to the subfamily Myrtoideae, which is characterised by its fleshy fruits and opposite leaves. Several species have an economical importance as spices, such as the clove (Syzygium aromaticum) and rose-pepper (Pimenta dioica), or by its edible fruits, as guajava (Psidium guajava), pitanga (Eugenia uniflora), cherry (Eugenia involucrata). Regarding its chemical composition, these species are recognized by the production of tannins, flavonoids and essential oils. In the folk medicine the leves of several Mytaceae species are used as anti-diarrhoea, diuretic and febrifuge, anti-inflammatory, hypoglycaemic among other uses (MARCHIORI & SOBRAL, 1997). From the 24 Myrtaceae genus occurring in Brazil, only 13 are found in Ilha do Cardoso, Cananéia-SP (BARROS et al., 1991). This study aims to contribute with the unveiling of the chemical constitution of the volatile oils isolated from native Myrtaceae from Ilha do Cardoso-SP. In this first attempt, the essential oil from 4 species were analysed: Eugenia flavescens, Marliera obscura, Psidium cattleyanum and Gomidesia spectabilis.
The gas chromatography analysis indicated 3 major components for P.cattleyanum (ß-cariophyllene, ß-bisabolene e ß-selinene), 2 for M. obscura ( -cariophyllene and -pineno) and E. flavescens ( -caryophyllene and spathulenol) and only one for G.spectabilis (spathulenol). In all the analysed species the major constituents were derived from the cyclization of two different conformations (2Z-6E e 2E-6E) of the farnesol precursor. In the first two mentioned species are mainly found Cariphyllene- and Aromadendrane-type skeletons, while in G. spectabilis are mainly found the Aromadendrane skeletons and only small amounts of cadinane and muurolane skeletons.



New saponins from tuberous roots of Gomphrena macrocephala

Kuroda M.1, Mimaki Y.1, Haraguchi M.2 y Young M.C.M.3

1Tokyo University of Pharmacy & Life Science, Tokyo, Japan
2Instituto Biológico, São Paulo
3 Seção de Fisiologia e Bioquímica de Plantas, Instituto de Botânica, São Paulo,
E-mail: mcmyoung@yahoo.com.br

Gomphrena macrocephala St.-Hill. is a perennial herb that grows spontaneously in Brazilian cerrado, a floristically and physiognomically diverse Savanna vegetation L . Popularly know as "paratudo", its tuberous roots are widely used in folk medicine, mainly as a tonic and stimulant. A significant molluscicidal activity against Biomphalaria glabrata was detected in the ethanolic and aqueous crude extracts of this plant. In earlier communications, the isolation of ecdysterone and chikusetsusaponin IVa and the identification of triterpenoid glucoside mixtures from ethyl acetate extract of G. macrocephala has been reported. In continuation of our studies the butanol soluble fraction of the ethanolic extract of the roots of G. macrocephala on chromatographic purification led to the isolation of 1 and nine other new triterpenoid saponins . Their structures were determined using a combination of homo- and heteronuclear 2D NMR techniques, ESIMS and chemical methods and were established .



Screening of Brazilian plants for antimicrobial and DNA-damaging activities. I. Atlantic rain forest - ecological station Juréia-Itatins

Gomes D.1, da Silva R.1, Enoque M.2, Infante C.1, da Silva V.3, Marx M.C.1, Cordeiro I.1 y Moreno P.R.H.2


1Instituto de Botânica, São Paulo-SP, Brazil
2Instituto de Química, Universidade de São Paulo, Brazil
3 Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista, Araraquara-SP, Brazil

Crude extracts from 88 plant species occurring in São Paulo State (Brazil), collected in an Atlantic Forest region, have been screened for antimicrobial and DNA-damaging activities. Of the 114 extracts assayed for antibacterial activity, only the extracts from leaves and stems of Aspidosperma ramiflorum (Apocynaceae) showed a slight activity against Escherichia coli. In the antifungal assay with Candida albicans, no active extract was observed, while in the bioautography assay with Cladosporium sphaerospermum and C. cladosporioides 12% were active. However, only the extract of Psychotria mapourioides (Rubiaceae) stems showed a strong inhibition of both fungi. The DNA-damaging assay with mutant strains of Saccharomyces cerevisiae resulted in 17.5% of active extracts. The majority (55%) of the active extracts showed selectivity for the DNA-repair mechanism of topoisomerase II and only 20% showed a selective response for the mechanism of topoisomerase I.



Actividad antiulcerogénica y analgésica de las fracciones acuosa y acetato de la I. truxillensis Kunth

Cola, M.1, Barbastefano V.1, Ferreira A.L.1, Vinagre A.M.1, Hiruma C.A.2, Vilegas W.3, Calvo T.R3. y Souza R.M1

1Departamento de Fisiologia e Biofísica, Inst. Biologia, UNICAMP, Campinas, SP, Brasil.
2Departamento de Fisiologia, Inst. de Biociências, UNESP, Botucatu, SP, Brasil.
3Departamento de Química Orgânica, Inst. Química, UNESP, Araraquara, SP, Brasil
. E-mail: mcola1@yahoo.com.br

Objetivo:
La I. truxillensis, es una especie típica del cerrado del estado de São Paulo - Brasil, conocida popularmente como indigo ó anileira. Es una planta menos estudiada desde el punto de vista fitoquímico y farmacológico de que otras especies del género. En este trabajo fue evaluada la actividad antiulcerogénica y analgésica de las fracciones (acuosa y acetato) en partes aéreas de la I. truxillensis en dos modelos experimentales.

Métodos:
Para la obtención de las fracciones, las partes aéreas da planta fueron molidas, secas y percoladas en metanol. El extracto fue entonces filtrado y concentrado por destilación la presión reducida en rotoevaporador, en seguida fue realizado una partición del extracto en acetato de etilo y agua, obteniendo las fracciones acetato (fAc) y acuosa (fAq). Para probar la actividad antiulcerogénica y analgésica de las fracciones de I. truxillensis fueron utilizados modelos de úlcera inducida por etanol en ratas (Wistar) y contorción abdominal inducida por ácido acético en ratones Swiss. Fueron hechas administraciones vía oral de las fracciones de la I. truxillensis en las dosis de 50, 100 ó 200 mg/kg, salina 0,9% ó Tween 12% (control negativo) y lansoprazol 30 mg/kg ó dipirona 200 mg/kg (control positivo), dependiendo del modelo. Los resultados obtenidos en cada modelo fueron expresados por la media d.p. del IU (índice ulcerativo), seguido del porcentaje de protección en relación al control negativo. En la evaluación estadística fue empleado el test de ANOVA (p < 0,05) y test a posteriori de Dunett.

Resultados:
La actividad antiulcerogénica, observada en trabajos anteriores con extracto metanólico de la I. truxillensis, fue demostrada también con las fracciones fAq y fAc, pues redujo significativamente las lesiones gástricas, además de eso, hay evidencia de una actividad analgésica reduciendo el número de contorciones abdominales en los modelos propuestos. En el modelo de ulcera inducido por etanol, (N=5) en ratas, fAq, con control negativo (66.4 + 15.7), la protección fue observada en las dosis 50, 100 e 200 mg/Kg (35.6 17/46%, 13.8 6.3/82% e 17.2 15/82%) y fAc, con el control negativo (33.8 13.1), la protección fue observada en las dosis de 50, 100 e 200 mg/kg (6.4 2.7/81%, 6.2 4/82% e 6 2.5/82%). En el modelo de contorción abdominal inducido por ácido acético, (N=5) en ratones, fAq, con control negativo (36.6 + 8.2), la protección fue observada en la dosis de 100 mg/kg (21 + 13.1/43%) y fAc, con control negativo (49 + 9.8), la protección fue observada en la dosis de 100 mg/kg (34 9.5/31%).

Conclución:
Los resultados preliminares de los modelos de inducción de ulcera y contorción abdominal presentados, demuestran la actividad antiulcerogénica y analgésica de las fracciones acuosa y acetato de la especie I. truxillensis.



Estudio de la actividad antiulcerogénica del extracto bruto metanólico de Anacaridum humile St. Hil. (Anacardiaceae)

Ferreira A.L.1, Vinagre A.M.1,; Barbastefano V.1, Cola M.1, Hiruma C.A2, Serra C.B3,Vilegas W.3 y Souza A.R.1

1Departamento de Fisiología y Biofísica, Inst. Biologia, UNICAMP, Campinas, SP, Brasil.
2Departamento de Fisiología, Inst. de Biociencias, UNESP, Botucatu, SP, Brasil.
3Departamento de Química Orgánica, Inst. Química, UNESP, Araraquara, SP, Brasil.
E-mail: abrito@unicamp.br

Las plantas medicinales han sido desde los inicios de la civilización un recurso accesible al ser humano durante milenios el hombre empiricamente profundizo su conocimiento para cura de sus enfermedades demostrando así una estrecha relación entre uso de plantas medicinales y su evolución. Son muchos los factores que vienen colaborando para el desarrollo de practicas de salud que incluyan plantas medicinales. Según la OMS 80% de la humanidad no posee acceso al atendiento primario de salud, las enfermedades ulcerativas del tracto gastrointestinal son un ejemplo clásico de gravedad de salud por tratarse de una enfermedad crónica que requiere tratamiento caros tanto para el paciente como para el sistema público de salud. La investigación de la ulcera peptica es de gran valor pues las plantas medicinales tienen gran potencial terapéutico lo que se constituye en estrategia para la descubierta de nuevos fármacos.
Muchas plantas medicinales han sido reportadas como útiles en el tratamiento de los disturbios gástricos, sea estimulando los factores de protección de la mucosa gástrica o inhibiendo las secreciones gástricas.
Como materia prima de los medicamentos contra ulcera representa una gran dependencia de las empresas farmaceuticas multinacionales para la industria nacional, el estudio de plantas medicinales de nuestra flora se convierte en una alternativa mas viable para todos, rompiendo esa dependencia y volviendo el tratamiento más barato para el paciente y para el estado.La especie en estudio Anacardium hmile St. Hill, proviene de la mata atlántica que posee una gran biodiversidad incluyendo formaciones florestales y ecosistemas asociados, dentro de las diferentes especies vegetales en la mata atlántica, encontramos la família Anacardiaceae, com 79 género y más de 600 especies. Como ejemplo nativos del brasil destacan las especies Anacardium, dentro de ellas el Anacardium humile St. Hill, descrito por Auguste de Saint-Hilaire (1779-1853).
El Anacardium humile St. Hill, tiene un hábito arbustivo, que puede llegar 50 cm, formando una floresta abierta, con muchas ramas a partir de un sistema subterraneo bien desarrollado (Xilópodes). Las hojas son brillantes sin pelos, alternas, ovaladas con apendice alargado. Las flores son delicadas y de coloración roja-rosada, los frutos son grises y en forma de riñon, con una semillas (castañas). Ya el pedunculo es bien desarrollado (pseudofruto), rojo, con la pulpa blanquesina. Es conocido popularmente como cajuí, cajú, cajuzinho del campo, cajú del campo.
El extracto metanólico fue obtenido apartir de la torta resultante de la extracción com diclorometano, que fue macerada por una semana con MeOH puro y, después de la primera estación el procedimiento fue repetido con la finalidad de extraer los componentes polares de la planta. La mezcla fue entonces filtrada en papel de filtro e concentrada en rotavapor, bajo presion reducida dando el extracto metanólico.
Estudios fitoquímicos mostraron la presencia de un biflavonoide, se sabe que los flavonoides son los responsables por vários efectos biológicos tales como antioxidantes, antiinflamatorio, antitrombolitico y antiulcerogénico entre otros. Los modelos experimentales adoptados en este trabajo fueron seleccionados para garantizar reproductibilidad en relación a las principales causas de la ulcera en el hombre.
En la evaluación de la actividad antiulcerogénica fueron realizados experimentos de induccion aguda de ulcera gástrica por etanol, piroxican y HCL/Etanol.
En la evaluaciones antiulcerogénicas el extracto de Anacardium humile se mostro muy eficiente, para los modelos arriba describidos.En el modelo etanol (N=5), con control negativo (103,6 19,3 mm), se observo protección en la dosis de 500 mg/kg (0,6 0,6 mm) p<0,01.En el modelo piroxican (N=7) con control negativo (12,0 3,9 mm) se observo protección en la dosis de 500 mg/kg (3,0 1,4 mm) p<0,01 y en el modelo etanol HCL (n=5) con control negativo (14,2 5,5 mm) se observo protección en la dosis de 500 mg/kg (2,4 0,8 mm) p<0,01. Los estudios estan aun en andamiento, faltando probar las fracciones y los mecanismos de acción envueltos en esa protección gástrica.La accion antiulcera parece ocurrir tanto por alteraciones en la secrecion acida gastrica, cuanto por aumento de los agente citoprotectores de la mucosa. La investigacion com especies brasileiras tiene gran importancia tanto para seguridad nacional como para preservacion de los ecosistemas donde existan tales especies de plantas.



Evaluación de la actividad antiulcerogénica del extracto de Chorella vulgaris

Vinagre A.M1, Cola M1, Barbastefano V.1, Ferreira A.L.1, Collares E.F2 y Souza R.M.1

1Departamento de Fisiología y Biofísica, Inst. Biología, UNICAMP, Campinas, SP, Brasil.
2Centro de Investigación pediatra, Faculdade de Ciencias Médicas, UNICAMP, Campinas, SP, Brasil.
E-mail: avinagre@hotmail.com

Objetivos:
Chlorella vulgaris es una micro alga unicelular de aguas heladas utilizada como suplemento alimenticio en comunidades japonesas. Esta siendo estudiada debido a sus propiedades antitumorales, antiulcerogénicas e incrementadora de las funciones del sistema inmunocelular. En este trabajo fue evaluada la actividad antiulcerogénica del extracto acuoso Chlorella vulgaris (Chlorella Industry Co).

Métodos:
El extracto acuoso de la C. vulgaris fue obtenido con Chlorella Industry Co, conteniendo 44,4 g de proteína, 39,5 g de carbohidratos, 15,4 g de ácidos nucléicos en 100 g de extracto. La actividad antiulcerogénica C. vulgaris fue evaluada através de modelos de ulcera aguda inducida por piroxican (DAINE) en ratones Swiss, ulcera aguda inducida por etanol y ulcera subcrónica inducida por ácido acetico (30%) en ratas wistar. En los modelos de ulcera aguda los animales fueron divididos en los siguientes grupos: control negativo, agua deionizada (1ml/100g); control positivo, lansoprazol 30 mg/kg ó cimetidina 100 mg/kg dependendo do modelo; y como tratamiento, extracto de la C. vulgaris en las dosis de 250, 500 y 1000 mg/kg. En el modelo de ulcera subcrónica los animales fueron divididos en dos grupos: control negativo, agua deionizada y tratados com extracto de C. vulgaris en la dosis de 100 mg/kg durante 14 dias después de la inducción de la ulcera. Los resultados obtenidos en cada modelo fueron expresados por la mediana de IU ( indice ulcerativo) seguido del porcentaje de protección en relación al control negativo. En la evaluación estadística fue empleado el test de Kruskal-Wallis ( =0,05) e teste a posteriori de Dunn.

Resultados:
Los resultados obtenidos demuestran que el extracto acuoso de C. vulgaris posee actividad antiulcerogénica en modelo de ulcera aguda inducida por etanol en ratas (N=7), cuando empleada en la dosis de 1000 mg/kg (mediana =10,0/88,2%), cuando comparados com el control negativo (mediana =85,0). En modelo de ulcera subcrónica inducida por ácido acetico en ratas (N=13), cuando empleada la dosis de 1000 mg/kg (mediana=4,31/55,6%), cuando comparadas con el control negativo (mediana=9,71). No fue observada la actividad antiulcerogénica en el modelo de ulcera aguda inducido por piroxican.

Conclución:
Los resultados preliminares presentados de los modelos de inducción de ulcera aguda por etanol y subcrónica por ácido acetico demuestran una actividad antiulcerogénica del extracto acuoso de C. vulgaris.



Evaluación farmacognóstica de Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng

Menéndez R., Carballo C., Echevarria I. y Rodríguez C.A.

Plectrhanthus amboinicus (Lour.) Spreng. (Lamiaceae) denominada popularmente en Cuba como Orégano francés, Orégano, Oreganón y Orégano de la tierra, es utilizada tradicionalmente en el tratamiento de afecciones respiratorias, siendo de gran demanda los fitofármacos elaborados por los centros de producción local, por lo que se hizo necesario desarrollar los correspondientes estudios farmacognósticos, con vistas a establecer las especificaciones de calidad y a su vez, garantizar la calidad de la materia prima vegetal de dicha especie.
Se realizaron las descripciones macromorfológicas y micromorfológicas, fue determinado el método idóneo de secado mediante la evaluación de la humedad residual, del aceite esencial y del contenido de carvacrol en el aceite esencial por cromatografía gaseosa.
Además, se evaluaron los índices numéricos, las condiciones de envase y almacenamiento de la planta cultivada en la Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig".
Resultando los envases más adecuados para la conservación de la droga seca y el frasco de vidrio durante 9 meses a temperatura ambiente y protegido de la luz.bLos resultados obtenidos nos permitieron elaborar las especificaciones de calidad de la droga seca de Plectrhanthus amboinicus (Lour.) Spreng:



Evidencias pre-clínicas y clínicas del efecto antiagregante plaquetario del policosanol de cera de caña de azúcar

García M., Coma A.C., Fernández J. y Díaz A.

Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular, Cerro, Ciudad de la Habana, Cuba

Antecedentes:
El policosanol es un producto cubano con acción hipocolesterolemizante que se obtiene a partir de la cera de caña de azúcar .

Objetivo:
Análizar las evidencias pre-clínicas y clínicas sobre su efecto antiagregante plaquetario.

Métodos:
Se revisaron los resultados de los ensayos pre-clínicos y clínicos dirigidos a evaluar el efecto del policosanol sobre la agregación plaquetaria.

Resultados:
La administración oral a ratas redujo significativamente la agregación plaquetaria en plasma de ratas inducida por ADP y por colágeno (dosis de 50 y 200 mg/kg) Y redujo la concentración de tromboxano A2 en el suero (dosis 25 mg/kg). También disminuyó la agregación plaquetaria intravascular inducida por una inyección intravenosa de colágeno (10 y 20 mg/kg). Los ensayos randomizados contra placebo demostraron la reducción (aproximadamente 30 %) de la agregación plaquetaria inducida por diferentes estímulos en plasma de voluntarios sanos (dosis 10 a 20 mg/día, al menos 7 días). Los ensayos randomizados contra placebo en pacientes con hipercolesterolemia tipo II y con diabetes mellitus tipo II mostraron la reducción de la agregación plaquetaria inducida por ADP. Resultados preliminares de la caracterización de la agregación plaquetaria en sujetos que consumen policosanol han sugerido un efecto potenciador de la acción antiagregante de la aspirina.

Conclusión:
El policosanol obtenido de la cera de la caña de azucar posee acción antiagregante plaquetaria frente a diferentes estímulos, en una forma dependiente de la dosis, lo cual ha sido comprobado en ensayos clínicos en voluntarios sanos y en sujetos con riesgo aterotrombótico.



Chemical-pharmacological study of Operculina macrocarpa L. Urban (Convolvulaceae)

Carvalho D.1, Sannomiya M.2, Campaner L.2, Vilegas W.2 y Nunes H.R.1

1Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, UNESP, Araraquara, SP, Brasil.
2Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, Araraquara, SP, Brasil.
E-mail: michelin@fcfar.unesp.br

The Convolvulaceae family is composed of approximately 2000 species. A great variety of secondary metabolites contend N is found in this family as ergoline, pirrolidine, hydrophilic and lipophilic tropanes, indolizidinics and Pirrolizidinics alkaloids L. Operculina macrocarpa L., pertaining to this family, occurs in the Brazilian northeast and widely is used by the population due its activities laxative and purgative2. However, stories do not exist on the chemical-pharmacological study of O. macrocarpa. Inside of this context, this work aims at to carry through the study of this species. The tubercles are dried, grinded and had been submitted to the successive extractions for maceration in EtOH 70%. After that, consecutive partitions with dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol had been carried through. Chemical analysis was carried out the separation of compounds from the ethyl acetate fraction by a chromatography on Sephadex® LH20, leading to the isolation of cafeic and protocateic acids, and a cafeic acid dimer, whole characterized by spectroscopic methods by Nuclear Magnetic Resonance and compared with literature values. The AcOEt fraction was evaluated on the gastrintestinal motility in mice3,4. The experimental results had been express in average ± shunting line standard. The analysis statistics was carried through by the test t-Student (P<0,05) (Table 1).

Table 1. Intestinal motility test by O. macrocarpa

Treatment
Dose
Movement of charcoal meal as percentage of full intestinal length (%) ±standard deviation
Fraction AcOEt
100 mg/kg
85.42 ± 9.85
Control
10 ml/kg
52.79 ± 30,39

The chemical study of the AcOEt portion of the hydroethanolic extract of the O. macrocarpa resulted in the isolation of the cafeic and protocateic acids, and a cafeic acid dimmer. Preliminary pharmacological assays confirm the popular use of the plant as laxative. The isolated chemical constituents can be related with this activity, justifying the continuity of the studies chemical-pharmacological of this specie.


Actividad biológica en plantas medicinales Amazónicas

Miño C.P., Chiriboga P.X. y Moreno R.G.

Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Central del Ecuador.

La investigación se realizó en 25 plantas medicinales recolectadas en las reservas forestales de las comunidades de Arajuno en la provincia de Pastaza y Talag en la provincia de Napo.La investigación de la actividad gastroprotectora se realizó con el método de Robert y col., que consiste en desarrollar lesiones gástricas evaluables mediante la administración de etanol como agente necrosante a lotes de animales de experimentación, para inducir en forma exógena ulcera gástrica aguda, Ranitidina como fármaco de referencia, demostró que los extracto acuoso de: Baccharis macrantha Kunth tiene un porcentaje de inhibición del 64.62% a una concentración de 50mg/kg y un 89.35% a una concentración de 100mg/kg.; Ardisia weberbaueri Mez. (Tacucaspi) tiene un porcentaje de inhibición del 88.75% a una concentración de 50 mg/kg y un 78.75% a una concentración de 100 mg/Kg.; Baccharis macranta tiene un porcentaje de inhibición del 55.83% a una dosis de 0.5ml., un 129.53% a una dosis de 1.0 ml.; Phyllanthis acidus (L) Skeels tiene un porcentaje de inhibición del 40.67% a una dosis de 0.5ml.;
Los Extractos hidroalcohólico de: Aristeguieta glutinosa 86,95% a una dosis de 50mg/kg; Cordia lutea 86.96% a una dosis de 50mg/kg; Guazuma ulmifolia 89,13% a una dosis de 50mg/kg; Miconia serrulata 84,78%; a una dosis de 50mg/kg y los latex de Jatropha curcas 80,43% a una dosis de 1ml, Phyllanthis acidus (L) Skeels tiene un porcentaje de inhibición del 79.10% a una dosis de 100mg/kg.; Ardisia webaerbauneri (Tacucaspi) en actividad gastroprotectora con un porcentaje de inhibición del 55.23% a una dosis de 0.5ml., un 39.12% a 1.0 ml., Los resultados del screening in vitro de la actividad antibacteriana de los extractos etanólicos totales de 25 plantas, sobre 4 bacterias Gram negativas y 4 bacterias Gram positivas patógenas, demuestran que los que mayor actividad presentaron fueron: Acacia multipinnata Ducke, que a partir de 500ppm presentan una actividad del 100% sobre las 8 bacterias investigadas, Dussia tessmanii Harms que a partir de 100ppm presentan una actividad del 50 al 75% sobre 6 de las 8 bacterias investigadas.
Los resultados del screening in vitro de la actividad antimicótica de los extractos etanólicos totales de 25 plantas, sobre Cephalosporium spp., Ephydermophyton flocossum, Tricophyton mentagrophytes, demuestran que los que mayor actividad son: Acacia multipinnata Ducke, Cespedesia spathulata (Ruiz & Pav.) Planch, Phyllanthus acidus (L) Skeels, que tienen una actividad del 100%, a partir de una concentración de 1000ppm de extracto.



Protection of a Ginkgo biloba extract against the effects of the stannous chloride, a substance that may act promoting depression or stimulation of the cerebral nervous system

Moreno S.R.F.1,Freitas R.S.2, Rocha E.K.3, Pereira M.4, Nascimento AL.R.5, Carvalho J.J.5, Barreto V.G.6, Lima G.L.2, Diré G.2, Lima E.AC.2 y Bernardo M.2

1Departamento de Patologia, Universidade Federal Fluminense, Niterói, RJ, Brasil.
2 Departamento de Biofísica e Biometria,
3 Departamento de Biologia Celular e Genética,
4Departamento de Fisiologia,
5Departamento de Histologia e Embriologia, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Instituto de Biologia Roberto de Alcântara Gomes, Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
6 Departamento de Biofunção, Universidade Federal da Bahia, Salvador, BA, Brasil.

Ginkgo biloba extract (EGb) is a phytoterapic used to increase peripheral and cerebral blood flow for treatment of ischaemic cerebral diseases and neurological disorders, such as, the Alzheimer's disease. This extract has several effects, including: increases the blood flow, acts as platelet activating factor antagonism and prevents the membrane against the damage caused by free radicals. It was demonstrated that tin, as stannous chloride (SnCl2), when injected into laboratory animals, it can produce stimulation or central nervous system depression. Since calcium (Ca) influx into the cytoplasm is indispensable to release the transmitter, it would be possible that SnCl2 increases the Ca2+ influx at the nerve terminals but not by blocking the K+ channels. There is no general agreement regarding its genotoxicity and it was discussed that the effects of this salt might depend on the physicochemical conditions and the route of its administration. SnCl2 has been used in many sectors of human interest, such as the food industry and nuclear medicine. This salt is directly administered to human beings endovenously when it is used as a reducing agent to prepare 99mTc-radiopharmaceuticals, which are also used in cerebral studies. SnCl2 is capable to promote the generation of reactive oxygen species (ROS) that are responsible for the oxidative stress. Oxidative stress has been related with the aging and other neurological diseases. We decided to study the influence of the medicinal plant, the EGb, metal chelating and reactive oxygen species scavengers against the SnCl2 deleterious effects evaluating the supercoiled plasmid DNA. results show that SnCl2 produces lesions in vitro on supercoiled plasmid DNA. The literature has showed that this inactivation may be due to the production of ROS. We observed that the genotoxic effect of SnCl2 was partly inhibited or disappeared when the treatment was in presence of the Ginkgo biloba extract. Action similar to the metal chelating and ROS scavengers described in literature. In conclusion, it is possible to suggest that the SnCl2 biological effects associated with the generation of ROS can be inhibited by substance presents on the Ginkgo biloba extract.



Assessment of the interference of natural extracts on the labeling of red blood cells and plasma proteins with technetium-99m: in vitro study

Diré G.2, Moreno S.R.F.1, Lima E.A.C.2, Rocha E.K.3, Carvalho J.J.4, Nascimento A.L.4, Freitas R.S.2 , Barreto V.G.5 and Bernardo M.2

1Departamento de Patologia, Universidade Federal Fluminense, Niterói, RJ, Brasil.
2Departamento de Biofísica e Biometria,
3Departamento de Biologia Celular e Genética,
4 Departamneto de Histologia e Embriologia, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes, RJ, Brasil.
5Departamento de Biofunção da Universidade Federal da Bahia, BA, Brasil.

Sechium edule (Chayotte) is a cucurbitaceus species, which is used as food with potent diuretic action. Cauliflower from Cruciferae family has its leaves used for a variety of conditions in popular medicine. Ginkgo biloba is a phytoterapic that has anti-oxidant properties with an important role in pathologies, such as ischaemia and Alzheimer's disease. The technetium-99m (Tc-99m) has been the most utilized radionuclide in nuclear medicine procedures and it has also been used in basic research. There are many applications of Tc-99m-labeled red blood cells (RBC) most important is in cardiovascular nuclear medicine, where one tries to image the heart to determine its functional status as a pump, to calculate the left ventricular function by measuring the ejection fractions, and to evaluate wall motion abnormalities. Then we have evaluated the influence of these drugs on the labeling of RBC and plasma proteins with Tc-99m. Blood was incubated with each drug alone. Stannous chloride and Tc-99m were added. Plasma (P) and blood cells (RBC) were isolated, also precipitated with trichloroacetic acid and soluble (SF-P) and insoluble fractions (IF-P) were separated. The analysis of the results shows that just Ginkgo biloba interferes on the labeling of RBC and plasma proteins proteins (from 97.69 0.7 to 49.54% 3.9% in RBC, from 73.84 6.67 to 11.68 3.06 in IF-P and from 87.18 2.86 to 32.80 10.77, 4mg/mL in IF-RBC, there are a significant decrease p<0.05). The analysis of the results with Sechium edule and Brassica oleracea, L. indicates that there is not a decrease (p>0.05) on the labeling of the blood elements. The chemical agents presents in the Ginkgo biloba extract could have a chelating action to stannous and pertechnetate ions and/or bind to the binding sites of Tc-99m in plasma proteins.



Evaluation of the action of the natural drugs on the bioavailability of the sodium perthecnetate radiopharmaceutical: structural analysis of the organs from treated animals with Ginkgo biloba

Moreno S.R.F.1, Carvalho J.J.2, Rocha E.K.3, Nascimento A.L.R.4, Barreto V.G.5, Freitas R.S.2, Lima G.L.2 and Bernardo M.2


1 Departamento de Patologia, Universidade Federal Fluminense, Niterói, RJ, Brasil. E-mail: srfmoreno@hotmail.com
2 Departamento de Biofísica e Biometria,
3 Departamento de Biologia Celular e Genética,
4Departamento de Histologia e Embriologia, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes, Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
5 Departamento de Biofunção, Universidade Federal da Bahia, Salvador , BA, Brasil.

Ginkgo biloba extract (EGb) is a natural product that composes one of the therapeutic principal ressources of the herbal medicine. The EGb has effects already established, such as, anti-inflammatory, anti-coagulant and anti-oxidant properties. This last action accustoms to be justified for flavonoid presence, potent free radicals scavenging specially the superoxides and hydroxyl radicals. Meanwhile, the molecular and cellular mechanisms underlying these effects have not been determined. There are reports that describe the exogen interference: on the biodistribution of this radiopharmaceutical. One of these causes may be an herbal drug presence. The aim of this work was to evaluate the effect of the EGb: (ii) on the biodistribution of the 99mTc and on the morphology (electronic microscopy) of some organs with altered uptake of the 99mTc. On the following methods it was employed only the crude extract of EGb. For the study of effect of EGb on the biodistribution of radiopharmaceutical of 99mTc of organs and on ultraestructural morphology of this organs, the Wistar rats (n=5) were treated (intragastric via) during 6 days with EGb (40 and 400mg/ml) and after this period they received (endovennous via) the 99mTc radiopharmaceutical. After 10 minutes, the animals were sacrificed, the organs withdrawed and introduced on the gamma counter for % ATI determination. It was calculated the % ATI / organ and %ATI / gram of tissue. For the morphology evaluation of organs, it was carried out the fixation of kidney, liver and duodena and the their preparation in the epox resin blocks, the ultrafine preparations were taked. The images were captured and saved in a computer or photographed. The study of the effect of EGb on the biodistribution has showed that there was increase of % ATI in the kidney and liver (P>0.05) and a redution significant of the uptake of 99mTc by duodena (P<0.05). The ultraestructural evaluation of the organs of the animals treated with EGb (in vitro) showed a significant morphological alteration on the liver, kidney and duodena. The development of biological models to evaluate the drug interaction may be important to research medicinal plants, as also in the diagnosis and treatment with pharmaceuticals, to enjoy of the benefits and to control the undesirable effects. Morphological alterations observed on the kidney, liver and duodena, would be explained by the possible metabolization of the extract, producing active compounds capable (in the experimental conditions employed) to injure the cellules to the ultraestructural level.



Chemical constituents of Nectandra saligna Nees (Lauraceae)

de Melo N.T.K.1, Collantes I.E.D.2 and Yoshida M.2

1 Faculdade de Farmácia e Bioquímica, Universidade do Oeste Paulista, Presidente Prudente-SP, Brasil.
2 Instituto de Química, Universidade de São Paulo, São Paulo-SP, Brasil.
E-mail: myoshida@iq.usp.br

N. saligna is an arboreous species which occurs in Atlantic Rain Forest and in inland of the Southeastern States of Brazil. Popularly known as "canelinha", it is used in the West Region of São Paulo State for relieve muscular pain due to analgesic and antiinflammatory properties of its roots.
Leaves of this species were collected in two localities [Presidente Prudente-SP (I) and Presidente Venceslau-SP (II)], I during the Fall (May) and II during the Spring (October).
The chemical constituents were isolated from fractions obtained, after partitions, and submitted to the chromatographic tecniques, afforded two sesquiterpenes: espatulenol (1) and alismol (2); two phenylpropanoids: elemicin (3) and asarone (4); two neolignans: veraguensin (5) and calopiptin (6). The alismol was found only in leaves of I and espatulenol only in leaves of II.
Bioassay of ethanol extract of leaves carried out with Artemia salina or growth inhibitory activity against microorganism (Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa) showed low toxicity.
Finally, it was isolated, by usual procedure for the alkaloid isolation, an aporphine alkaloid, the liriotulipiferine (7), from methanol extract of barks.


Attività antibatterica di estratti e flavonoidi isolati da Inga fendleriana

Pistelli L., Noccioli C., Bertoli A., Casciaro E., Mendez J., Morelli I., Musmanno R.A., Di Maggio T. y Coratza G.

Il genere Inga (famiglia Fabaceae, sottofamiglia Mimosoideae) comprende alberi diffusi nelle foreste tropicali sudamericane, noti nella medicina popolare degli indigeni dell'Amazzonia. Dalle parti aeree di I. fendleriana Benth., sottoposte ad estrazione in apparecchio Soxhlet con solventi a polarità crescente, sono stati isolati quattro flavonoidi (apigenina, tricetina, quercetina 3-metiletere, miricetina 3-rhamnoside) oltre ad acido betulinico, identificati mediante tecniche spettroscopiche.
Gli estratti ottenuti ed alcuni composti puri sono stati sottoposti a test di attività antimicrobica: l'attività antibatterica è stata saggiata su 31 ceppi Gram positivi e Gram-negativi determinando le concentrazion minime inibenti (MIC) in agar. Degli estratti testati, solo quelli ottenuti dall'acetato di etile (A) e dal butanolo (B) sono risultati attivi ed esclusivamente nei confronti dei ceppi di Staphylococcus, mostrando uno spettro d'attività sostanzialmente simile, con valori di MIC compresi tra 850 g/ml e 125 g/ml. Sono state determinate inoltre le MIC e le MBC (Concentrazione Minima Battericida) della miricetina 3-rhamnoside e della quercetina 3-metiletere sui ceppi che erano risultati sensibili agli estratti: entrambi i composti sono risultati attivi, con valori di MIC variabili da 250 g/ml a 31 g/ml. I valori delle MBC indicano che le due sostanze hanno attività battericida.



Effect on passive cutaneous anaphylaxis, bronchial spasm and tonicity of aqueous extract of Boerhavia erecta L.

Nuñez Y., Tillán J., Carrillo C., Vega Y., Guerra M., Rivero R. y Garrigó E.

Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos - CIDEM. La Habana. Cuba. E- mail: cidem@infomed.sld.cu

We study the anti-allergy properties conferred to Boerhavia erecta L over the anaphylactic mediators and H1 receptors at bronchial level, so we carry out the tests of passive cutaneous anaphylaxis in rats. Bronchial spasm and tonicity, and contractility of intestinal flat musculature were evaluated in guinea pigs. As result we can affirm that the extract watery of Boerhavia erecta L inhibit the passive cutaneous anaphylaxis and the bronchial spasm induced by histamine. We could also appreciate to the dose of 100 mg/kg of Boerhavia erecta L after intravenous administration the contraction increases in 46% caused by histamine 15 µg/kg and to superior concentrations to 1 mg/ml causes contraction of the intestinal flat musculature.
Besides, the antihistaminic and anticholinergic activity of aqueous extract of Boerhavia erecta L were investigated on isolated guinea-pig ileum, and dose response curves of histamine and acetylcholine with and without extract were plotted. Atropine and diphenhidramine were used for comparison. We induced cholinergic and histaminic receptor blockade and after, these receptor were stimulated witch aqueous extract of Boerhavia erecta L. The results show that aqueous extract of Boerhavia erecta L at the concentration range of 0.1-1 mg/ml don't exhibited anticholinergic activity and presented significant blocking of histamine induced contraction on guinea pig ileum in a dose-related manner.



Toxicity, anti-inflammatory and analgesic activity of the aqueous suspension of Ocimum tenuiflorum L

Lagarto A., Bárzaga P., Núñez Y., Bueno V., Guerra I., Vega Y., Valdés O., Gabilondo T., Carrillo C., Agüero S., Valdés Y.y Olivera M.

Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos - CIDEM. La Habana. Cuba.

The lyophilized aqueous suspension from Ocimum tenuiflorum L was screened for its preclinic toxic effects, and for its activity on nociceptive and inflammatory responses in experimental animals. In the present study, acute toxicity was determined using the limit test at the dose of 2000 mg/kg and oral subchronic toxicity was determined for a period of 13 weeks with the administration of three doses (250, 500 and 1000 mg/kg/day) to Wistar rats of both sexes, following the OECD Test Guideline methodology. The acute and subchronic administrations of lyophilized aqueous suspension from Ocimum tenuiflorum L were neither lethal nor did it cause toxic manifestations. In the subchronic toxicity test, the normal weight increment, food consumption, hematology, clinical biochemistry, organ's relatives weight and hystopathological analysis of organs and tissues evidenced an absence of toxic symptoms. Pharmacological assays included the evaluation of the anti-inflammatory and antinociceptive activities in rats and mice. Although the lyophilized aqueous suspension from Ocimum tenuiflorum L acutely administered (250; 500; 1000 mg/kg) inhibited the increase of paw edema induced by carrageenin, dextrana or histamine, it was ineffective on anti-inflammatory response on serotonin-induced edema. In a cotton pellets subcutaneously implanted model (50; 150; 450 mg/kg/day) Ocimum tenuiflorum 150 and 450 mg/kg inhibited granulomatous tissue formation without affecting thymus's neither adrenal's weight. Oral administration of lyophilized aqueous suspension from Ocimum tenuiflorum L (250; 500; 1000 mg/kg) led to significant antinociceptive effect against acetic acid-induced writhing test method in mice and tail-flick test using immersion of the tail in rats. In the hot plate test, Ocimum tenuiflorum significantly increased the latency time of jump only with the highest dose. These results indicated the involvement of both central and peripheral action in the antinociceptive effect of the lyophilized aqueous suspension from Ocimum tenuiflorum L, being especially intense in visceral pain, suggesting that it could be a consequence of its anti-inflammatory action.



Citotoxicidad sobre Artemia salina de aceites esenciales recolectados en la república Argentina

Oliva M.1, Soria Y.1, Sabini L.1, Zygadlo J.2 y Demo M.1

1Departamento de Microbiología e Inmunología. Fac. Cs Ex. Fco-Qcas y Naturales. UNRC. Córdoba, Argentina.
2Departamento de Química, Cátedra de Química. Org y Prod. Naturales. Fac. Cs Ex, Fcas y Naturales. UNC Córdoba, Argentina

Email: mdemo@exa.unrc.edu.ar

Artemia salina es un crustaceo fácil de cultivar en los laboratorios. Los ensayos realizados con este organismo pueden ser considerados útiles y confiables para estudios de toxicidad de sustancias con distintos efectos biológicos. A pesar de que la citotoxicidad evaluada sobre A.salina puede coincidir con los resultados obtenidos sobre células de mamíferos, no siempre se puede correlacionar el grado de toxicidad entre los dos sistemas. (1, 2). Sin embargo resulta útil para aproximar concentraciones no citotóxicas de trabajo para sistemas celulares de mamíferos.
Siguiendo la metodología descripta por Fransen et al, 1997, se realizó el análisis de citotoxicidad sobre Artemia salina, a aceites esenciales (AE) extraídos de las siguientes especies vegetales, autóctonas de Argentina: Aloysia polystachia, Aloysia triphylla, Anemia tomentosa, Bacharys spartoides, Chenopodium ambrosoides, Hyptis mutabilis, Lantana xenica, Mintostachys verticillata, Myrcianthes pseudo-mato, Ophyosporus charrua, Schinus patagonicus y Schinus poligamus. El ensayo consistió en dejar eclosionar durante 24-36 h huevos del crustáceo en un vaso de precipitado conteniendo una solución de sal marina al 3,3% a 20-25ºC, luego de la eclosión las larvas se trasvasaron a una placa de Petri. En placas de 24 pozos se agregaron 30-40 larvas en 1000 l de agua marina y 1% de las diluciones de AE a probar. Se realizaron diluciones factor 2 de los mismos en dimetilsulfóxido (DMSO) a su concentración no citotóxica determinada previamente (1/200). Se incubaron las placas a temperatura ambiente durante 24 horas y se determinó el número de larvas utilizando una lupa. Se contó el número de larvas muertas y luego se dejaron las placas durante 12 horas a -20ºC para realizar el recuento de larvas totales y determinar así el porcentaje de mortalidad (relación entre el número de larvas muertas con respecto al número de larvas totales). Luego se determinó la dosis letal 50 (DL50) y la Máxima Concentración Tolerada (MCT) utilizando el método estadístico de Finney´s. Se tomó como valores no tóxicos la DL50 a concentraciones mayores de 1000 g/ml, (1, 3, 4).Según los resultados expresados en la Tabla 1, se deduce que las especies no tóxicas para A. salina fueron: A.polystachia presentando un valor de DL50 de 6459 g/ml, seguida por M. verticillata (DL50: 1848 g/ml), A.triphylla (DL50: 1279 g/ml) y S. poligamus (DL50: 1179 g/ml). Los aceites esenciales más tóxicos fueron los de B. spartoides y H. mutabilis, debido a que solo se necesitó una concentración de 30 g/ml y de 14 g/ml respectivamente para matar al 50% de las larvas de Artemia. Cabe destacar que A. polistachya no resultó tóxica incluso a la MCT (3530 g/ml), por lo que este aceite merece estudiarse exhaustivamente a fin de ser aplicado como fitofármaco.

Tabla 1. Dosis letal 50 (DL50) y máxima concentración tolerada (MCT) de aceites esenciales

Aceite esencial
DL50 g/ml
MCT g/ml
A. polystachia
6459
3530
A. triphylla
1279
710
A. tomentosa
968
392
C. ambrosoides
351
34
H. mutabilis
30
0
L. xenica
995
0
M. verticillata
1848
873
M. pseudomato
121
20
O. charrua
972
72
B. spartoides
14
0
S. patagonicus
450
10
S. poligamus
1179
174

 


Obesità infantile e obesità dell'adulto

Attianese P.1, Tudisco M.2, Ciriello G.2, Bochicchio A.2, Savarese G.3, Pepe L.4, Torino M.5 y Torino G.6


1A.S.L. SA1Nocera Inferiore( SA), Facoltà di Farmacia Università degli Studi diSalerno
2A.S.L.1.Venosa Potenza
3Cattedra di Psicologia Università degli Studi di Salerno
4Facoltà di Farmacia Università degli Studi di Salerno
5SUN Napoli
6Cattedra di Fisiologia, Facoltà di Farmacia Università degli Studi di Salerno.

Introduzione:
L'obesità infantile (B.M.I. maggiore o uguale 85°percentile per età e sesso) è un fattore predittivo importante dell'obesità dell'adulto, soprattutto quando uno, o entrambi i genitori sono obesi.Un bambino obeso, di età compreso tra i 3 e 10 anni, con genitori di peso normale, ha una possibilità del 24% di diventare obeso da adulto e questa aumenta al 62% se uno dei due genitori è obeso.All'età di 10-14 anni, le probabilità sono notevolmente più elevate: il 64% dei bambini obesi di età compresa tra 10 e 14 anni, con genitori di peso normale, diventerà obeso da adulto, come lo diventerà il 79% di quelli con un genitore obeso.

Scopo:
Lo scopo del lavoro è quello di correlare lo stato nutrizionale di studenti e lo stato nutrizionale dei propri genitori come fattore predittivo per l'obesità dell'età adulta.

Materiali e Metodi:
Il numero degli studenti che ha partecipato al progetto nell'anno scolastico 2002-2003 è stato: 233, F106 - M127, età 10 +/- 1, tutti appartenenti alla A.S.L. 1 di Venosa (Pz), Italia. Il numero dei genitori è stato di 466, M 233 - F233, età 27-64 anni.La classe di peso per i genitori è stata valutata mediante l'indice di massa corporea: B.M.I.(B.M.I. = Peso in Kg/H in metri al quadrato). Se il risultato è al di sotto dei 18.5 si parla di sottopeso; tra 18.5 - 24.9 di normopeso; tra 25 - 29.9 di sovrappeso; tra 30.0 - 34.9 di obesità di prima classe; tra 35.0 - 39.9 di obesità di seconda classe e oltre i 40 di obesità di terza classe.La classe di peso per gli studenti è stata valutata con il metodo del peso relativo percentuale. Esso si ottiene dal rapporto: Peso reale/peso ideale × 100 in cui. Il peso ideale è dato dal valore del 50° centile del peso corrispondente alla statura. Con tale metodo si possono classificare i soggetti nelle seguenti cinque classi di peso a secondo del valore percentuale della deviazione del peso ideale:sottopeso dev. minore del 90%; normopeso dev. compresa tra 90 e 110%; sovrappeso dev. compresa tra 110 e 120%; obesi dev. maggiore del 120%; superobesi dev. maggiore del 150%.

Risultati:
I risultati dell'indagine sono stati: sottopeso: Padri - 2 (1%), Madri - 8 (3%); normopeso: P - 98 (42%), M - 130 (56%); sovrappeso: P - 105 (45%), M - 76 (33%); obesità I classe: P - 25 (11%), M - 14 (6%); obesità II classe : P - 3 (1%), M - 4 (2%); obesità di III classe: P - 0 (0%), M - 1 (<1%). In percentuale circa il 2% dei genitori è in sottopeso, circa il 49% è in normopeso, circa il 39% è in sovrappeso e circa il 10% è obeso.I risultati degli studenti sono stati: 98 normopeso (42%), 40 sovrappeso (17%), 74 obesi (32%), 21 sottopeso (9%).

Conclusioni:
Il 90% dei bambini obesi di questo studio aveva un genitore obeso e un'alta percentuale li aveva entrambi obesi. Anche i bambini in sovrappeso avevano quasi sempre genitori obesi o in sovrappeso.
Inoltre la frequenza di obesità era più alta nelle famiglie a più basso reddito. Da queste breve considerazioni si evince che un gran numero di questi bambini in eccesso ponderale saranno adulti obesi con gravi ripercussioni sullo stato di salute. Quindi è auspicabile che Enti preposti e le Istituzioni suggeriscano comportamenti alimentari e stili di vita adeguati che prevengano l'obesità e le malattie del benessere.



Squalene: una biomolecola da rivalutare

Grandinetti M.1, Stancato A.1, Passi S1. y Rastrelli L.2

1Centro Invecchiamento Cellulare, IDI-IRCCS, Roma
2Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno

Lo squalene (SQ), noto intermedio nella sintesi degli steroli, è un idrocarburo triterpenoide esainsaturo a 30 atomi di carbonio (C30H50) che, in natura, si rinviene esclusivamente nel fegato degli squali (donde il nome), nel sebo umano e nell'olio extravergine di oliva (OEO). Abbiamo studiato lo SQ nel sebo umano (100 individui sani di età compresa tra 18 e i 35 anni, metà maschi e metà femmine) e in 5 OEO italiani.
Nel sebo, ove è stato trovato ad una concentrazione di circa il 12%, lo SQ è capace di contrastare efficacemente le specie reattive dell'ossigeno ed in particolare l'ossigeno singoletto, indotti dalle radiazioni UV, agendo da filtro biologico indiretto. Il sebo umano contiene anche vitamina E (vit E) ed ubichinone ( CoQ10), che giocano un importante ruolo fisiologico proteggendo lo SQ dall'ossidazione indotta dall' "environment" e tenendo sotto controllo i livelli dei nocivi by-products dello SQ ossidato e la loro penetrazione negli strati sottostanti vitali dell'epidermide e del derma.
Nell'OEO lo SQ è stato trovato alla concentrazione dello 0,5-0,8%. Esso rappresenta la frazione principale dell'insaponificabile, un'aliquota complessa (1,5-2,2% dell'olio) che, non contenendo acidi grassi liberi o esterificati, non diventa sapone se trattato con alcali. E' verosimile che gran parte delle proprietà dietetiche, terapeutiche e cosmetiche dell'OEO sia da attribuirsi proprio all'insaponificabile. L'insaponificabile contiene anche vit E e altri fenoli con proprietà antiossidanti (fenoli semplici, secoiridoidi e lignani), che non solo operano in sinergia con l'acido oleico per conferire stabilità agli attacchi ossidativi esterni, ma contribuiscono anche significativamente al "bouquet" dell'OEO.
Abbiamo osservato che l'ossidazione dell'OEO ha come "target" principale non tanto gli acidi grassi polinsaturi, quanto gli antiossidanti dell'insaponificabile ed in particolare la vit E, gli orto difenoli e lo SQ. La vit E è l'antiossidante più importante e funzionale presente nell'OEO ed il primo ad essere ossidato diventando, in parte, proossidante, in grado pertanto di ossidare gli altri antiossidanti dell'insaponificabile, in particolare orto difenoli e SQ, con formazione di altre specie reattive, di natura radicalica e non. Si innesca pertanto un meccanismo radicalico "a cascata" perverso che, alla fine, con la riduzione massiva degli antiossidanti, riguarderà essenzialmente gli acidi polinsaturi dell'olio, con generazione di innumerevoli molecole, carboniliche e non, dotate di tossicità e mutagenicità, in grado di impartire un odore e un sapore estremamente sgradevoli, anche a piccolissime concentrazioni (irrancidimento).
Oltre allo SQ e vit E, l'OEO ha in comune con il sebo l'alta concentrazione di acidi grassi monoinsaturi e questa somiglianza di composizione rende l'OEO particolarmente idoneo quale ingrediente naturale di prodotti biocosmetici.



Propiedades inmunomoduladoras de Minthostachys verticillata sobre linfocitos y basófilos humanos

González M., Cariddi L., Isola M., Demo M., Sabini L. y Maldonado A.M.

Departamento de Microbiología e Inmunología,Fac. Cs. Ex. Fco-Qcas y Nautrales UNRC Córdoba, Argentina.
E-mail: amaldonado@exa.unrc.edu.ar

M. verticillata (M.v.) es una hierba medicinal utilizada tradicionalmente como agente digestivo, antiespasmódico, anti-inflamatorio y broncodilatador en asma, entre otros. Se ha comprobado su actividad antimicrobiana sobre cepas de estafilococos y sus propiedades antivirales frente al Virus Herpes Simplex tipo 1 (VHS-1) y el Virus de la Pseudorrabia, cepa RC/79 (VPr-RC/79).
El propósito de este trabajo fue determinar la capacidad inmunomoduladora de decocción (D) y aceite esencial (AE) de M. verticillata. A tal fin se evaluó la capacidad linfoproliferativa de cada fracción vegetal que fue comparada con la expansión celular inducida por los mitógenos PHA, Pokeweed y BCG vs proliferación espontánea. Se realizó el recuento de clusters y colonias de linfocitos según el método de Lange modificado comparando el valor promedio de las áreas para las fracciones vegetales y los mitógenos convencionales. Entre las células proliferadas, se caracterizó la subpoblación de LT CD8+ por IF utilizando anticuerpos monoclonales anti-CD8 humano. Para estos ensayos la población estudiada fue de 20 individuos sanos. Como objetivo complementario se evaluó la capacidad desgranulante "in vitro" de diferentes concentraciones de las fracciones vegetales, sobre basófilos de 10 individuos no alérgicos (controles) y de 20 individuos alérgicos a ácaros (A) y hongos ambientales (HA). Los derivados de M.v., D y AE, alcanzaron índices de proliferación superiores a los cultivos sin estímulo (p<0.02). Dichos derivados tuvieron propiedades mitogénicas similares a PHA, Pokeweed y BCG y estimularon la formación de clusters y colonias en número similar a esos mitógenos. Los clusters formados por la estimulación con D y AE fueron de mayor tamaño que los encontrados en los cultivos sin estímulo (p<0,05). En éstos no se observó formación de colonias. Las células proliferadas luego de la estimulación con D y AE mostraron un 40% de LT CD8 (+).
Concentraciones de 104 g/ml de D y 0,48 mg/ml de AE, similares a las de los alergenos específicos (A y HA), no alcanzaron el índice mínimo de desgranulación, con igual comportamiento cuando fueron enfrentados a basófilos de individuos no alérgicos.
Los derivados D y AE de M.v. resultaron ser mitogénicos sobre LT, induciendo la formación de clusters y colonias de forma significativa, con comportamiento similar a los mitógenos convencionales. Sobre basófilos de pacientes no alérgicos y alérgicos a ácaros y hongos ambientales no evidenciaron capacidad desgranulante a las concentraciones evaluadas. Se asume que D y AE de M.v. facilitarían la desviación Th1 en cultivos celulares de pacientes alérgicos lo que atenuaría las reacciones de hipersensibilidad, por inhibición de la síntesis de IgE.

Attività anti-proliferativa di costituenti fenolici della corteccia di Yucca schidigera

Balestrieri M.L1, Balestrieri C.1, Felice F.1, Montoro P.2, Oleszek W.2, Piacente S.2 y Pizza C.2

1Dipartimento di Biochimica e Biofisica, Seconda Università di Napoli, Italia
2Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università di Salerno, Fisciano (Sa), Italia

Il resveratrolo (3, 4, 5-triidrossistilbene), una fitoalessina naturale presente nell'uva ed in alcune piante medicinali, è un composto noto non solo per le sue proprietà antiossidanti ma anche per le sue proprietà anti-proliferative ed anti-angiogenetiche. Esso, infatti, inibisce la neovascolarizzazione in vivo indotta dal vascular endothelial growth factor (VEGF), un fattore di crescita critico nei processi di angiogenesi, proliferazione cellulare, permeabilità vascolare e nella patogenesi del sarcoma di kaposi (KS) associato con la sindrome HIV. Alcuni composti stilbenici correlati al resveratrolo isolati dalla corteccia di Yucca schidigera, e gli yuccaoli A, B e C, tre nuovi composti naturali caratterizzati da un' insolita spirostruttura, hanno mostrato un'elevata attività antiossidante. Nostri studi preliminari hanno messo in luce che tali composti, così come altri antiossidanti naturali quali flavonoidi e carotenoidi, inibiscono la sintesi del fattore di attivazione piastrinico (PAF) in cellule endoteliali durante stress ossidativo e favoriscono la produzione di mediatori lipidici analoghi.
Il PAF oltre ad essere un potente mediatore di processi infiammatori, allergici e di patologie cardiovascolari, è anche un induttore dell' angiogenesi e della motilità cellulare. Nel presente lavoro abbiamo studiato le proprietà anti-proliferative ed anti-infiammatorie dei composti polifenolici isolati da Y. schidigera, yuccaolo A-B-C, resveratrolo in cellule KS in coltura. In particolare, abbiamo studiato l'effetto di tali composti sulla biosintesi di PAF e sulla proliferazione cellulare indotta da stimolazione con VEGF. I risultati hanno indicato che tutti i composti isolati da Y. schidigera bloccano la sintesi di PAF inibendo l'enzima principale della sua via biosintetica, l'acetil-CoA: acetiltrasferasi (AT). In particolare, tra i vari composti saggiati, yuccaolo A, B, C sembrano avere le più spiccate proprietà anti-infiammatorie ed anti-proliferative in quanto sono i più attivi sia nel favorire la produzione di analoghi del PAF mediante l'enzima PAF-dipendente transacetilasi (TA), sia nell'inibire la proliferazione cellulare indotta dal trattamento con VEGF.


Studio quali-quantitativo dell'estratto metanolico della corteccia di Tynantus panurensis

Plaza A., Montoro P., Benavides A., Pizza C. e Piacente S.

Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno, Italy.

Tynanthus panurensis è una vite selvatica che cresce nella foresta tropicale peruviana, ad un'altitudine compresa tra 0 e 500 metri sopra il livello del mare. Il macerato alcolico ottenuto dalla corteccia di questa pianta è usato da secoli come stimolante e afrodisiaco dagli indigeni dell' Amazzonia peruviana. Di T. panurensis è stato inoltre descritto l'uso come analgesico, antitumorale e antireumatico. Studi antecedenti hanno riportato che l'olio della corteccia è principalmente composto da eugenolo. I nostri studi sono stati orientati alla caratterizzazione della frazione fenolica della corteccia di T. panurensis allo scopo di giustificarne l'impiego in medicina tradizionale. Il risultato è stato l'isolamento di diversi fenilpropanoidi, in particolare un nuovo derivato dell'eugenolo, il verbascoside, l' isoverbascoside ed il leucosceptoside. La caratterizzazione strutturale è stata realizzata attraverso esperimenti 1D- (1H, TOCSY e 13C ) e 2D NMR (DQF-COSY, HSQC, HMBC) NMR insieme con ESIMS. E' stato inoltre effettuato uno studio analitico per la caratterizzazione quali-quantitativa dei composti di natura fenilpropanoidica. Attualmente non esistono metodi che riguardano il controllo di qualità della pianta e dei suoi prodotti.L'accoppiamento della capacità risolutiva della cromatografia liquida all'elevata sensibilità della spettrometria di massa, sta rendendo negli ultimi anni la LC-MS una tecnica analitica di elezione per diverse applicazioni, tra cui la caratterizzazione quali-quantitativa di piante medicinali.Lo sviluppo di un metodo LC-ESI-MS ha permesso di ottenere una metodica sensibile e selettiva per l'analisi di quasti composti, portando in aggiunta all'identificazione di un ulteriore composto di natura flavonoidica.Attraverso la costruzione di curve di calibrazione con standard interno e standard esterno, il metodo è stato utilizzato per valutare i contenuti quantitativi di ciascun componente nella droga e negli estratti. Differenti parametri di validazione sono stati infine valutati per studiare la riproducibilità e la sensibilità del metodo.



Antioxidant activity of ethanolic extracts from Calceolaria chelidonioides Humb. Bonpl. e Kunth

Quintanilha D.1, Rijo E.2, de Sousa F.2 and Machado R.1

1Núcleo de Pesquisas de Produtos Naturais - CCS - UFRJ
2Departamento de Produtos Naturais e Alimentos, Faculdade de Farmácia - CCS - UFRJ

E-mail: dqfalcao@nppn.ufrj.br

Calceolaria chelidonioides is a species that belongs to the Scrophulariaceae family. It is found only in high altitudes and it is popularly known in Brazil as "botão-de-ouro" and "saquinho" and it is used in folk medicine to treat some kinds of cancer. It was colected in Macabú, a small town in the Rio de Janeiro's mountain area, in September 2003. Free radicals are one of the most important agents for health damages known nowadays, so, the radical scavenging ability of plant extracts is a desired activity to be investigated. The ethanolic extracts from different parts of C. chelidonioides were evalueted about its antioxidant properties using the free and stable radical 2,2-diphenyl-1-picrilidrazyl (DPPH) assay. The different parts of this plant were dried, powdered and extracted with ethanol by statical maceration. Five different extracts were obtained: those from flowers, leaves and flowers, roots, stems and one encompassing a mixture of flowers, leaves and roots. Ginkgo biloba standard extract (Egb761 ) was used as a positive control. Table 1 shows the antiradical effect demonstrated by all five extracts related to their antioxidant capacity comparing with the control. All, except roots extract, has showed some antioxidant activity mainly in the higher tested concentration (250 g/mL). These results showed that aerial part extracts from this species could have interesting pharmacological properties, highlighting its pharmacological capacity, indicating the need for further different assays, including other antioxidant activity methodologies.

Table 1. Calceolaria chelidonioides ethanolic extracts as radical scavenger using Ginkgo biloba as control.

µmg/mL
Ginkgo biloba
Stems
Flowers
Roots
Flowers+leaves
Flowers+leaves+roots
5
4,57 ± 1,51
5,75 ± 2,58
1,14 ± 0,47
3,79 ± 0,23
11,25 ± 0,18
5,43 ± 2,26
10
10,03 ± 3,25
7,23 ± 1,88
3,52 ± 1,62
5,30 ± 0,88
14,64 ± 0,51
7,37 ± 3,75
25
28,14 ± 1,37
13,35 ± 2,46
8,91 ± 1,21
12,16 ± 0,14
24,09 ± 1,19
15,73 ± 2,56
50
57,02 ± 0,55
26,75 ± 4,43
18,7 ± 0,86
23,65 ± 0,57
36,25 ± 1,48
32,42 ± 4,22
125
90,07 ± 0,82
65,14 ± 2,78
46,26 ± 0,97
51,17 ± 0,83
76,25 ± 0,39
62,46 ± 1,47
250
95,23 ± 0,43
89,2 ± 0,26
82,92 ± 1,18
56,75 ± 1,24
90,72 ± 1,13
89,27 ± 0,60


Aspectos bioquímicos y metabólicos de la perla de tierra

Quiñones W., Echeverri F., Vicente B., Torres F. y Archbold R.

Grupo de Química Orgánica de Productos Naturales Universidad de Antioquia, Instituto de Química

La perla de tierra es un insecto que afecta varios cultivos importantes, entre los cuales se encuentran frutales y pastos. El insecto se caracteriza por que en gran parte de su desarrollo se recubre de una fuerte capa lipídica que le aísla y protege del medio; con este mecanismo de defensa es prácticamente inmune a las condiciones ambientales así como a la aplicación de insecticidas externos.Nosotros hemos emprendido un estudio acerca de la bioquímica de este insecto con el fin de diseñar inhibidotes de su ciclo metabólico. Los resultados indican que la capa lipidica esta compuesta principalmente por una serie de triglicéridos poliinsaturados. Esta capa a su vez parece estar recubierta por otros derivados de esos ácidos grasos. Finalmente, la composición de ácidos grasos varía según el estado de desarrollo del insecto, apreciándose la producción de aldehídos, mono y diglicéridos.



Yerba mate, bonpland y farmacognosia en la facultad de farmacia y bioquímica

Coussio J.D.1, Rondina R.V.1,2, Ferraro G.1,2, Filip R.2 y Giberti G.C.1

1 IQUIMEFA-CONICET, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Buenos Aires, Argentina.
2 Cátedra de Farmacognósia, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Buenos Aires, Argentina.

Se llama mate a la infusión estimulante preparada con hojas y ramitas (desecadas y desmenuzadas industrialmente) del acebo sudamericano Ilex paraguariensis St. Hil. (Aquifoliaceae).La distribución geográfica de esta especie sudamericana . Su uso está muy difundido en Argentina, Paraguay, Uruguay, sur del Brasil y Chile. Aún cuando su empleo precolombino por etnias guaranítica y kaingang no está documentado por evidencia arqueológica, su cultivo e industrialización elemental comenzó en Sudamérica a fines del siglo 17 gracias a los esfuerzos de los religiosos de la Compañía de Jesús, quienes llegaron a manejar el comercio de esta bebida a partir de sus plantaciones en una treintena de reducciones de indígenas guaraníes establecidas en territorios actuales de Argentina, Brasil y Paraguay hasta la época de la expulsión de esta orden religiosa de los dominios españoles (1767). A pesar de conocer bien la principal especie de cultivo y distinguirla de sus sustitutos y adulterantes co-genéricos, la mayoría de los cronistas jesuíticos no pudo aproximar la identidad botánica de esta especie al género Ilex, salvo el Padre manchego José Sánchez Labrador (Furlong, 1960), quien en sus manuscritos reconoce un dato que ya abundaba en la literatura europea desde principios del siglo 18: la similitud existente entre la yerba mate y el "té de los Apalaches" o "casina" -Ilex vomitoria Solander in Aiton- (Miller, 1733: CA; Valmont de Bomare, 1791: 150; Lavedan, 1796: 196; Hudson, 1979: 155). Esta falta de datos precisos sobre la yerba mate es bien notable en el que quizás fue el botánico más importante del siglo 18, Karl von Linné, quien abocó a varios de sus tesistas a preparar monografías sobre otras bebidas estimulantes ahora reconocidas como metil-xantínicos (por ej. el té "Potus Theae", Linné, 1789) pero de la yerba mate no escribió nada (Parodi & Grondona, 1949), salvo que quizás se hizo eco de la confusión prevaleciente mencionada entre Ilex vomitoria e I. paraguariensis. Recién en 1823 el botánico francés proto-evolucionista Auguste C. P. de Saint Hilaire publicó válida y efectivamente la diagnosis original de la principal especie que produce la materia prima para elaborar yerba mate en los Anal. del Muséum National d'Histoire Naturelle, basándose en material de sus herborizaciones de esta especie obtenidas en las cercanías de Curitiba, Brasil, en marzo de 1820. Sin embargo, aunque ignorándose mutuamente, su célebre compatriota Amado Bonpland se le anticipó: ya había coleccionado y descripto esta especie como un Ilex (fue el primer botánico en asignar la planta a este género) en la isla Martín García del estuario del Río de la Plata, Argentina, en 1817. Bonpland bautizó la yerba mate como Ilex theaezans, haciendo la salvedad que el material de esta especie no era nativo de Martín García sino de la antigua reducción jesuítica de San Javier -hoy en la provincia argentina de Misiones- (Castellanos, 1963). Con posterioridad a esta descripción inédita de Bonpland, cuyos materiales de referencia se han perdido (Giberti, 1990), la azarosa vida rioplatense del compañero del barón de Humboldt se cruzó múltiples veces con la yerba mate, cultivo que intentó infructuosamente rehabilitar en la región, entonces muy convulsionada por las guerras de la Independencia, conflictos civiles, etc.
Hacia 1900, el farmacéutico Profesor Dr. Juan A Domínguez enseñaba Química en la entonces Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires. Domínguez fue un fervoroso defensor del estudio científico de la Flora Argentina y entusiasta protector de las minorías indígenas de esta región de América, cuya Materia Médica comenzó a relevar. En 1905, se enteró que un nieto de Amado Bonpland estudiaba Medicina en esta Facultad. No solamente se puso en contacto con ese estudiante, sino que a través del mismo consiguió que el hijo del naturalista, don Amado Bonpland hijo, donara a la Facultad correspondencia y valiosos archivos del célebre botánico . Domínguez, Eugenio Autran y otros comenzaron a ordenar esta documentación que contiene reliquias como cartas manuscritas de Alexander von Humboldt, etc. Domínguez, ya como catedrático sustituto de Farmacognosia y pozología razonada, dirigió posteriormente la tesis doctoral en Medicina del nieto de Bonpland (Bonpland, 1909). Se publicaron en las primeras décadas del siglo XX varios trabajos relacionados con estos documentos, entre ellas reproducciones facsimilares de esos escritos (Domínguez, 1914, 1924, 1928, etc.). El grueso de estos trabajos del Dr. Domínguez y sus colaboradores apareció en una serie de publicaciones no periódicas denominada "Trabajos del Museo de Botánica y Farmacología de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad de Buenos Aires". La publicación de estos Trabajos se inició en 1900 y culminó en 1939. Desde 1957 y hasta la actualidad, la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad de Buenos Aires es custodio de esta documentación única de Amado Bonpland, incorporada a las colecciones del Museo de Farmacobotánica "Juan A. Domínguez". Dichos documentos, sumamente valiosos, son consultados por investigadores de diversas disciplinas (Ottone, 2002).
La Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UBA y la yerba mate.
Ya en la serie denominada "Trabajos del Museo de Botánica y Farmacología", la hoy Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UBA comenzó a ocuparse de la yerba mate y de sus parientes, motivada por la problemática entonces muy acentuada, de la adulteración de la especie de cultivo -Figura 5-(Corrado, 1908; Lendner, 1917). En nuestros días, varios investigadores de la Universidad y del CONICET le han venido dedicando múltiples estudios a la principal bebida estimulante autóctona del Cono Sur, lo mismo que a especies relacionadas (Acevedo et al., 2000; Filip & Ferraro, 2003; Filip et al., 1983, 1989; Filip et al.,1998, 2000, 2001; Giberti, 1989; Ricco et al., 1995a, 1995b; Wilson et al., 1981). El tema de la yerba e Ilex ha sido motivo de la defensa de varias tesis doctorales contemporáneas dirigidas por profesores de esta casa de estudios (Ricco, 1997; Filip, 2001; Giberti, 2001) y de algunos proyectos de investigación financiados por la Universidad de Buenos Aires (Acevedo, 1998) y el Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (Giberti, 1999). Trabajan actualmente en el IQUIMEFA, dentro de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, investigadores del CONICET que desarrollan proyectos vinculados a este importante cultivo regional.
Fitoquímica y farmacología de la yerba mate y sus parientes
El estudio de la composición química de Ilex paraguariensis y de las especies co-genéricas con metodologías modernas se reinició en la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UBA en la década de 1980. Wilson et al. (1981) estudiaron con HPLC el contenido de xantinas (cafeína y teobromina) que pueden ser extraídas a través de cebaduras sucesivas de un recipiente conteniendo yerba mate preparada a la usanza rioplatense. Los resultados fueron comparados con los aportes en cafeína suscitados por la posible ingestión de té y café. En 1983, Filip y otros comenzaron el estudio químico de varias especies de Ilex, iniciando su relevamiento con una entidad silvestre de las pluvisilvas subandinas del Noroeste argentino y Bolivia, Ilex argentina Lillo. Para esta especie pudieron detectar con HPLC, y con un límite de detección de 0,2 µg de xantina por gramo de materia seca la presencia de teobromina (6 µg/g de materia seca). No fue posible hallar cafeína, a pesar de conocerse el uso regional de esta especie como sustituto de la yerba mate genuina desde el siglo 18 y 19 (Filip et al., 1983). Posteriormente (Filip et al., 1989), se prosiguió con el estudio de esta especie, tratando el contenido en ácidos cafeoilquínicos, triterpénicos y flavonoides, lo que ha sugerido su empleo como una especie libre de cafeína con propiedades colagogas y hepatoprotectoras.
Ricco et al. (1995a, 1995b) se abocaron al estudio de los flavonoides de Ilex paraguariensis y especies relacionadas, considerando asimismo sus posibles implicancias quimiosistemáticas.
Más adelante, Filip y otros expandieron sus investigaciones con cromatografía gaseosa de alta performance a 5 especies adicionales austrosudamericanas del género Ilex: I. brevicuspis, I. dumosa, I. microdonta, I. pseudobuxus e I. theezans, focalizando su interés en las xantinas. Separando la mejor conocida Ilex paraguariensis, la cafeína fue encontrada solamente en trazas en I. dumosa, I. microdonta, I. pseudobuxus e I. theezans ; mientras que no pudo hallarse ni en Ilex brevicuspis ni en I. argentina. La teobromina pudo detectarse solo en yerba mate, y solamente como trazas en Ilex argentina e I. microdonta; en tanto que teofilina solamente se encontró teofilina en Ilex pseudobuxus y (solamente como trazas) en I. dumosa e I. microdonta (Filip et al., 1998). Separadamente, se encaró el estudio de las otras especies an algunas publicaciones, como la dedicada a Ilex dumosa (Filip et al., 1999). Con referencia a Ilex theezans (Filip et al., 2000), se estudiaron con técnicas de HPLC varios compuestos fenólicos (ácidos clorogénico, cafeico, 3, 4 - DCQ, flavonoides, etc.) y se ensayó con extractos de esta planta en animales de laboratorio la actividad colerética, sin llegar a detectar acciones significativas. Con posterioridad, el análisis mediante HPLC de extractos de Ilex brevicuspis permitió identificar, entre sus componentes, cafeoil derivados y flavonoides en altos porcentajes; a la par que se ensayaron sus acciones antioxidantes y actividad colerética, lo que ha permitido sugerir su uso como una nueva "yerba mate" sin acciones estimulantes sobre el SNC (Filip & Ferraro, 2003). La comparación del análisis exhaustivo de los compuestos fenólicos en estas 7 especies sudamericanas de Ilex se publicó asimismo (Filip et al., 2001), donde se señaló la posición prominente de la yerba mate genuina en relación a las cualidades coleréticas, antioxidantes e hipocolesterémicas de estas infusiones, En suma, aspectos químicos y farmacológicos de algunos de los adulterantes o sustitutos co-genéricos de la yerba mate genuina -Ilex paraguariensis- (Giberti, 1989) han sido o se hallan en estudio en la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad de Buenos Aires.


In vitro basal and metabolism-mediated cytotoxicity of flavonoids

Soares V.C.G. 1, Varanda E.A.2 and Raddi M.S.G.2

1 Instituto de Química de Araraquara, Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Araraquara, SP, Brazil.
2Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara, Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Rua Expedicionários do Brasil, Araraquara, SP, Brazil.
E-mail: raddims@fcfar.unesp.br

Much data has been published addressing flavonoids effects in several cellular targets, in different conditions that can modulate their activity. Even tough there are still many open questions on the mechanisms of absorption, distribution and biotransformation which makes it difficult to predict if an increased of exposure to some these compounds, e.g. through drug administration, wouldn't be more deleterious than advantageous. Marketing strategies by manufacturers of flavonoids concentrates recommended doses of these products might far exceed the flavonoid dose one could attain from a typical vegetarian diet. The purpose of this study was to compare the basal cytotoxicity and metabolism-mediated cytotoxicity of kaempferol (K0133), quercetin (Q0125), rutin (R5143) was purchased from SIGMA (St. Louis, MO USA). McCoy (CRL 1696b) cells were exposed to concentrations of flavonols with and without the S9 system. The viability was assayed with the neutral red uptake assay after 24 h at 35-37ºC. Dose response curves were established for each flavonol in the presence and absence of external metabolizing systems. Kaempferol and quercetin were cytotoxic and dose-dependently decreased cell viability without the S9 system. The liver plays a key role in the detoxification of foreign substances. The hepatic S9 microssomal fraction may metabolize these compounds to less cytotoxic metabolites. In contrast, rutin at 500 µg/ml failed to produce any avert signs of toxicity in both assays. Live organisms tend to reduce the lipoplilicity of flavonols by conjugation to decrease it is toxicity. It has been previously shown that for rutin to be absorbed it needs to be hydrolyzed to its aglycone quercetin by bacterial enzymes in the lower part of the intestine.



A new cytotoxic naphtoquinone from Paepalanthus latipes

Rezende R., Gonçalves M.S. and Vilegas W.

Instituto de Química de Araraquara, Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Rua Prof. Francisco Degni, s/n, CP 355, 14801-970, Araraquara, SP, Brazil.

Plants of the Eriocaulaceae family are widespread in the region of the Serra do Cipó, State Minas Gerais, Brazil. Several plants from this family are known as 'everlasting plants' because they appear to be alive even for years after being haversted. Paepalanthus is the largest genus of this family with approximately 500 species, more than 400 occurring only in Brazil. The occurrence of the naphthopyranone derivatives is common to all the Paepalanthus species belonging to the subgenus Platycaulons. A new naphtoquinone was isolated from a methylene chloride extract of the capitula of Paepalanthus latipes. The structure was determined by chemical and spectroscopic means. It was possible to suggest that the new structure is 5-methoxy-3, 4-dehydroxanthomegnin. A significant in vitro cytotoxic effect (CI50 of 35,8 µg/ml) was demonstrated in a transformed cell line (ATCC CRL-1696b). The biochemistry and cytotoxicity of naphthoquinones have been studied in vitro. Carbon atoms adjacent to the carbonyl groups are electrophilic, and naphthoquinones that are not fully substituted in the quinone ring are alkylating agents. Most chemotherapeutic agents, including alkylating agents, induces cells to over generate reactive oxygen species and, thus, are capable of inducing oxidative damage to DNA. In summary, 5-methoxy-3, 4-dehydroxanthomegnin shows good potential as anticancer drug.

 

Aislamiento e identificación de xantonas de las hojas del Hypericum laricifolium Juss. (Gutiferae)

Ramírez I., Amaro J.M. y Bahsas A.

Laboratorios de Productos Naturales y de RMN. Facultad de Ciencias. Universidad de Los Andes. Mérida. Venezuela. E-mail: irama@ula.ve

En la actualidad, el género Hypericum (familia Guttiferae) ha adquirido un renovado interés farmacológico, ya que algunas de sus especies se utilizan como antidepresivos y antiretrovirales (Schmitt et al., 2001). El extracto del H. perforatum ha sido patentado en Alemania para el tratamiento de depresiones y el mismo no produce efectos colaterales significativos (Gupta et al., 2003). En el presente trabajo se exponen los resultados del estudio fitoquímico preliminar de las hojas del H. laricifolium, una especie endémica de los páramos andinos de Venezuela. El material vegetal fue extraído exhaustivamente con diclorometano a temperatura ambiente. El extracto llevado sequedad, fue readsorbido en gel de sílice y cromatografiado en columna con el mismo adsorbente. De una fracción de baja polaridad se lograron purificar 15 mg de un sólido amarillo de P. F: 240-246 C. Su espectro de RMN-1H muestra en la zona aromática seis señales definidas, cada una de las cuales corresponde a un protón [ :7,71 (t, J 8Hz, H-3); :7,61 (d, J 3Hz, H-8); :7,53 (d, J 9Hz, H-5); :7,44 (dd, J 9 y 3Hz, H-6); :7,00 (dd, J 9 y 1Hz, H-4); :6,78 (dd, J 8 y 1Hz, H-2)]. A campos más bajos se distinguen dos singuletes característicos de hidroxilos fenólicos ( :12,79 y 9,06). A partir del espectro DEPT y del espectro de masas, m/z: 228 [M+] se dedujo la fórmula molecular (C13H8O4). Las correlaciones observadas en los espectros COSY y HMBC permitieron deducir que el compuesto en estudio es la 1,7-Dihidroxi-Xantona (1). De la misma fracción se aislaron 56 mg de unas agujas amarillas de P. F: 256-258 C. En el RMN-1H se observan señales de protones aromáticos [ :7,69 (d,d, J 8 y 2Hz, H-8); :7,39 (dd, J 8 y 2Hz, H-6); :7,31 (t, J 8Hz, H-7)] que sugieren la presencia de tres hidrógenos contiguos en un anillo bencénico trisustituido. También en la región aromática se distinguen dos señales pertenecientes a un sistema AB [ :7,09 dd, J 10 y 1Hz, H-4´); :5,77 (d, J 10Hz, H-5´)], además de un singlete a :6,20 de un protón aromático aislado. A :9,06 y :12,79 aparecen singuletes típicos de hidroxilos fenólicos y a :1,49 se encuentra otro singulete que integra para seis protones. El análisis del espectro DEPT y la presencia en su EM de un ion a m/z: 310 [M+] indica que se trata de un compuesto de fórmula molecular C18H14O5. El análisis de los espectros HMBC y COSY permitió concluir que el compuesto en estudio es la 1,5-Dihidroxi-4,3(O)-[3´,3´-dimetil- 1´,2´-pirano]-Xantona .

 

Ricerca di fonti vegetali autoctone di potenziali farmaci: Helleborus bocconei ten. subsp. siculus (Schiffner) Merxm. et Podl

Dedomenico C.1, Caccamo F.2, Costazo R.3, Iauk L.1, Rapisarda A.3

1Dipartimento Farmaco-Biologico dell'Università di Messina
2Dipartimento di Scienze Microbiologiche e Scienze Ginecologiche dell'Università di Catania
3Dipartimento di Scienze Farmaceutiche dell'Università di Catania

Il genere Helleborus (Ranunculaceae) comprende diverse specie, alcune delle quali di interesse farmaceutico; il rizoma di H. niger L. contiene glicosidi cardioattivi che in passato hanno giustificato la presenza di questa droga nelle Farmacopee Ufficiali di molti paesi. Il pattern fitochimico del genere Helleborus è stato intensamente studiato consentendo l'isolamento e la caratterizzazione di un numero considerevole di metaboliti secondari, quali: bufadienolidi, glicosidi saponinici spirostanolici e furostanolici, ecdisteroidi ed elletionine. Mentre prima l'attenzione era essenzialmente rivolta allo studio dell'attività cardiovascolare di preparazione estrattive di alcune specie del genere Helleborus recentemente l'attenzione si è spostata allo studio degli effetti sul sistema immunitario; in particolare, estratti standardizzati di H. purpurascens rivelano in vitro su cellule T umane un marcato effetto immunosoppressivo di intensità maggiore rispetto alla ciclosporina A, e, se testati in associazione con questo farmaco, risultano attivi a basse dosi, con l'evidente vantaggio di minimizzare gli effetti collaterali che comportano i dosaggi convenzionali di ciclosporina A (Terness P. et al., 1999). Helleborus bocconei Ten., conosciuta come erba di Boccone, è una pianta spontanea con rizoma sotterraneo, fusto erbaceo, foglie palmatosette, infiorescenze costituite da 2-3 fiori con tepali di colore verde-giallastro e frutto costituito da un follicolo; in particolare, si distinguono la subsp. bocconei presente dei boschi sub-mediterranei dell'Italia centro-meridionale e la subsp. siculus (Schiffner) Merxm. et Podl. spontanea della Sicilia nord-orientale, la quale in medicina popolare viene utilizzata in ambito veterinario per curare le polmoniti, mediante impianto transcutaneo nell'animale di frammenti di rizomi essiccati. Poiché non esistono in letteratura dati riguardanti indagini farmaco-botaniche su H. bocconei subsp. siculus (Schiffner) Merxm. et Podl. si è ritenuto opportuno procedere ad uno screening farmacognostico di questa specie autoctona.
Al tal fine sono stati individuati markers fitognostici indispensabili per la corretta identificazione degli organi ipogei di H. bocconei subsp. siculus mediante l'esecuzione di indagini micromorfologiche che hanno fornito dati utili per consentire un accurato e riproducibile controllo di qualità della matrice vegetale da sottoporre a successivi studi. Poiché l'analisi istochimica del rizoma ha consentito principalmente di evidenziare la presenza di molecole a nucleo steroidico, si è ritenuto opportuno effettuare uno screening fitochimico preliminare, mediante l'impiego di procedure cromatografiche riportate in letteratura per i fitosteroidi (Dinan L. et al., 2001; Wagner H. et al, 1984). I risultati ottenuti hanno permesso di acclarare la presenza di: glicosidi steroidici, anche di natura saponinica, e di ecdisteroidi, 7-ene-6-chetosteroidi poliidrossilati analoghi agli ormoni steroidei degli invertebrati.
Per la valutazione in vitro di potenziali attività biologiche delle frazioni estrattive ottenute nello screening fitochimico è stato effettuato il biosaggio su nauplii di Artemia salina Leach (Meyer B.N. et al., 1982), metodo che consente anche di valutare l'effetto di principi attivi, quali i bufadienolidi, in grado di interferire con l'attività della Na+/K+ ATPasi, ed è stata testata l'attività antimicrobica su alcuni ceppi provenienti da isolamento clinico mediante determinazione della concentrazione minima inibente, ottenendo risultati significativi per intraprendere approfondite ricerche fitochimiche e farmacologiche mirate al fine di validare H. bocconei subsp. siculus quale fonte di potenziali nuovi farmaci.



Studio fitochimico ed attivita' antibatterica dell'estratto metanolico dei rizomi di Iris pseudopumila tineo (Iridaceae)

Rigano D.1, Formisano C.1, Grassia A.1, Perrone A.2, Piacente S.2, Basile A.3 e Senatore F.1

1Dipartimento di Chimica delle Sostanze Naturali, Università di Napoli "Federico II", Via D. Montesano, 49 -80131 Napoli.
2Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università di Salerno, Via Ponte Don Melillo - 84084 Fisciano (Salerno)
3Dipartimento di Biologia Vegetale, Facoltà di Scienze MM FF NN, Università "Federico II" di Napoli, via Foria - 80100 Napoli

Iris è il genere più vasto della famiglia delle Iridaceae, comprende infatti più di 300 specie ed ibridi. L'utilizzo delle parti sotterranee di diverse specie di Iris è da tempo noto nella medicina tradizionale europea; i rizomi di I. germanica L., I. florentina L. o I. pallida Lam., infatti, complessivamente noti come Rhizoma iridis, hanno goduto di una grossa popolarità grazie alle loro riconosciute proprietà catartiche, diuretiche, stimolanti ed espettoranti.
I. pseudopumila Tineo è una specie endemica dell'Italia meridionale, dove cresce spontaneamente come pianta ornamentale. Può essere gialla o violetta e si trova soprattutto nei terreni sassosi e poco profondi. Sebbene vi siano molte pubblicazioni riguardanti la chimica del genere Iris3-5, non sono stati finora effettuati studi fitochimici sulla pianta di cui sopra.
Questa comunicazione descrive l'attività antibatterica dell'estratto metanolico dei rizomi di I. pseudopumila; quest'ultimo è stato saggiato in vitro su diversi ceppi batterici Gram+ e Gram- (Proteus vulgaris, Enterobacter cloacae ed aerogenes, Klebsiella pneumoniae e Staphylococcus epidermidis). Esso e' risultato particolarmente attivo soprattutto nei confronti di E. cloacae, E. aereogenes e S. epidermidis.
Da tale estratto, frazionato mediante gel cromatografia su Sephadex LH-20 e HPLC, sono stati isolati due nuovi glicosidi isoflavonoidici e un nuovo glicoside flavonoidico, accanto a composti noti. La struttura di questi metaboliti è stata stabilita mediante ES-MS ed esperimenti NMR mono e bidimensionali.



Efecto de la aplicación intradérmica del extracto de Cynara scolimus en la obesidad localizada

Bedolla-P.C.J.1, Rojas-A.M.1, Martínez-O.H.1 y Rivas-V.J.F.2

1Posgrado en Acupuntura y Fitoterapia, Universidad Autónoma Metropolitana - Iztapalapa.
2Universidad Autónoma Metropolitana - Iztapalapa, Departamento de Ciencias de la Salud.

Objetivo:
La obesidad es un factor de riesgo en diversas enfermedades y se estima que un 21% de la población mexicana la padece. Diversos tratamientos de la obesidad no ofrecen resultados apropiados, tanto en la disminución de la grasa corporal como en la reducción del panículo adiposo en sitios específicos. La mesoterapia es un tratamiento empleado en diversas enfermedades el cual consiste en la aplicación intradérmica o subcutánea de diversos medicamentos. Se ha empleado el extracto de Cynara scolimus en mesoterapia dado su efecto lipolítico, además de un efecto hipocolesterolemiante; sin embargo, no existen estudios controlados a este respecto.

Método:
Se realizó un estudio experimental, longitudinal y prospectivo con 28 personas que asistían a un servicio médico universitario y solicitaron su participación en el estudio. Se asignaron en forma aleatoria 14 pacientes al grupo de tratamiento y 14 al grupo control. Se evaluaron el índice de masa corporal (IMC), índice cintura/cadera (ICC), y circunferencias abdominales alta (CAA), media (CAM) y baja (CAB) a las 3 y 6 semanas de tratamiento. Los resultados se analizaron por el método de la varianza 1.

Resultados:
Se encontraron diferencias significativas entre el grupo tratado y el grupo control en el IMC, ICC, CAA, CAM desde la tercera semana de aplicación del tratamiento.

Conclusión:
La aplicación del extracto de Cynara scolimus en mesoterapia permite la reducción localizada del panículo adiposo. Se sugiere la aplicación del extracto de Cynara scolimus combinado con otros fármacos, o la aplicación del extracto en puntos de acupuntura para tener en forma probable mayor reducción del panículo adiposo.



Estudio farmacognóstico preliminar de Boerhaavia erecta L

Rivero R., Sánchez E., Fuentes L., Acosta M., Torres L. y González M.L.

Suchel Fragancia: Calzada Varona No. 16856, Capdevila, Boyeros, Ciudad de la Habana, Cuba.
E-mail: prod.ind@fragancia.tdc.cu

Se presentan los estudios farmacognósticos preliminares de la especie Boerhaavia erecta L que crece en Cuba, con el objetivo fundamental de lograr la estandarización de los parámetros que permitan el control de la calidad de la droga vegetal y fundamentalmente de su extracto acuoso. Para lo cual se realizaron descripciones macromorfólogicas y micromorfológicas de la especie seguidas de un estudio de secado y la determinación de los índices numéricos de la droga, determinándose el secado en la estufa como el más eficaz, permitiendo obtener porcentajes de humedad inferiores a 13% en 2 días.
El tamizaje fitoquímico de la droga evidenció la presencia de aminas, fenoles y taninos, triterpenos y esteroides, saponinas, azúcares reductores, compuestos lactónicos, flavonoides y alcaloides. Reafirmándose en los demás extractos obtenidos (fracciones, liofilizados, extractos acuosos, extracto fluido al 30% y extracto seco) que los más abundantes coincidían con los tres últimos metabolitos secundarios ya mencionados. Los cuales se caracterizaron parcialmente, teniendo en algunos de los casos la identificación del componente mayoritario.Se realizó el estudio de envase y conservación tanto de la droga seca, como del extracto acuoso preservado en condiciones ambientales durante un año, resultando los frascos de vidrio y los sobres de polietileno los mejores envases para la droga, mientras el extracto acuoso mantuvo estable los parámetros de calidad durante el experimento.Tanto en la droga como en el extracto acuoso se demostró la presencia de los compuestos que se reportan en la bibliografía en la especie que crece en Cuba. Con los datos obtenidos en esta investigación fueron propuestas las especificaciones de calidad de ambos medicamentos herbarios.



"In vitro" antioxidant activity of Rhodiola rosea L and Rhodiola sacra s.h. species in red blood cells exposed to hypochlorous acid

De Bellis R.1, De Sanctis R.1, Cucchiarini L1., Ricci D.2, Fraternale D.2 Scesa C.3,Dachà M.1

1Istituto di Chimica Biologica "Giorgio Fornaini", Università degli Studi di Urbino "Carlo Bo", Urbino (PU), Italy
2Istituto di Botanica e Orto Botanico "Pierina Scaramella", Università degli Studi di Urbino "Carlo Bo", Urbino (PU), Italy
3Facoltà di Medicina e Chirurgia, Università Cattolica del Sacro Cuore, Roma, Italy

The genus Rhodiola (Crassulaceae) consists of nearly 200 species and among them the rosea and sacra species are the most common. Rhodiola rosea L. is present in the arctic regions of eastern Siberia, but it is also found in the northern parts of Italy and Europe, where it grows at an altitude of 1500-3000mt. Commonly known as "golden" or "arctic root", it can reach about 40cm in height. It has orbicular-ovate to linear-oblong, usually dentate leaves and yellow, fragrant flowers. Similar to Siberian ginseng, the root of R. rosea is traditionally used as a tonic, antidepressant and anti-inflammatory drug. The first Rhodiola products were introduced as adaptogens to the western world several years ago. Rhodiola sacra (Rhodiola sacra S.H.), also known as Tibetan rhodiola, grows on the Himalayas, more than 4500mt above sea level. It is an herb with stems reaching 40cm long. The leaves are alternate, obovate-oblong with a non-dentate edge; the flowers are red. Many compounds have been identified in Rhodiola species including p-tyrosol, organic acid (gallic, caffeic and chlorogenic acid) and flavonoids (catechins and proanthocyanidins). The rosea species seems to have the best antioxidant activity because of the presence of unique cinammoyl-glycosides, namely rosin, rosavin and rosarin. In a previous study we have demonstrated that an aqueous extract of Rhodiola rosea is able to protect human erythrocytes from some of the damages induced by an oxidant. The aim of the present study was to investigate and compare the antioxidant effect of R. rosea and R. sacra root aqueous extracts in a model system represented by human red blood cells (RBC) exposed to hypochlorous acid (HOCl) by determining the glutathione (GSH) depletion, the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) inactivation and the hemolysis. We surprisingly found that the R. sacra aqueous extract has a better antioxidant capacity, as reducing ability, than the R. rosea extract, notwithstanding the absence of the three cinammoyl-glycosides, demonstrated by RP-HPLC analyses, in the R. sacra species. When incubated with human RBC in the presence of HOCl, both the extracts showed a similar dose-dependence protective effect toward GSH depletion, GAPDH inactivation and hemolysis induced "in vitro" by the oxidant. Preliminary data on tannin content demonstrated that the R. sacra aqueous extract possesses a higher quantity of these compounds and this probably reflects the higher reducing ability of this extract, as tannins are known antioxidants. The two extracts deprived of tannins showed, indeed, a diminished antioxidant capacity, as reducing ability, but similar protective effects on GSH and GAPDH when incubated with RBC treated with HOCl. However, a minor protection on hemolysis was observed with both the extracts without tannins. The results obtained are in agreement with the hypothesis that 1) cinammoyl-glycosides, present in the R. rosea species only, are not involved in the protective mechanism of Rhodiola extracts on human RBC exposed "in vitro" to HOCl. 2) the R. sacra root aqueous extract shows a higher reducing ability than the R. rosea species, according to the tannin content. 3) tannins should not be responsible for the protective effect of the Rhodiola extracts on GSH and GAPDH, but seem to be important for the antihemolytic effect.

Effects on insect moulting of selected sterol mixtures and peniocerol isolated from Myrtillocactus geometrizans and antioxidant activity of fruits

Rodrigo Salazar J., Mariano Martìnez V., Aranda E. and Carlos L. Céspedes

Chemical Ecology Lab. Chemistry Institute, UNAM, Coyoacan 04510, México DF, México.
http://www.iquimica.unam.mx/cespedes.html

We are interested in the secondary metabolites isolated from Cactaceae Family. Their fruits are consumed by its delicious taste, and in addition in refreshes, marmalades and in dried form. Into the human diet are included many plants (fruits and vegetables), that have secondary metabolites (flavonoids, terpenes, betalaines etc), many of them cause benefic effects to the health. Specially the antioxidant action, that effect included chemo preventive and nutraceuticals as well as inflammation, cancer, among other. The search of antioxidant secondary metabolites in consumable fruits, and vegetables is important since these sources are unexpensive, easy to obtain and to produce.On the other hand, Since K. Djerassi and collaborators published their results of systematic studies of cacti, few authors had been working to isolate and elucidate chemical structures of those plants. Our results are focused in the relationship between the secondary metabolites of Myrtillocactus geometrizans and Moneilema variolare, a root-feeding insect that recently was discovered using this plant as host (Salazar et al., 2004. In press). In this occasion, the extracts, isolated sterol mixtures and peniocerol were tested against two generalist insects, Spodoptera frugiperda and Tenebrio molitor. We obtained the methanol (EM) and dichloromethane (ED) extracts from the roots. EM was fractionated by column chromatography (CC) to give a mixture of sterols (CCM1). From CCM1 was isolated peniocerol (Cholest-8-en-3?,6 -diol) by recrystalization. The chemical elucidation of peniocerol was carried out by 1H y 13C-NMR one and two dimensional. Confirmation was made by X-ray diffraction experiment. Both extracts EM and ED, the sterol mixture and peniocerol shows inhibitory activities to the moulting process in S. frugiperda, and caused deformed pupas. While with Tenebrio molitor, peniocerol caused an accelerated moulting process compared with solvent control. Those results suggest that sterols presents in roots, have an effect on moulting process in generalist insects and can be acting as protective metabolites. The role of sterols in roots of M. geometrizans in the relationship with M. variolare will be discussed.
This work was supported in part by DGAPA-UNAM grant IN243802.



Evaluación de la actividad inhibitoria de peroxinitritos por plantas medicinales de Costa Rica

Acuña J.1, Beukelman C.2, Madrigal S.3 y Rodríguez G.1

1 Laboratorio de Biodiversidad, Escuela de Química, Universidad Nacional, 86-3000 Heredia, Costa Rica.
2 Phytogenix, Utrecht University, The Netherlands.
3 Instituto para Investigaciones Farmacéuticas (INIFAR), Facultad de Farmacia, Universidad de Costa Rica 2060 San Pedro, San José, Costa Rica.

E-mail: grodrig@una.ac.cr

Se realizó el estudio sobre las potenciales propiedades anti-oxidantes y antiimflamatorias de 14 plantas medicinales de uso tradicional en Costa Rica. Las plantas empleadas en este estudio son: Kalanchoe pinnatum, Kalanchoe pinnatum, Cecropia spp., Zingiber spp., Senna reticulata, Spondias purpurea, Piper hispidum, Acnistus arborescens, Wedelia trilobata. Annona cherimoya, Rollinia mucosa, Rollinia mucosa, Erythrina spp, Desmodium adscendes, Symphytum officinalis.
Las plantas frescas fueron suministradas por The Herb Ark Farm, ubicada en Santa Bárbara de Heredia, Costa Rica.Las plantas frescas seleccionadas se secaron a 40°C por 48 horas en una estufa con circulación de aire forzado y molidas en un molino de cuchillas hasta un tamaño de partícula de 2mm.
A las muestras así preparadas, se le realizan repetidas extracciones con etanol al 96%. Los extractos se concentran en un evaporador rotatorio y su actividad se evaluó por medio del método de neutrófilo polimorfonuclear PMN´s (quimioluminiscencia) y su actividad anti-oxidante, empleando difenilpicrilhidrazilo (DPPH) en etanol al 75%, en los laboratorios Phytogenix, de la Universidad de Utrecht, Holanda.
A partir de los resultados de éstos análisis se logró seleccionar 4 muestras que presentaron una menor concentración necesaria para alcanzar la inhibición del 50% del sustrato oxidante (IC50), en comparación con el control (H); y alta capacidad antioxidante.
De acuerdo con los resultados, se logró determinar que las especies Saragundi (Senna reticulata), Guarumo (Cecropia spp.), Anona (Annona cherimoya) y Consuelda (Symphytum officinalis), se presentan como las mejores candidatas, entre los extractos crudos analizados, para la evaluación de las propiedades anti-inflamatorias de sus principales componentes fitoquímicos puros e identificados.

 


Estudio fitoquímico de la actividad antiinflamatoria de las plantas medicinales Loasa speciosa y Urera caracasana

Carvajal Y.1, Castro C.2, Salas J.2, Badilla B.2 y Rodríguez G.1

1Laboratorio de Biodiversidad, Escuela de Química, Universidad Nacional, 86-3000 Heredia, Costa Rica.
2Instituto de Investigaciones Farmacéuticas (INIFAR), Facultad de Farmacia, Universidad de Costa Rica, 2060 San Pedro, San José, Costa Rica.

El presente trabajo comprende el estudio fitoquímico y anti-inflamatorio de dos plantas medicinales de uso popular en Costa Rica, Loasa speciosa y Urera caracasana. El trabajo con estas plantas se dividió en tres etapas. En la primera de ellas, las plantas colectadas (Loasa speciosa en las faldas del volcán Turrialba y Urera caracasana en Sabanilla) fueron secadas a 40°C por 48 horas en un horno con circulación de aire forzado y molidas en un molino de cuchillas hasta un tamaño de partícula de 2mm. Las muestras así preparadas, se extrajeron empleando agua caliente a 80°C, como disolvente. El extracto acuoso de cada planta fue liofilizado y su actividad anti-inflamatoria determinada empleando el modelo de medición de edema de pata en roedores, inducido por Carragenina, en dosis equivalentes a 500 y 250mg/Kg de cada extracto acuoso crudo. La segunda etapa consistió en la exploración fitoquímica del extracto acuoso; para lo cual se realizaron varias extracciones con acetato de etilo, sobre el extracto acuoso obtenido en la primera etapa. Los extractos orgánicos fueron concentrados utilizando un evaporador rotatorio, mientras que el residuo acuoso se concentró por liofilización. En ambos extractos se evaluó la presencia de iridoides, empleando la técnica de cromatografía de capa fina, utilizando gel de sílice como fase estacionaria, y una mezcla de hexano:éter etílico en proporción 8:2, como fase móvil. Las placas cromatográficas se revelaron empleando el reactivo de vainillina o anisaldehído a una concentración del 2% m/v, disueltos en una mezcla de etanol y ácido sulfúrico al 2% v/v. Este reactivo en contacto con diferentes tipos de iridoides produce coloraciones entre morado, violeta y rojo al calentarse la placa cromatográfica a 105°C por unos minutos. Los iridoides detectados por la técnica de cromatografía de capa fina, fueron separados utilizando cromatografía de columna convencional, empleando gel de sílice como fase estacionaria, junto con la misma fase móvil descrita anteriormente, así como cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) preparativa de fase reversa. La identificación de la estructura química de los iridoides se realizó mediante técnicas espectroscópicas de 1HRMN y 13CRMN. La última etapa de este trabajo consiste en la evaluación de la actividad anti-inflamatoria de los iridoides aislados en la etapa anterior.
Los extractos de ambas plantas mostraron actividad anti-edematógena estadísticamente similar a la Indometacina, de acuerdo a las condiciones descritas en el modelo utilizado. Se demostró la presencia de un efecto anti-inflamatorio similar entre las dos dosis evaluadas para cada extracto. Dos iridoides fueron purificados y su estructura identificada mediante técnicas espectroscópicas, ellos son loganina y secologanina.

 

Anti-Mycobacterium tuberculosis activity of peruvian plants

Rojas R.1,2, Caviedes L.3, Gilman R.H.3,4 y Lock O.1

1Departamento de Química, Pontificia Universidad Católica del Perú, Lima, Perú
2Departamento de Química, Facultad de Ciencias y Filosofía, Universidad Peruana Cayetano Heredia, Lima, Perú
3Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias y Filosofía, Universidad Peruana Cayetano Heredia, Lima, Perú.
4Department of International Health, Johns Hopkins School of Public Health, Baltimore, Maryland

Fourteen ethanol plant extracts were tested for anti-Mycobacterium tuberculosis activity using the rapid and inexpensive colorimetric assay TEMA (Tetrazolium Microplate Assay). Plants were selected based on their traditional use for the treatment of tuberculosis, lepra or hemoptysis. The plant extracts with the greatest activity against the sensitive H37Rv Mycobacterium tuberculosis strain were: Aspidosperma nitidum, Carpotroche longifolia, Swartzia polyphylla, Xyris jupicai (MIC=200 µg/ml); Bixa orellana, Oryctanthus alveolatus (MIC=100-200 µg/ml); Phthirusa retroflexa, Tetrapterys styloptera (MIC=100 µg/ml). A preliminary bioassay-guided fractionation of the ethanol extract of S. polyphylla, using solvents of different polarities, showed that the activity is concentrated in the 90% methanol fraction (MIC=100 and 50 µg/ml for the H37Rv and multi-drug resistant strain, respectively).
Acknowledgments: The authors are grateful to the Dirección Académica de Investigación of the Pontificia Universidad Católica del Perú for financial support (DAI 1199). Collaborative work was performed under the auspices of the Iberoamerican Program for Science and Technology (CYTED), Project X.11: PIBATUB.

 

Plantas medicinales Argentinas - base de datos

Rubén V.D., Coussio D.J. y Bandoni L.A.

IQUIMEFA (UBA-CONICET), Facultad de Farmacia y Bioquímica, Junín 956, (1113) Buenos Aires, Argentina

Se presenta la descripción y contenido de la base de datos "Plantas Silvestres Argentinas con Reconocidas Propiedades Medicinales o Tóxicas", CYTED y OEA, Buenos Aires (2003) I.S.B.N. No. 987-43-6073-9, editada en soporte óptico (CD). Dicha Base fue diseñada con el objeto de suministrar datos sobre las especies argentinas utilizadas en medicina popular. Ello basado en la información de otros autores y con el objeto de facilitar y fomentar la información fitoquímica y farmacológica de dichas especies. Pretende proveer fácil acceso a la información etnofarmacognóstica, que permita efectuar una selección de especies con mayor probabilidad de éxito en un proyecto dado.
La base contiene en forma abreviada toda la información hallada sobre el tema hasta la fecha en un total de 87 referencias bibliográficas y se encuentra en proceso de realimentación. Para cada especie comprendida se da información completa respecto a su nombre (género y especie), sinónimos botánicos, familia, nombres vernáculos, indicación terapéutica (i.e. "uso"), toxicidad (si se presenta), distribución geográfica (en Argentina y países limítrofes) y origen de la información.
Este archivo comprende 1549 especies (de las cuales 1400 medicinales y 149 especies consideradas "afines"), con 4423 sinónimos. 4981 nombres vulgares, 6898 referencias al uso popular, 271 referencias a toxicidad y 169 consignadas como "otros usos". Contiene 22440 registros, que ocupan 5,363,386 bytes. Lo acompaña un archivo referente a la bibliografía consultada, que ocupa 44544 bytes.
Esta base se pudo editar gracias a la colaboración del CYTED y de la OEA, que financiaron su reproducción en CD. Existe disponible un limitado número de ejemplares que se entregarán sin cargo a aquellos directores de planes de investigación que los soliciten.



Attività antiossidante e capacità antiproliferativa in cellule tumorali umane del Geum quellyon Sweet

Russo A.1, Piovano M.2, Lombardo L.3, Troncoso N.4, Vanella A.1, Cardile V.3 and Garbarino J.A.2

1Dipartamento di Chimica Biologica, Chimica Medica e Biologia Molecolare, Università di Catania, Italia, e-mail: alrusso@unict.it
2Dipartamento di Chimica, Università T.F. Santa Maria, Valparaiso, Chile.
3Dipartamento di Scienze Fisiologiche, Università di Catania, Italia
4Fundación Chile, Santiago, Chile.

Il Geum quellyon Sweet è un'erba perenne della famiglia delle Rosaceae, che cresce nella regione centrale del Cile sino alla Patagonia, nella zona della Cordigliera delle Ande. Volgarmente viene chiamata "erba del chiodo" per l'intenso aroma di chiodo di garofano che si sprigiona dalle radici, utilizzate da lungo tempo nella medicina popolare nelle nevralgie dentarie, nelle infiammazioni gastrointestinali, per regolare le mestruazioni e per le loro proprietà diuretiche. L'informazione fitochimica è scarsa, è stata infatti descritta solo la presenza di tannini. I tannini, come i flavonoidi, manifestano interessanti proprietà biologiche come l'attività antitumorale, antibatterica, anti-HIV, antimutagena, antiipertensiva e antiossidante. Azione quest'ultima che rende questi composti polifenolici particolarmente utili nella prevenzione di tutte quelle patologie in cui i radicali liberi giocano un ruolo chiave, come le malattie neurodegenerative, l'ischemia, il diabete e il cancro. Alla luce di queste considerazioni nel presente studio abbiamo analizzato l'attività antiossidante e antiproliferativa in cellule tumorali umane di un estratto metanolico delle radici di Geum quellyon Sweet, contenente l'11,72% di tannini totali.
I risultati ottenuti dimostrano che l'estratto in esame esibisce interessanti proprietà antiossidanti, espresse dalla sua capacità di agire da free radical scavenging nei confronti del radicale di sintesi 2,2-difenil-1-picril idrazile (DPPH), dell'anione superossido e del radicale idrossilico. In aggiunta, questo estratto ha dimostrato una promettente attività antiproliferativa in differenti linee tumorali umane, valutata mediante il saggio di metabolizzazione dei sali di tetrazolio (MTT test).
Pertanto, queste evidenze sperimentali lasciano ipotizzare che l'estratto di Geum quellyon Sweet per il suo contenuto in tannini potrebbe esplicare attività chemopreventiva e antitumorale, che sono da correlare, almeno in parte, alla capacità antiossidante, e possono giustificare ulteriori studi sulle sue proprietà benefiche.

 

Actividad biocida de extractos vegetales de especies etnobotánicas de la región centro-occidente de México

Salgado R.1, Calderón M.J.C.2, Serrato B.B.E.2, Bello G.M.A.3, López E.C.4, Covián N.F.1, Loeza L.P.D.1, Morales L.M.E.1, Damián B.L.M.1 y Martínez M.M.1

1Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, Inst. de Investigaciones Químico Biológicas,Michocán, México.
2Centro Nacional de investigación Disciplinaria en Producción Sostenible- INIFAP, México.
3C.E.Uruapan INIFAP. Av. Latinoamericana 1101, Col. Revolución, Uruapan, Mich., México.
4U.M.S.N.H., Facultad de Biología, Edif. R, Ciudad Universitaria, Morelia, Michocán, México.

En México, uno de los países con mayor riqueza florística en el mundo, se han realizado investigaciones que demuestran la producción de metabolitos secundarios con propiedades biocidas (bactericidas, fungicidas e insecticidas) en numerosas especies de plantas, destacando las que pertenecen a la familia Asteraceae, Fabaceae y Brassicaceae, entre otras.
En el presente trabajo se reportan los efectos biocidas de diferentes extractos vegetales de especies etnobotánicas de la región centro-occidente de México, de las cuales se ha demostrado el efecto fungicida y bactericida de los extractos de raíces de Heliopsis longipes 'A. Gray' Blake (chilcuague) y Acmella oppositifolia Jacq. (botón de oro); de hojas y tallos de Tagetes lucida Cav. (Santa María), Satureja macrostema 'Benth' Briq. (nurite), Artemisia ludoviciana Nutt. (estafiate); y de hojas, tallo y flores de Helenium mexicanum H.B.K. (cabezona). En bioensayos in vitro se ha comprobado que éstos inhiben el desarrollo de hongos fitopatógenos del género Colletotrichum, Fusarium, Verticilum y Phytophthora y de hongos patógenos de humanos como Candida albicans, Trichophyton rubrum, Sporothrix schenkii y Mucor cercinelloides; asimismo, inhiben el crecimiento de ciertas bacterias como Salmonella sp., Escherichia coli, Shigella sp., Staphylococcus aureus y Streptococcus sp.
Se ha comprobado que algunos de estos extractos poseen también propiedades insecticidas como el de raíces de H. Longipes y de flores de H. mexicanum, ya que mostraron porcentajes de mortalidad mayores al 70% en Acanthoscelides obtectus (gorgojo), Epilachna varivestis (conchuela de frijol) y larvas de Culex stigmatosoma (mosquito).
Los resultados muestran el potencial biocida de estas plantas, de las cuales algunos metabolitos ya se han dilucidado y otras se analizan para conocer sus principios activos y las CL50.


Inhibiciòn de Gardnerella vaginalis por extractos vegetales utilizados para el tratamiento de vaginitis

Samayoa C.L., Palacios M.C., Paz A.M. y Cáceres A.

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala.

Las infecciones vaginales son problemas frecuentes en ginecología. Estas son causadas por bacterias, como Gardnerella vaginalis que provoca una vaginosis, por el hongo Candida albicans y por el protozoo Trichomonas vaginalis, que provocan una vaginitis. El término vaginosis difiere de vaginitis, ya que en la primera hay un incremento en la descarga de flujo, sin inflamación significativa y está asociada a la ausencia relativa de polimorfonucleares, mientras que en la segunda, además existe una marcada inflamación y presencia de polimorfonucleares. La vaginosis por G. vaginalis es la más común, presentándose en un 40% de mujeres con afecciones vaginales. El tratamiento indicado es metronidazol, el cual puede causar efectos secundarios. Con el interés de encontrar alternativas de tratamiento, se realizó un estudio que plantea como objetivo validar experimentalmente la acción antimicrobiana de plantas medicinales de uso popular en Guatemala en el tratamiento de vaginitis (Baccharis trinervis, Cornutia pyramidata, Quercus crispifolia, Stachytarpheta cayennensis, Sterculia apetala, Tabebuia rosea, Neurolaena lobata, Salvia lavanduloides, Solanum americanum, Thitonia diversifolia, Vernonia deppeana, Hypericum uliginosum, Acalypha pseudoalopecuroides) y así contribuir a proveer a la población con opciones farmacológicas efectivas y accesibles.
Las plantas fueron identificadas, secadas y molidas. Se prepararon extractos etanólicos por percolación con alcohol al 95% y evaporación al vacío. Se les determinó la actividad contra dos cepas de G. vaginalis que se obtuvieron por un muestreo en pacientes con infecciones vaginales que asistían a la Ginecología del Hospital San Juan de Dios y del IGSS cultivadas en agar CNA. La determinación de la actividad vegetal se realizó preparando una mezcla de agar-planta en cajas de petri, obteniendo una concentración de extracto de 1 mg/ml. Las cajas con agar-planta fueron inoculadas con las cepas de G. vaginalis por cuadriplicado, obteniéndose una inhibición en el crecimiento de la bacteria en 7 de los 13 extractos, a los que se les determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM), presentando actividad a una concentración de 0.5 mg/ml los extractos de B. trinervis, S. cayennensis, S. americanum, V. deppeana y T. rosea. Estos resultados demuestran una actividad moderada de los extractos, lo que valida en alguna forma su uso popular.



Capacidad secuestradora de radicales libres y efecto protector sobre la hemólisis de los eritrocitos humanos del extracto acuoso de cortezas de Rhizophora mangle L. y de su fracción de polifenoles de alto peso molecular

Sánchez J.1, Melchor G.1, Escobar A.1, Faure R.1 y Mitjavila M.T.2

1Grupo de Química-Farmacología, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, CENSA. La Habana, Cuba. E-mail: jsanchez@censa.edu.cu
2Departamento de Fisiología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona, España.

Se estudió el potencial efecto antioxidante del extracto acuoso obtenido de cortezas de Rhizophora mangle L. y de su fracción mayoritaria, los polifenoles de alto peso molecular. Estas muestras fueron evaluadas en los ensayos de secuestro de radicales 1,1 Diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), así como de anión superóxido en el sistema xantina/xantina oxidasa, con el empleo del método del azul de nitrotetrazolio. Además se analizaron sus efectos sobre la hemólisis de los eritrocitos humanos inducida con 2,2- azobis (amidinopropane) dihydrochloride (AAPH). Ambas muestras exhibieron actividad secuestradora de radicales DPPH de forma dependiente de la concentración, inhibiendo la generación de este radical en un 78.44 % y 76.62 % respectivamente, a la máxima concentración ensayada, 66.0 g/ml. El extracto y su fracción también inhibieron la producción de anión superóxido a todas las concentraciones ensayadas. A la máxima concentración evaluada de ambas muestras, 66.0 g/ml, la concentración de este radical se redujo en un 50 %, a los 10 minutos de iniciada la reacción. El extracto y su fracción mostraron un efecto protector sobre la hemólisis de los eritrocitos humanos inducida por radicales libres. Las concentraciones de muestra que inhibieron la hemólisis en un 50% (IC50) fueron 113,99 g/ml para el extracto 204,02 g/ml para la fracción. Estos resultados demuestran las propiedades antioxidantes del extracto acuoso de Rhizophora mangle L., evidenciadas en su capacidad secuestradora de radicales libres y su efecto inhibidor de la hemólisis de los eritrocitos humanos inducida por radicales libres. Además se comprobó que la fracción de polifenoles de alto peso molecular es el principal componente responsable del efecto antioxidante mostrado por el extracto acuoso de Rhizophora mangle L.



Flavonoids from Indigofera truxillensis (Fabaceae) leave extract

Calvo T.R.1, Sannomiya M.1, Santos L.C.1, Cola M.2, Souza A.R.2 and Vilegas W.1

1Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, UNESP, Araraquara, SP, Brasil.
2Departamento de Fisiologia e Biofísica, Instituto de Biologia, UNICAMP, Campinas, SP, Brasil.

I. truxillensis occurs naturally in the States of São Paulo, Brazil. The leaves are employed in folk medicine for the treatment of gastric ulcer. Specimens of Indigofera truxillensis were collected in city of Campinas, São Paulo. This work describes the isolation and the identification of the compounds from methanol extract. The leaves of Indigofera truxillensis were dried in a oven at 45 C for one week and powdered. The resulting material was macerated at room temperature with MeOH for 48 hours. Extract was filtered and concentrated under vacuum affording the MeOH extract of leaves. 3,0 g of MeOH extract was fractionated by gel permeation chromatography column (Sephadex LH-20, Pharmacia) eluted with methanol. The fractions (116, 8 ml each) were collected and checked by TLC [Si gel plates, using solvent system (BAW n-BuOH/HOAc/H2O, 4:1:2 v/v/v)] The fractions 11-12 were further purified by CC polyvinylpolypyrrolidone eluted with methanol. The compounds isolated were determined to be kaempferol-3-O-L-rhamnopyranoside, kaempferol-3,7-di-O-L-rhamnopyranoside and kaempferol-3-O-L-rhamnopyranosyl-(2 1)-L-apyopyranosyl-7-O-L-arabinopyranoside by their spectral analysis (NMR and UV experiments).



Recopilación de estudios de plantas medicinales validadas farmacológicamente por estudiantes asesorados en el departamento de farmacología y fisiología de la escuela de Química Farmacéutica, de la facultad de Ciencias Químicas y Farmacia de la universidad de San Carlos de Guatemala

Fión M. y Saravia A.

Departamento de Farmacología y Fisiología. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala.

En la antigüedad el uso de plantas medicinales era el único medio con que se contaba para curar las enfermedades; pero a raíz del auge que obtuvo la síntesis química por parte de los laboratorios farmacéuticos y la gran capacidad de producción con el que éstos contaban, el uso de plantas medicinales quedó en el olvido por un tiempo,
En la actualidad, por el aumento del precio de los medicamentos de síntesis química y por los efectos adversos que la mayoría de éstos provocan se está retomando el uso de las plantas medicinales; por ello los estudiantes de la carrera de Química Farmacéutica, asesorados por el Departamento de Farmacología y Fisiología, han realizado una infinidad de trabajos de tesis sobre "Validaciones farmacológicas de plantas medicinales de uso popular en Guatemala" y para que estos trabajos sean aprovechados al máximo, se llevó a cabo esta recopilación, que consta de información relevante de trabajos de Tesis realizados desde el año 1980 al 2004.
La información presenta los datos más importantes de las validaciones realzadas como: el nombre científico, nombre común, fase de investigación, parte de la planta analizada, tipo de extracto, acción farmacológica, resultados del análisis y las pruebas específicas para cada acción tanto farmacológica como toxicológica analizadas. Las plantas se clasificaron dependiendo a la familia a la cual pertenecen.



Actividad farmacológica de metabolitos secundarios de plantas medicinales guatemaltecas e invertebrados marinos de arrecifes de los litorales Atlántico y Pacífico del país

Saravia G.A., Cóbar O., Rastrelli L. Berger I., Cazali G., Velásquez M. Á., Rodas A. M. y Tally W.

Departamento de Farmacología y Fisiología. Escuela de Química Farmacéutica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONCYT)

La investigación que se presenta está orientada a la generación de conocimiento Químico, Farmacognósico y Farmacológico de la flora medicinal guatemalteca y de los productos naturales aislados de invertebrados marinos de los litorales Atlántico y Pacífico de Guatemala. El propósito primordial del proyecto fue el de aislar metabolitos secundarios que posean al estudiarlos, una actividad farmacológica, a partir de los cuales se puedan desarrollar productos medicinales de origen natural, al tiempo que se contribuye con el estudio de la Etnobotánica y de la Medicina Tradicional indígena de Guatemala. Por otro lado, el proyecto contribuyó con la generación de conocimiento que servirán de base para el ulterior estudio de variabilidad, domesticación y cultivo de especies vegetales y al desarrollo de técnicas de explotación sostenible de los productos marinos, a manera de desarrollar un potencial industrial de productos hidrobiológicos.
Con respecto a los resultados obtenidos de las plantas medicinales y el invertebrado marino, podemos decir que para todos los metabolitos o mezcla de ellos de las plantas estudiadas, a dosis mayor que 500 mg/kg de peso no se obtuvieron resultados de toxicidad aguda (DL50).Con las siguientes plantas se trabajó el componente fitoquímico y los resultados son los siguientes: Lippia alba de las 5 fracciones (La1,La2,La3,La4 y La5) las fracciones activas fueron la La1 y La2 que mostraron presencia de saponinas y flavonoides y farmacológicamente demostraron actividad antiinflamatoria; para Petiveria alliacea las fracciones 18 y 23 mostraron actividad antiinflamatoria y se obtuvieron en el fraccionamiento Cumarinas; para el Tridax procumbens las fracciones activas fueron la Tp1, Tp3 y Tp4, que igualmente mostraron actividad antiinflamatoria y la presencia de flavonoides; para el Zea maiz al estudiar los extractos del estilo de maiz se confirmó la actividad diurética de dichos extractos y se reportó la presencia de cumarinas y antraquinonas; para Hibiscus sabdarifa se reporta actividad diurética en las fracciones Hs6 y Hs7 y para el invertebrado marino (Haliclona rubens):se obtuvieron extractos no polares (n-hexano, cloroformo, n-butanol) y polares (metanólico y acuoso), reportándose saponinas y esteroides insaturados en los extractos polares. Los extractos hexánico, clorofórmico y n-butanólico, a la dosis toxicológica de 500 mg/Kg de peso, mostraron alta toxicidad, por lo que se estudió el extracto metanólico, al cual se le determinó la toxicidad a 500 mg/Kg de peso, habiendo demostrado toxicidad a los 5 días, por lo que se disminuyó la dosis a 100 mg/Kg de peso, no mostrando toxicidad aguda luego de 8 días, por lo cual se inició el Screening Hipocrático de Sandberg y Malone, para determinar que posible actividad biológica posee este extracto del invertebrado marino, resultando en actividad sedante-hipnótica. Al confirmarse la actividad citada, se iniciaron los estudios a 75 y 50 mg/Kg de peso, en donde mostró poseer una actividad sedativa e hipnótica, con respecto a los fármacos de referencia.



Estudio farmacológico de los extractos etanólico, hexánico, clorofórmico, acetato de etilo y acuoso de las hojas de Daucus carota (zanahoria) como sedante hipnótico (fase II)

González L. y Saravia A.

Departamento de Farmacología y Fisiología. Escuela de Química Farmacéutica. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala.

La fitoterapia ha tomado auge en el mundo entero como una alternativa en el tratamiento de muchas afecciones del organismo. En Guatemala, la medicina tradicional es un pilar fundamental en materia de salud, tanto por la crisis económica que se vive como por las tradiciones propias de cada comunidad en cuanto a "remedios caseros". En el Departamento de Farmacología y Fisiología de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia se han estudiado numerosas plantas medicinales que han demostrado una actividad terapéutica y en este caso se realizó un estudio farmacológico de las propiedades hipnóticas y sedantes de las hojas de Daucus carota (zanahoria). La infusión de hojas de esta planta ha demostrado tener actividad sedante hipnótica a dosis de 750mg/kg y de 1000mg/kg de peso y es importante continuar con el estudio fase II para determinar el principio activo responsable de dicha actividad.
Con este propósito se extrajo con solventes de distintas polaridades (etanol, hexano, cloroformo, acetato de etilo y agua), las diferentes porciones de principios activos que posee la planta, para determinar cual de éstas es responsable de la acción sedante hipnótica. Los distintos extractos se disolvieron en solución de goma arabiga y se administraron por vía oral a dosis de 50, 125 y 300 mg/kg de peso; se procedió a la realización de los tests farmacológicos: Placa agujereada, Prueba de la Chimenea, Prueba del Rotarod y Prueba de Potenciación del Sueño, utilizando ratones machos albinos de 20g de peso aproximadamente. Se utilizó como fármaco de referencia el haloperidol y el pentobarbital para la prueba de potenciación del sueño.
Los resultados para los distintos extractos muestran una actividad sedante e hipnótica para el extracto etanólico y el extracto de acetato de etilo, puesto que prolongaron el tiempo de sueño de los ratones en experimentación, además de disminuir su curiosidad, equilibrio y tono muscular.
Se determinó la toxicidad aguda de los extractos etanólico y de acetato de etilo, empleando dosis de 250, 350 y 450 mg/kg de peso de los extractos a 5 ratones machos albinos, observándose durante 8 días; se estableció que a estas dosis los extractos carecen de efecto tóxico.



Evaluación de la actividad analgésica de los extractos etanólico, hexánico, cloroformo, acetato de etilo y acuoso de las hojas de Catopheria chiapensis (linimento), estudio farmacológico fase II

Vielman N. y Saravia A.

Departamento de Farmacología y Fisiología. Escuela de Química Farmacéutica. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala.

Las plantas medicinales son un legado que nos ha dado la naturaleza en Guatemala, y su utilización como medicina alternativa tiene sus orígenes desde nuestros ancestros, los Mayas. Por tal motivo, en el departamento de Farmacología y Fisiología de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia se han estudiado numerosas plantas medicinales que han demostrado una actividad terapéutica y en este caso se estudió una planta medicinal llamada Catopheria chiapensis (Linimento), que al inicio se le estudió su actividad analgésica, la cuál dio un excelente resultado por lo que le denominamos Fase I por ser estudiada en forma de infusión a dosis de 750 y 1000 mg/kg de peso. A partir de ese informe se estudió la Fase II o sea hacer un fraccionamiento bioguiado para encontrar el o los extractos que tienen actividad analgésica.
Por lo tanto este trabajo tuvo la finalidad de estudiar la actividad analgésica de los extractos etanólico, hexánico, cloroformico, acetato de etilo y acuoso de las hojas de Catopheria chiapensis (linimento).
Los extractos fueron preparados por medio de la metodología del fraccionamiento bioguiado. La actividad analgésica de dichos extractos se evaluó por medio de la prueba del analgesímetro, en ratas Wistar de un peso aproximado de 170 gramos.
Los resultados obtenidos y las pruebas estadísticas determinaron que el extracto de acetato de etilo de Catopheria chiapensis (linimento) posee mejor actividad analgésica significativa a dosis de 25, 75, 100, 200 y 400 mg/kg de peso, respecto a los extractos hexáncio y acuoso. El extracto etanólico presentó actividad analgésica significativa a dosis de 100 mg/kg de peso. El Extracto clorofórmico no posee actividad analgésica significativa.
La dosis efectiva media (DE50) del extracto de acetato de etilo de las hojas de C.chiapensis, no se pudo determinar, debido a que la actividad analgésica demostrada por las dosis utilizadas fue siempre significativa.
Por la respuesta analgésica obtenida para el extracto de acetato de etilo, se llevó a cabo la caracterización fitoquímica preliminar, al cual se le realizó un tamizaje fitoquímico utilizando ensayos macro y semimicro y técnicas de cromatografía en capa fina (CCF) que evidenciarion la existencia de alcaloides, antraquinonas, flavonoides, antocianinas, cardenólidos, bufadienólicos, principios activos amargos y aceites esencias.
Asimismo al extracto de acetato de etilo se le hizo el estudio de toxicidad aguda, (DL50)dando como resultado no ser tóxico a dosis mayor o igual a 600 mg/kg de peso en ratones albinos de un peso aproximado a 20-25 g.
De tal manera que se puede concluir en el presente trabajo que el extracto de acetato de etilo presentó una excelente actividad analgésica y que puede ser un producto prometedor para sus siguientes estudios de fraccionamiento



Estudio farmacológico de los extractos etanólico, hexánico, clorofórmico, acetato de etilo y acuoso de las hojas de Lippia graveolens H.B.K (orégano) como diurético (fase II)

Morales J. y Saravia A.

Departamento de Farmacología y Fisiología. Escuela de Química Farmacéutica. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala.

Guatemala posee una gran variedad de plantas, que milenariamente han sido utilizadas por la población para tratar la mayoría de las enfermedades. Actualmente se ha incentivado la producción de medicamentos que emplean como materia prima plantas regionales, y gracias a las investigaciones dedicadas a comprobar los efectos farmacológicos, los mejores métodos de extracción y a la identificación de los principios activos, se ha disminuido en gran manera la incidencia de distintas enfermedades dentro de la población. Por tal motivo el Departamento de Farmacología y Fisiología de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, apoya dichas investigaciones al realizar estudios Farmacológicos; en este caso se realizó un estudio de Fase II de las propiedades diuréticas de Lippia graveolens (orégano), el cual se basó en un estudio anterior, en el cual se demostró actividad diurética significativa de la infusión de Lippia graveolens (Orégano) a dosis de 750mg/kg y 1000mg/kg. Con el propósito de identificar los principios activos responsables de dicha actividad, se utilizaron solventes de diferente polaridad para separar los principios activos, obteniendo los extractos etanólico, hexánico, clorofórmico, acetato de etilo y acuoso. Los extractos fueron evaluados a través del método para actividad diurética de Naik y colaboradores, modificado por Saravia, A. Se utilizaron ratas albinas, del mismo sexo, en grupos de 3 ratas cada uno, en ayuno de 24 hrs con un rango de peso entre 160-200g, durante un período de experimentación de 5 días. Se realizaron 4 tratamientos por ensayo, de manera que dos de estos fueron el fármaco de referencia (Furosemida) y el control, y los otros dos fueron un extracto a las dos dosis experimentales (25mg/kg y 100mg/kg). Se obtuvieron 6 replicas de cada tratamiento por evaluación de cada extracto. El análisis estadístico de los resultados obtenidos, se realizó calculando el área bajo la curva, diuresis versus tiempo como variable de respuesta, análisis de varianza (Andeva) de una vía y la prueba de Dunnett. El análisis de la actividad diurética de los extractos demostró que ninguno posee actividad diurética significativa en las dosis experimentadas. Para descartar la idea de una diuresis significativa a mayores dosis, se realizó un ensayo a dosis de 150mg/kg y 200mg/kg del extracto hexánico (el cual demostró mayor diuresis en comparación con el control), con 3 replicas de cada grupo. Al analizar los resultados de éste ensayo, se determinó que no se tiene actividad diurética significativa a ninguna de las dosis experimentadas (25mg/kg -200mg/kg). Los resultados indican que la actividad diurética demostrada en la infusión de Lippia graveolens, se debe al sinergismo de todos los compuestos que contiene la planta, es decir que se da cuando la planta está completa sin ninguna separación de sus componentes por la polaridad de los mismos; además el análisis fitoquímico demostró la ausencia de aceites esenciales, a los cuales le atribuyen la mayoría de propiedades farmacológicas de la Lippia graveolens (Oregano).

 


Antimicrobial and cytotoxic activity of some Brazilian medicinal plants

Bouzada M.L.M.1, Fabri R.L.1, Garcia G.D.2 y Scio E.1

1Department of Biochemistry.
2Department of Parasitology, Microbiology and Imunology, Institute of Biological Sciences - Federal University of Juiz de Fora, MG, Brazil.

Infectious diseases are the world's leading cause of premature deaths, killing almost 50 000 people every day. In recent years, drug resistence to human pathogenic bacteria has been commonly reported from all over the world. In this scenario there is a need of search for new antimicrobial substances from other sources including plants.In this study, methanol extracts of the leaves of Solanum nigrum, Vernonia polyanthes, Piper aduncum, Stachytarpheta cayennensis, Alternanthera brasiliana, Plantago lanceolata, Pothomorphe umbelatta and Polygonum hidropiperoides, plants commonly used in Brazil for treating conditions likely to be associated with microorganisms, were evaluated for their toxicity to the brine shrimp (Meyer et al., Planta Medica, 45, 31, 1982) and antimicrobial activity (Ahmad & Beg, J Ethnopharmacol 74, 113, 2001). The agar diffusion method was used against Staphylococus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp and Klebsiella pneumoniae. Phytochemical analysis of the plant extracts for their major groups of phytoconstituents is also reported (Matos, Introdução à Fitoquímica Experimental, 141p., 1997). All extracts showed antimicrobial activity against at least S. aureus and Salmonella sp; extracts of Polygonum hidropiperoides, Stachytarpheta cayennensis and Alternanthera brasiliana were active against all microorganisms tested and the highest inibitory zones were observed for the latest. The extracts of Solanum nigrum, Piper aduncum and Alternanthera brasiliana showed significant toxicity against brine shrimp with 100% of lethality at 1000 µg/ml, after 24 h exposure. Phytochemical analysis of the extracts demonstrated the presence of common phytoconstituents like phenols, coumarins, flavonoids, saponins and alkaloids.
The results were encouraging, as all the selected plants appeared to contain antimicrobial substances. Further attempts are being made to isolate the active constituents of the extracts. This reinforces the concept that the investigation of ethnobotanically used plants will reveal a substantial number of positive responses to in vitro screens.



Evaluación biológica y dilucidación estructural de un principio activo de Satureja macrostema (Benth) Briq

Serrato B.B.1, Bello G.M.2, Del Río R.E.3, Calderón M.J.3.y Salgado R.3

1Centro Nacional de investigación Disciplinaria en Producción Sostenible- INIFAP, México. E-mail: serratoblanca@hotmail.com
2C.E.Uruapan INIFAP. Av. Latinoamericana 1101 col. Revolución, Uruapan, Mich.
3Inst. de Invest. Quim.-Biol. UMSNH, Edif.. B-3, C.U. 58030 Morelia, Mich. México.

En estudios fitoterapéuticos de las plantas de la familia Labiatae, conocidas como ajedrea, en la de monte (Satureja montana L.), en la de jardín (S. hortensis L.) y la fina (S. ovata Lag.), se indica que se encontraron una serie de compuestos como: a) aceite esencial (0,2 - 2,8% ), presente en las hojas y compuesto principalmente por carvacrol (30-40%), cimol o p-cimeno (10-20%), timol (1-5%) y beta-terpineno (2-10%); b) ácidos fenólicos como los ácidos caféico, siríngico, vaníllico, parahidroxibenzoico, paracumárico, ferúlico y rosmarínico; y c) otros, como taninos (4-8%), ácido ursólico, flavonoides (apigenina, escutelarina. Elechosa y colaboradores reportan al óxido de piperitenona como el componente mayoritario (53.4-54.5%) en Satureja odora .
Por el resultado de estos estudios, se analizó el efecto de extractos de Satureja macrostema (Benth.) Briq., ya que es una planta silvestre nativa de la zona lacustre del Estado de Michoacán (Centro-Occidente de México), la cual es una planta muy utilizada en la medicina indígena de la región Purhépecha, principalmente para aliviar dolores de estómago causado por el exceso de consumo de alimentos, con una alta creencia de que posee propiedades afrodisíacas.
En este trabajo se reporta el aislamiento e identificación de piperitenona, a partir de un extracto etanólico de la parte aérea (hojas y tallos) de Satureja macrostema. Este compuesto presentó un efecto de inhibición de las bacterias Salmonella sp. (30%) y Staphylococcus aureus (32%) tanto de plantas en estado de prefloración como en plena floración. Asimismo, en el ensayo autobiográfico se observó un efecto de retardo de seis días en la germinación de la semilla de trébol (Trifolium pratense cv. Kendland), caracterizándolo como poseedor de cualidades aleloquímicas.



Chemical composition of the essencial oils of Minthostachys tomentosa (Briq.) Epl. (Lamiaceae) from Perú

Siccha A., Ocampo B., Saenz G., Podea R. y Batiu I.

Experimental Technological Center Vice-Rectoraje Research of National. Department of Chemical Engineering, Napoca - Romania

The composition of essencial oils of muña-muña, Peruvian medicinal plants, from Minthostachys tomentosa were analized by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS). The components were also identified by GC-FID, on two columns, accordind to Kovats -retention index. A total of 49 components have been identified, representing the 98.4% of the composition of the oil. The major components were pulegone (47.97%), menthone (22.93%), isomenthone (6.63%) and neomenthol (4018%).

Introduction:
A number of plants of the Lamiaceae family growing in the Andean mountains, from Venezuela to Argentina, at altitude between 2500 and 5000 m are called muña-muña or khoa by the Kechuas Indians, huaichcha (Oblitas-Poblete, 1969) by the Aymara Indians and paleo silvestre by the Spanish people. The genus Minthostachys is a taxonometrically complex genus of aromatic plants that includes herbs and evergreen shrubs. The essential oils compositions of some species of Minthostachys, growing in different geographyc areas in South America have been publish by Senatore. The leaves and flowers spikes are used as a spice in foods. The native Indians use the plant in folk medicine to cure the tumour and leaves in mixture with chilca, in bone fracture. The essential oils of Minthostachys setosa for example is used as pesticide, for the food conservation (against Phytphtora intestinats, Fusarium solanaceum and Erwinea corotovora), insecticide (against Musca domestica) and bacteriology (against Shigela dysenteriae, Salmonela typhi and Eserichia colli). Also the essential oil has antiinflamatory, carminative, antiseptic and analgesic action. Therefore, in view of its local importance in traditional medicine, the present study was undertaken in order to increase knowledge of the chemical composition of the essential oils of Minthostachys setosa aerial plant from the south of Perú.

Experimental:
Plant material
Aerial parts of Minthostachys tomentosa were collected at full flowering stage, in October, in the areas of Chachapoyas San Pedro Amazonaz Departament at 2334 meteres of high sea level North of Perú. The plant was identified by Professor Cayetano Heredia from Universidad Nacional del Callao, Lima Perú.
Isolation of tbe Essential Oil
200g of dried aerial leaves in a vacuum fried by 4 h was used. The essential oil was isolated by steam dragged for 30 min. The essential oil was limpid, pale yelow, with a pleasant, with a pleasant, fresh mini odour. The content of volatile oil was 2,5% (v/w) on dry weight basis.
Gas cbromatograpby
GC- Analyses
GC analyses were carried out with a Hewlett-Packard 6890 gas-chromatograph equipped with a flame ionization detector. The sample was analyzed on two fused silica capillary columns with bonded phases of different polarity. The semi-polar system comprised a HP-5 fused silica capillary column (30m x 0.25 mm i.d., film thickness 0.25 m). The temperature program was: 50°C (2 min) // ramp2°C/min // 180°C // ramp 20°C/min // 250°C (2 min). Carrier gas (He) flow rate was 1 rnL/min, and injector and detector temperatures were 250 °C. The sample was injected in the split mode with a 1:20 split ratio. The polar system included a HP-Wax fused silica capillary column (60m x 0.25 mm id., film thickness 0.25 m). The temperature program was: 50 °C (2 min) // ramp 2°C/min // 250°C (2 min). Carrier gas (He) flow rate was 2 rnL/min, and injector and detector temperatures were 250 °C. The sample was injected in the split mode with a 1:20 split ratio. Quantification was achieved from GC-FID profiles on HP-5 column according to the area percent method without consideration of response factors (F=1.0 for all compounds). The identity of the components was assigned by comparison of their RIs, relative to C9-C23 n-alkanes, with those of authentic standard s available in our own laboratory or with GC data previously published.

GC- MS Analyses:
GC-MS analyses were performed on a Hewlett-Packard 5890 series II gas-chromatograph coupled with a Hewlett-Packard 5989 B mass-spectrometer. The gas-chromatograph is equipped with a HP-5MS -fused silica capillary column (30m x 0.25 -mm i:d., -film thickness- 025 tm). The temperature program was: 50ºC (2 min)// ramp2ºC/min// 180ºC//ramp 20ºC/min//250ºC (2 min). Helium was used as carrier gas and the flow rate was 1 mL/min. The temperature of GC/MS interface line was 280ºC, the ion source was maintained at 200ºC and the quadrupol analyser temperature was 100ºC. Electron energy was 70eV and electron emission 300 A. Compounds were identified using both chromatographic and mass spectroscopic criteria.


Squalene: una biomolecola da rivalutare

Grandinetti M., Stancato A. e Passi S.

Centro Invecchiamento Cellulare, IDI-IRCCS, Roma

Lo squalene (SQ), noto intermedio nella sintesi degli steroli, è un idrocarburo triterpenoide esainsaturo a 30 atomi di carbonio (C30H50) che, in natura, si rinviene esclusivamente nel fegato degli squali (donde il nome), nel sebo umano e nell'olio extravergine di oliva (OEO). Abbiamo studiato lo SQ nel sebo umano (100 individui sani di età compresa tra 18 e i 35 anni, metà maschi e metà femmine) e in 5 OEO italiani.
Nel sebo, ove è stato trovato ad una concentrazione di circa il 12%, lo SQ è capace di contrastare efficacemente le specie reattive dell'ossigeno ed in particolare l'ossigeno singoletto, indotti dalle radiazioni UV, agendo da filtro biologico indiretto. Il sebo umano contiene anche vitamina E (vit E) ed ubichinone ( CoQ10), che giocano un importante ruolo fisiologico proteggendo lo SQ dall'ossidazione indotta dall'"environment" e tenendo sotto controllo i livelli dei nocivi by-products dello SQ ossidato e la loro penetrazione negli strati sottostanti vitali dell'epidermide e del derma.
Nell'OEO lo SQ è stato trovato alla concentrazione dello 0,5-0,8%. Esso rappresenta la frazione principale dell'insaponificabile, un'aliquota complessa (1,5- 2,2% dell'olio) che, non contenendo acidi grassi liberi o esterificati, non diventa sapone se trattato con alcali. E' verosimile che gran parte delle proprietà dietetiche, terapeutiche e cosmetiche dell'OEO sia da attribuirsi proprio all'insaponificabile. L'insaponificabile contiene anche vit E e altri fenoli con proprietà antiossidanti (fenoli semplici, secoiridoidi e lignani), che non solo operano in sinergia con l'acido oleico per conferire stabilità agli attacchi ossidativi esterni, ma contribuiscono anche significativamente al "bouquet" dell'OEO.
Abbiamo osservato che l'ossidazione dell'OEO ha come "target" principale non tanto gli acidi grassi polinsaturi, quanto gli antiossidanti dell'insaponificabile ed in particolare la vit E,gli orto difenoli e lo SQ. La vit E è l'antiossidante più importante e funzionale presente nell'OEO ed il primo ad essere ossidato diventando, in parte, proossidante, in grado pertanto di ossidare gli altri antiossidanti dell'insaponificabile, in particolare orto difenoli e SQ, con formazione di altre specie reattive, di natura radicalica e non. Si innesca pertanto un meccanismo radicalico "a cascata" perverso che, alla fine, con la riduzione massiva degli antiossidanti, riguarderà essenzialmente gli acidi polinsaturi dell'olio, con generazione di innumerevoli molecole, carboniliche e non, dotate di tossicità e mutagenicità, in grado di impartire un odore e un sapore estremamente sgradevoli, anche a piccolissime concentrazioni (irrancidimento).
Oltre allo SQ e vit E, l'OEO ha in comune con il sebo l'alta concentrazione di acidi grassi monoinsaturi e questa somiglianza di composizione rende l'OEO particolarmente idoneo quale ingrediente naturale di prodotti biocosmetici.



Antihypertensive and endothelium-dependent vasodilator effects of hydroalcoholic extract of Alpinia zerumbet (AZ) and red wine (RW): a comparative study

Soares de Moura R, Carvalho L.C.R.M., Madeira V.F., Vieira M.A.S., Tano T. and Resende A.C.

Dept Pharmacology State University of Rio de Janeiro - Brasil

Alpinia zerumbete (Zinziberacea) a medicinal plant used in Brazil and red wine both rich in polyphenols (Mpalantinos et al., 1998; Lopez et al., 2001), seems to have a protective effect against cardiovascular disease. Therefore, experiments were undertaken to assess a possible antihypertensive effect of AZ and RW in NO-deficient hypertensive rats and also the mechanism of the vasodilator effect of AZ and RW in the rat mesenteric vascular bed (MVB). The ethanol of the hydroalcohlic extract of AZ and of RW (Cabernet sauvignon-Miolo, Brazil) was evaporated and the aqueous residues were lyophilised.
Mean arterial pressure was recorded in the tail of nonanesthetized rats before (97 4 mm Hg; n = 18) and after 21 days of treatment (orally) with 40 mg/kg/day L-Name (156 4 mm Hg; n =6) or L-NAME plus 100 mg/kg/day of AZ or RW (110 2 and 113 3 mm Hg respectively, n = 6 per groups).
In rat MVB, precontracted with norepinephrine (6-30 M), AZ and RW induced a concentration-dependent vasodilator effect (ID50 = 5.3 0.5 and 102.3 5.4 g; n>10 for both groups, respectively) that was significantly (P<0.05) reduced by endothelial removal with deoxycholate (2.5 M; n=6). The vasodilator effects (%) of AZ (6 g) and RW (100 g) were 83±4% and 48±3% (control) and in vessels treated with L-NAME (0.3 M; 16±4, P<0.05 and 20±3, P<0.05), ODQ (1 M; 29±4, P<0.05 and 20±5, P<0.05), glybenclamide (64±5, P<0.05 and 49±5, P>0.05), high K+ solution (25 mM; 59±4, P<0.05 and 24±4, P<0.05), ChTx, (0.1 M) plus apamin (0.1 M 83±6, P>0.05 and 11±4, P<0.05), HOE (66±6 P<0.05 and 53±3, P>0.05), indomethacin (0.3 M; 56±7 P<0.05 and 52±4 P>0.05). The residual vasodilator effect of RW in vessels treated with L-NAME was completely abolished by addition of ChTx plus apamin. The vasodilator effects of AZ and RW were not changed by atropine, pyrilamine or yohimbine.
The present results demonstrated that both AZ and RW have a significant antihypertensive effect that my participate in the protective action against cardiovascular disease. Both compound induce an endothelium-dependent vasodilator effect that have different mechanism of action. The vasodilation induced by AZ is probably independent of activation of K Ca channels and mainly dependent on a NO-cGMP pathway. The vasodilator effect induced by RW is mainly dependent on an endothelium-derived hyperpolarizing factor (EDHF) in combination with a NO-cGMP pathway.



A problemàtica do desenvolvimento de um fitoteràpico: caso da Lippia alba (Miller) N.E.Brown ex. Britt. & Wills. (falsa-melissa) - Verbenaceae

Sonaglio D.1, Soares L.2, Zetola M.2, de Lima T.C.M.3 e Bassani V.L.4

1Pós-doutoranda na Université Montpellier I, UFR Sciences Pharmaceutiques, Faculté de Pharmacie, Montpellier, France. (Departamento de Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal de Santa Catariana, Campus Universitário, Florianópolis, SC, Brazil.)
2Universidade da Região de Joinville (UNIVILLE), Curso de Graduação em Farmácia, Campus Universitário, Joinville, SC, Brazil.
3Departamento de Farmacologia, Universidade Federal de Santa Catariana, Rua Ferreira Lima, Florianópolis, SC, Brazil.
4Faculdade de Farmácia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Ipiranga, Porto Alegre, RS, Brazil.

O número de espécies vegetais empregadas popularmente no Brasil com fins medicinais mantém certa proporcionalidade com a diversidade da flora do país, estimada em 120 mil espécies vegetais. Com a aplicação da resolução-RDC n° 17 de 2000 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, a definição de "medicamento fitoterápico" incorpora as propriedades de atividade terapêutica reprodutível e constante dos medicamentos sintéticos, além do conhecimento de sua efiácia e toxicidade. Assim, o desenvolvimento de soluções extrativas visando a elaboração de fitoterápico exige um estudo multidisciplinar que envolve o campo da botânica, da etnofarmacologia, da fitoquimica, da tecnologia e da farmacologia. Entretanto, atualmente, apenas uma ínfima quantidade de plantas, extratos, compostos ativos e/ou as preparações que as contêm, dispõe de dados sobre eficácia e segurança, sendo necessário estabelecer medidas de ajuste e padronização para garantia da qualidade. A espécie Lippia alba, popularmente conhecida como erva-cidreira, falsa-melissa, entre outros, é muito utilizada em todo o Brasil, sobretudo devido às propriedades sedativas relacionadas à presença de óleos voláteis. Alguns quimiotipos de L. alba identificados no norte do Brasil demonstraram atividades anticonvulsivantes, entre outras ações sobre o SNC. Entretanto, não foi possível classificar os sub-tipos utilisando somente a composição dos óleos voláteis, devido à grande diversidade deste tipo de "marcador". A preparação popular mais utilizada é a infusão de folhas em água quente, o que pressupõe que a fração não volátil também possui atividade sobre o SNC, como foi demonstrado num estudo preliminar com extratos hidroalcoólicos (Santos et al., 1998). Entretanto, não é possível assegurar a presença de óleos voláteis, tanto nas preparações por infusão, como no extrato hidroalcoólico. Num extensivo levantamento bibliografico sobre Lippia alba, buscou-se subsídios para orientar o estudo do desenvolvimento tecnológico de fitoterápicos à base de Lippia alba, além de uma abordagem da problemática da sinonímia, da difícil elucidação de compostos majoritários responsáveis pela ação farmacológica e das possibilidades e abrangência da atividade biológica. Foi realizado um estudo tecnológico de soluções extrativas (SE) hidroalcoólicas a 70%, 80% e 90% obtidas por maceração (SEM) e percolação (SEP). Os resultados confirmaram as observações de trabalhos anteriores, onde o teor de resíduo seco (RS) e de flavonóides totais (FT) apresentaram uma relação inversa. Realizou-se o fracionamento da solução extrativa SEM 80%, que apresentou atividade farmacológica promissora, objetivando a separação e caracterização das frações ativas. Através de monitoramento pela atividade anticonvulsivante, obtêve-se frações purificadas que foram caracterizadas por HPLC. O grupo de substâncias susceptível de servir de marcador químico (SBN4-C) é composto de uma mistura de 4 substâncias ainda não identificadas. Determinou-se a atividade antimicrobiana, antinociceptiva e anticonvulsivante de algumas preparações. Os resultados mais promissores na atividade antimicrobiana sobre S. aureus foram observados com a SEM 80% e suas frações acetato de etila e n-butanol. Duas soluções extrativa hidroalcoólica (SEM 40% e SEM 80%) foram testadas quanto à atividade antinociceptiva, sendo que a SEM40% foi a que mostrou melhor atividade. A atividade anticonvulsivante foi testada nos modelos da convulsão induzida por pentilenotetrazol (PTZ) e eletrochoque transcorneal máximo (ELC). As preparações analisadas foram as SEs, fração n-butanólica e subfrações desta (precipitado e sobrenadante) e subfrações do sobrenadante (SBN4-C e SBN4-D). Os melhores resultados foram verificados com o modelo PTZ, para todas as preparações testadas. Foram também desenvolvidos extratos secos nebulizados contendo a fração não volátil de folhas de Lippia alba, obtidos por percolação à partir de etanol a 80% (Zétola et al., 2002). Estes extratos mostraram importante atividade sedativa e miorelaxante e alto teor em flavonáides totais (66 mg/100g) expressos em apigenina. Foi demonstrado a viabilidade tecnológica dos extratos nebulizados a partir dos extratos concentrados, com a incorporação de excipientes tais como a silícia coloidal e a -ciclodextrina. Foi observado que o extrato nebulizado possui ação sobre o SNC semelhante àquela obtida pelo extrato original. Observou-se também a influência dos excipientes utilizados sobre as propriedades sedativas dos extratos secos.


Evaluación de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales extraídos de plantas medicinales de Argentina

Soria Y1, Oliva M.1, Sabini L.1, Zygadlo J.2 y Demo M.1

1Dpto Microbiol. e Inmunol. Fac de Cs. Ex. Fco-Qcas y Nat. UNRC. Córdoba, Argentina
2Cátedra de Qca Org. y Prod. Nat. Fac de Cs Ex, Fcas y Nat. UNC. Córdoba. Argentina

E-mail: mdemo@exa.unrc.edu.ar

Introducción:
La Argentina es un país que abarca zonas tropicales, templadas y frías en las que habitan diversas especies vegetales típicas de cada región, entre las cuales se encuentran plantas medicinales. Estas dependen de factores ecológicos, del suelo y del clima para su crecimiento, influyendo en el rendimiento y composición de los principios activos. Las especies medicinales poseen la capacidad de sintetizar compuestos aromáticos tales como aceites esenciales, los cuales estan constituídos por complejas mezclas de terpenos. Los aceites esenciales han demostrado tener propiedades benéficas para la salud humana y animal entre las cuales se encuentran: actividad antitumurogénica, citoprotección gástrica, actividad antioxidante y actividad antimicrobiana. El estudio de estas propiedades en los aceites contribuiría al conocimiento de sustancias con posibles fines terapéuticos, como conservantes de alimentos o como inhibitorios de patógenos de origén alimentario.

Objetivos:
Evaluar la actividad antibacteriana y antifúngica de diferentes aceites esenciales provenientes de la flora autóctona de Argentina..

Materiales y Métodos:
Los AE fueron obtenidos por hidrodestilación y sometidos a cromatografía gaseosa. La actividad antimicrobiana se realizo frente a bacterias Gram positiva: S. aureus ATCC, S.epidermidis, B. cereus, M. luteus ATCC, E. faecalis ATCC, Gram negativa: E. coli, Klebsiella sp, P.mirabilis, P. aeruginosa y los hongos unicelulares C. albicans, Rhodotorula sp., Hansenula sp. utilizando la técnica de difusión en disco. Se sembraron 200 l de cultivos microbianos (106 ufc/ml) en placas de Petri con agar Müller Hinton, para bacterias y agar Saboureaud, para hongos. Se adicionaron discos de papel de filtro embebidos con 10 l de cada una de las muestras a ensayar. Luego de 30 min. a temperatura ambiente, se incubó a 37ºC por 24 h. y se midieron los halos de inhibición. La CIM se realizó utilizando diluciones factor 2 en Dimetilsulfóxido (DMSO) de los aceites, embebiendo discos de papel de filtro con 10 l de cada dilución.

Resultados:
Se realizó el análisis de la actividad antimicrobiana de los AE de 25 especies vegetales, los cuales fueron activos en distinto grado contra bacterias Gram positiva y Gram negativa. Las bacterias Gram positivas demostraron ser más sensibles a la acción de los AE que las Gram negativas y levaduras. Las especies que presentaron mayor actividad contra los microorganismos pertenecen a las familias Asteraceae, Lamiaceae y Verbenaceae. Los AE que fueron activos contra todos los microorganismos incluso con P. aeruginosa fueron Lippia turbinata y Ch. ambrosoides.

Conclusiones:
Las cinco provincias argentinas muestreadas evidenciaron poseer especies vegetales cuyos AE podrían ser aplicados en el control de cepas microbianas implicadas en patologías de origen humano animal y contaminantes de alimentos.



Attivita' antiinfiammatoria di estratti di Sclerocarya birrea

Sosa S.1, Della R.1, Tubaro A.1, Braca A.2, Morelli I.2, Sanogo R.3 e Pizza C.4

1Dipartimento di Economia e Merceologia, Università di Trieste, Trieste, Italia
2Dipartimento di Chimica Bioorganica e Biofarmacia, Università di Pisa, Pisa, Italia
3Departement Medecine Traditionelle, INRSP, Bamako, Mali
4Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università di Salerno, Fisciano (SA), Italia

Sclerocarya birrea (A. Rich.) Hochst. (Anacardiaceae) è una specie arborea diffusa nell'Africa meridionale, dove è utilizzata nella medicina tradizionale per il trattamento di varie situazioni patologiche di origine infiammatoria e batterica, disturbi gastrointestinali, ipertensione ed iperglicemia. Studi farmacologici hanno confermato le proprietà antiinfiammatorie, antibatteriche ed ipoglicemizzanti della corteccia o delle foglie di S. birrea. Tuttavia, sebbene alcuni derivati fenolici delle foglie hanno rivelato un'azione antiossidante, non è stata dimostrata l'azione antiinfiammatoria di tali parti della pianta. Pertanto, seguendo la tecnica del frazionamento guidato dal saggio biologico, le foglie di S. birrea sono state sottoposte ad uno studio volto a verificarne l'attività antiinfiammatoria topica.
Mediante macerazione sequenziale delle foglie con solventi a polarità crescente (etere di petrolio, cloroformio, cloroformio-metanolo (9:1 v/v) e metanolo), sono stati ottenuti quattro estratti secchi di cui è stata valutata l'attività antiinfiammatoria topica al test di inibizione dell'edema da olio di Croton nel padiglione auricolare del topo. Alla dose di 300 µg/cm2, ciascun estratto ha indotto una significativa riduzione dell'edema, compresa tra il 32% (estratto cloroformio-metanolico) ed il 66% (estratto cloroformico). Come riferimento, il farmaco antiinfiammatorio non steroideo indometacina (100µg/cm2) ha ridotto l'edema del 56%. Mediante frazionamento su colonna di gel di silice, dall'estratto cloroformico, il più attivo, sono state separate nove frazioni (I-IX) che, alla dose di 50µg/cm2, sono state in grado di indurre un'inibizione dell'edema compresa tra il 25% ed il 41%. Le frazioni più attive (II, III e VIII) sono state ulteriormente separate su colonna RP-18, ottenendo undici subfrazioni che, alla dose di 50µg/cm2, hanno provocato una riduzione della risposta edematosa compresa tra il 44% ed il 55%. Attualmente è in corso lo studio fitochimico delle frazioni e subfrazioni più attive, volto ad individuare i principi antiinfiammatori delle foglie di Sclerocarya birrea.



Aceite esencial de Minthostachys verticillata: su acción sobre la replicación de virus Herpes Suis tipo 1 en células vero

Spesia M., Torres C., Sutil S., Vogt V., Zanon S., Demo M. y Sabini L.

Dpto. de Microbiología e Inmunología, Fac. Cs. Ex. Fco-Qcas y Naturales. UNRC. Córdoba, Argentina. E-mail: lsabini@exa.unrc.edu.ar

Investigaciones realizadas con aceites esenciales provenientes de variadas familias botánicas han revelado que inhiben la replicación de Herpes virus en diferentes estadíos. Es conocido que el aceites esenciales de M. verticillata presenta una marcada actividad antiviral frente al virus Herpes suis tipo 1, cepa RC/79 (6), desconociéndose en qué paso del ciclo de la replicación viral puede ejercer mayor actividad. Tal situación ha planteado el objetivo de este trabajo.
Previo a los ensayos de actividad antiviral, se determinó la Máxima Concentración No Citotóxica (MCNC) de aceites esenciales cuyo valor fue de 405,5 µg/ml. Para investigar si el mismo inhibe la adsorción viral, cultivos celulares fueron incubados a 37ºC por 3 h con MEM conteniendo el aceites esenciales a su MCNC. Descartado el medio, los cultivos celulares se infectaron con diluciones virales en MEM con aceites esenciales, y se incubaron 1 h a 4ºC. Posteriormente se mantuvieron en medio para placa, sin aceites esenciales. Los estudios de penetración se realizaron infectando cultivos celulares con diluciones virales e incubando por 1 h a 4ºC. Descartado el virus, los cultivos celulares fueron mantenidos en MEM más aceites esenciales a su MCNC durante 30 min a 37ºC. Cumplido este tiempo, se agregó buffer citrato (pH=3) durante 2 min a temperatura ambiente y se llevó a incubar con medio para placa sin aceites esenciales. Con el propósito de estudiar la inhibición del virus en estadíos posteriores a la penetración, cultivos celulares fueron infectados con virus (multiplicidad de infección =1) y luego de una incubación a 37ºC por 90 min fueron tratados con aceites esenciales contenido en medio para placa, a diferentes tiempos post-adsorción: 0, 1, 4 y 8 horas.
En todos los ensayos, las monocapas infectadas y tratadas a diferentes tiempos, al igual que los controles (citotoxicidad del AE, viabilidad celular e infectividad viral) fueron incubados durante 48 h a 37ºC. Luego, los cultivos celulares fueron fijados y teñidos, para determinar el título viral. El porcentaje de inhibición fue calculado por el cociente entre el título viral obtenido en el sistema control (no tratado) y en el cultivo tratado.

Tabla 1. Actividad antiviral del aceites esencial de M.verticillata frente a Herpes suis, en células Vero.

Tratamiento
% Inhibición
Adsorción
3,75
Penetración
35,00
0 hora p.a.*
89,41
1 hora p.a.
99,10
4 horas p.a.
99,53
8 horas p.a.
98,98

*p.a.: post-adsorción viral.

Los resultados revelaron que el aceites esencial no ejerce acción inhibitoria importante en la etapa inicial de la multiplicación viral: adsorción y penetración. Por el contrario, la muestra oleosa, incorporada a distintos tiempos post-adsorción (p.a.), presentó una fuerte actividad antiviral, particularmente cuando el aceite esencial fue agregado a la hora y más aún a las 4 h p.a. El tratamiento a las 0 h p.a. indicaría que la célula en ese momento estaría involucrada en el proceso de desnudamiento de la partícula viral, por lo que la internacionalización del aceite esencial podría verse dificultada. Los resultados de los tratamientos a tiempos posteriores permiten inferir que la acción inhibitoria sobre el virus Herpes suis se manifiesta a nivel de las síntesis del ARNm temprano retardado o de las proteínas que se traducen a partir de él, comprometiendo de este modo la replicación del genoma viral.


Evaluación de la citotoxicidad sobre células eucariotas de componentes mayoritarios del aceite esencial de Minthostachys verticillata

Sutil S., Vogt V., Zanon S., Torres C., Escobar F., Elstein R., Demo M. y Sabini L.

Dpto. de Microbiología e Inmunología, Fac. de Cs. Ex.Fco-Qcas y Nat. UNRC. Córdoba, Argentina. E-mail: lsabini@exa.unrc.edu.ar

Minthostachys verticillata (familia Lamiaceae), típica de las Sierras de Córdoba (Argentina) ha demostrado ejercer una marcada actividad antiviral contra el virus Herpes suis tipo 1, resultando de interés analizar la composición química de su aceite esencial en forma cuali y cuantitativa para realizar estudios de citotoxicidad de los componentes en forma individual y combinada de acuerdo a las proporciones halladas en el vegetal, condición necesaria para análisis posteriores de actividad antiviral de los mismos. Hojas y talluelos de la especie vegetal fueron preparados adecuadamente para la extracción de su aceite esencial por hidrodestilación, lo que arrojó un rendimiento del 5% (volumen / peso seco). El análisis de cromatografía gaseosa permitió la identificación cuali y cuantitativa de sus principales componentes por comparación con los tiempos de retención de las drogas patrones. De los 6 componentes identificados, pulegona, mentona y limoneno representaron los componentes mayoritarios (Tabla 1). Los estudios de toxicidad en células Vero se realizaron incubando monocapas celulares con distintas concentraciones del aceite esencial y los componentes principales (solos o combinados) adquiridos comercialmente. La Máxima Concentración No Citotóxica (MCNC) fue determinada como la máxima concentración del compuesto que no produjo alteraciones visibles en el sustrato celular. El aceite esencial fue el menos tóxico, seguido por mentona, limoneno y pulegona (Tabla 2). Para analizar la posible acción sinérgica o antagónica en la toxicidad de los componentes en la mezcla se consideró la toxicidad de los mismos en forma pura y a partir de estos valores se calculó el índice de citotoxicidad (Tabla 3). Cuando este índice es menor a 1, se asume que el componente en forma combinada es menos tóxico que el mismo en forma pura, evidenciando antagonismo (pulegona combinada con mentona). Índices mayores a 1 indican sinergismo entre los componentes. A partir de estos resultados se puede concluir que los componentes identificados y estudiados en su citotoxicidad resultaron ser más tóxicos individualmente, lo que permite inferir que los constituyentes del aceite esencial, presentes en menores proporciones presentan una fuerte acción antagónica que confiere al aceite esencial una menor toxicidad en las condiciones experimentalmente ensayadas.

Tabla 1. Porcentaje de los componentes identificados en el aceite esencial de M. Verticillata

Compuesto
Porcentaje (%)
Limoneno (L)
187
Cineol
0,05
Mentona (M)
16,40
Pulegona (P)
62,97
Total
81,72

Tabla 2. MCNC del aceite esencial de M. Verticillata y de sus componentes mayoritarios solos y combinados

Muestra
MCNC ( µg/ml)
AE
700
P
60
M
400
L
250
P-M (3,84:1)
100 / 24,4
P-L (33,67:1)
25 / 0,7
M-L (8,77:1)
250 / 26,7
P-M-L (33,67:8,77:1)
50 / 12,2 / 1,3

Tabla 3. Índice de toxicidad de los compuestos presentes en las mezclas, respecto a cada uno en forma pura

Componentes de la mezcla
MCNC ( µg/ml)
Índice de toxicidad para cada componente de la mezcla*
P-M
100/24,4
0,6 pulegona
16,39 mentona
P- L
25/0,7
2,4 pulegona
357,1 imoneno
M-L
250/26,7
1,6 mentona
9,36 limoneno
P- M - L
50/12,2/1,3
1,2 pulegona
32,78 mentona
192,3 limoneno

* Índice de toxicidad: MCNC del compuesto puro / MCNC del compuesto en la mezcla.


Interacciones antagónicas entre componentes del aceite esencial de Minthostachys verticillata sobre su actividad antiviral

Sutil S., Vogt V., Torres C., Spesia M., Zanon S., Demo M. y Sabini L.

Dpto. de Microbiología e Inmunología, Fac. de Cs. Ex.Fco-Qcas y Nat. UNRC. Córdoba, Argentina
E-mail: lsabini@exa.unrc.edu.ar

La especie Minthostachys verticillata pertenece a la familia Lamiaceae, la que comprende varias especies aromáticas. En América se extiende desde Venezuela hasta Argentina. En la provincia de Córdoba (Argentina) es vulgarmente conocida como "peperina", y sus usos incluyen desde infusiones teiformes hasta licores. Se toma para indigestiones, dolores de vientre, diarrea, vómitos y se le atribuyen propiedades estimulantes, digestivas, carminativas, antiespasmódicas y antirreumáticas. Su aceite esencial constituye una fuente comercial importante en Argentina. Resultados alentadores sobre la actividad antiherpética, obtenidos por nuestro grupo de investigación, incentivaron el análisis de la composición química del aceite esencial de esta especie para dilucidar el o los agentes responsables de tal actividad.
Partes aéreas del vegetal, recolectado en la serranías de Santa Rosa de Calamuchita (Córdoba), fueron sometidos a hidrodestilación para extraer su aceite esencial . La cromatografía gaseosa permitió identificar los componentes mayoritarios por comparación con los tiempos de retención de las drogas patrones. Para el estudio de actividad antiviral se emplearon el aceite esencial y los componentes mayoritarios a su Máxima Concentración No Citotóxica (MCNC), en forma individual y combinados, considerando las proporciones presentes en el vegetal. Dicha actividad fue realizada en el sistema células Vero-virus Herpes suis tipo 1 cepa RC/79, incorporando la muestra oleosa luego de la adsorción y penetración del virus. La inhibición viral fue cuantificada a través de la reducción del número de placas de lisis en el sistema tratado versus control.
La cromatografía gaseosa permitió identificar como componentes mayoritarios pulegona, mentona y limoneno con porcentajes de 62,97; 16,40 y 1,87 respectivamente.La Tabla 1 muestra los resultados de actividad antiherpética expresada en porcentaje de inhibición viral y la reducción del tamaño de placa de lisis luego del tratamiento con la muestra vegetal.

Tabla 1. Actividad antiviral del aceite esencial de M. verticillata y de sus componentes mayoritarios solos y combinados a su MCNC frente al virus Herpes suis tipo 1, cepa RC/79 en células Vero.

Muestra (a su MCNC)
Porcentaje de inhibición viral (*)
Reducción del tamaño de placa
Aceite esencial
94,40
+
Pulegona
99,26
++
Mentona
99,75
++
Limoneno
96,45
+
Pulegona- mentona
98,60
++
Pulegona- limoneno
93,92
+
Mentona- limoneno
84,30
+++
Pulegona- mentona- limoneno
71,51
+

*Porcentaje de inhibición viral = 100- (título de virus tratado/ título de virus control) x 100
+ Reducción leve del tamaño de las placas
++Gran reducción del tamaño de las placas
+++Máxima reducción del tamaño de las placas.

Todos las muestras ensayadas ejercieron inhibición de la producción viral, reflejada por una disminución del título viral, destacándose pulegona y mentona en forma individual o combinados entre si. La disminución del tamaño de las placas, también observado, podría deberse a que las muestras interferirían en la diseminación del virus de una célula a otra. Los resultados obtenidos permiten inferir que los componentes mayoritarios pulegona y mentona podrían ser los responsables de la capacidad antiherpética del aceite esencial. Esta capacidad estaría afectada al interaccionar antagónicamente los tres componentes, pulegona, mentona y limoneno, obteniéndose el valor mas bajo de inhibición. Como estos 3 componentes forman parte del aceite esencial se infiere que otros componentes minoritarios estarían en la muestra oleosa total, ejerciendo una acción sinérgica que se evidencia por una marcada acción antiviral.



Assorbimento del cromo da parte di vegetali: potenziali depuratori biologici

Tirillini B.1, Ricci A.1, Pintore G.2 e Chessa M.2

1Istituto di Botanica- Università di Urbino, Via Bramante - Urbino - Italy
2Dipartimento Farmaco Chimico Tossicologico-Università di Sassari, Via Muroni, Sassari-Italy

Il cromo è uno dei metalli pesanti responsabile di gravi inquinamenti sia di corsi d'acqua che di falde acquifere, specialmente quando siano presenti sul territorio miniere, industrie conciarie, tintorie tessili, galvaniche, chimiche e della preservazione del legno (Dakiky, M. e al. Adv. Environ. Res. (2002) 533-540). Il cromo è presente in due stati di ossidazione (III) e (VI) ed entrambi sono assorbite dalle piante. In generale si è visto che il Cr(VI) è più tossico del Cr(III) forse per la sua maggiore solubilità in acqua (Neiboer, F. and Richardson, D.H.S. Environ. Pollut. Ser. (1980) B1, 3-26). Il cromo interferisce con diversi processi metabolici producendo una riduzione nella crescita delle radici e della biomassa in generale, produce inoltre clorosi e riduzione nella resa fotosintetica. Parte del cromo viene detossificato per mezzo della formazione di complessi con fitochelatine . Le piante in generale accumulano cromo nelle radici, ma, in seguito, la presenza di cromo è rivelabile in tutta la pianta, anche nelle parti più lontane dalle radici.
Mentha aquatica L., Myriophyllum verticillatum L. e Nasturtium officinale R. Br. sono state immerse in soluzioni contenente 10-2 M di Cr(VI). Le piante sono sopravvissute in media 20 giorni adsorbendo quantità notevoli di cromo (fino al 6 % s.s. come nel caso dei fusti di Myriophyllum verticillatum).
A concentrazioni inferiori di cromo Myriophyllum verticillatum e Medicago sativa, Agropyrum repens, Oxalis purpurata e Trifolium repens hanno dimostrato una buona capacità di adattamento per lunghi periodi di tempo.Le piante studiate possono essere vantaggiosamente prese in considerazione come potenziali depuratori biologici per il cromo.



Estudio de la actividad antiviral in vitro de extractos de origen vegetal frente al virus Herpes simple tipo I

Torres M.G.1, Echemendía O.A.1, Monteagudo R.1, Bolaños G.1, González J.A.2 y Prieto S.2

1Instituto Finlay. Centro de Investigación-Desarrollo-Producción de Vacunas. La Habana. Cuba.
2Centro de Química Farmacéutica (CQF), La Habana, Cuba.

Introducción:
Las propiedades etnomédicas de las plantas cubanas han propiciado un impulso importante para satisfacer la necesidad y estimular la conveniencia de utilizar y transformar, de manera sustentable, nuestro potencial vegetal. En este estudio nos propusimos evaluar la actividad antiviral de varios extractos vegetales derivados de especies de plantas del género Erythroxilum, frente al virus herpes simple tipo 1, mediante la determinación de la concentración citotóxica media, concentración efectiva media e índice selectivo de cada uno de los posibles candidatos.

Materiales y Métodos:
Los extractos vegetales fueron suministrados por el Centro de Química Farmacéutica, La Habana, Cuba. Se utilizaron células de riñón de mono verde africano (VERO) entre los pases 140 y 145, crecidas en medio 199 suplementado con 10 % de suero bovino fetal inactivado (SFBI). Se utilizaron dos cepas de virus herpes simple tipo 1 (VHS-1): una de referencia y una proveniente de un aislamiento realizado en el Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, La Habana, Cuba; la cual resultó resistente al Aciclovir. El título viral fue determinado por el método de Reed y Muench, y sobre la base de éste se determinaron las 100 dosis infecciosas en cultivo de células (DICC50), utilizadas en la evaluación antiviral. Para determinar la concentración citotóxica media (CC50) se utilizaron células VERO sembradas en placas de 96 pozos a las que se le añadieron diferentes concentraciones de los extractos, las placas fueron incubadas a 370C en atmósfera de CO2 al 5% por 3 días. Para determinar la concentración efectiva media (CE50) antiviral se añadieron las diferentes concentraciones de los extractos a las placas sembradas de células y se incubaron durante 1 hora, posteriormente se añadieron las 100 DICC del virus, y para la CE50 virucida se mezclaron las diferentes concentraciones de los extractos y las 100 DICC del virus por una hora y después se añadieron a las placas sembradas de células. Las placas se incubaron en las mismas condiciones descritas anteriormente. Todos los ensayos se realizaron utilizando el método del MTT y se montaron por triplicado. Posteriormente se determió el índice selectivo que se deriva de la relación CC50/CE50.

Resultados:
Primero se determinó el efecto tóxico de cada extracto en las células VERO, donde los extractos provenientes de las especies Erythroxilum suave (infusión), Erythroxilum areolatum, Erythroxilum minutifolium, Erytrhoxilum armatum no mostraron toxicidad hasta una concentración de 4 mg/mL, mientras los extractos provenientes de las especies Erythroxilum suave (hidroalcohólico), Erythroxilum confusum, Erytrhoxilum longipes mostraron valores de toxicidad de 650±5,78 µg/mL, 480±8.99 µg/mL y 540±6.33 µg/mL, respectivamente. Todos los extractos protegieron frente a la cepa de referencia del VHS-1 mostrando índices selectivos entre 38.21 y 668.89, y solo los extractos provenientes de las especies Erythroxilum areolatum, Erythroxilum minutifolium, Erytrhoxilum armatum y Erytrhoxilum longipes protegieron contra la cepa resistente al Aciclovir del VHS-1 con índices selectivos entre 11.28 y 37.04. A su vez, todos los extractos fueron capaces de inactivar la cepa de referencia del VHS-1 y ninguno de ellos mostró actividad virucida frente a la cepa de aislamiento resistente a Aciclovir del VHS-1.



Antioxidant, insecticidal and insect growth regulatory activities of Roldana Barba-Johannis against fall army worm Spodoptera frugiperda

Torres P., Marín J.C., Pérez A.L., Arciniegas A., Romo A., Aranda E. and Céspedes C.L.

Chemical Ecology Lab. Chemistry Institute, UNAM, Coyoacan 04510, Mexico DF, Mexico. E-mail: ccespede@servidor.unam.mx
http://www.iquimica.unam.mx/cespedes.html

The methanol extract from aerial parts of Roldana barba johannis afforded Sargachromenol 1, sargachydorquinoic acid 4, and Sargaquinoic acid 7. These natural products and their acetylated derivatives showed insecticidal and insect growth regulatory activity against Fall armyworm (Spodoptera frugiperda) an insect pest of corn. The most active compounds were 1, 3, 4, 6 and a mixture of 1+4+7 and its acetylated form, which had significant effects between 5.0 and 20.0 ppm in diets. Almost all compounds were insecticidal with lethal doses between 20-35 ppm. In addition, these compounds also demonstrated scavenging properties toward 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) in TLC autographic and spectrophotometric assay. Our results indicate that these compounds appear to have selective effects on the pre-emergence metabolism of the insect. The results were fully comparable to known natural insect growth inhibitors such as gedunin and Cedrela extracts and have had a possible role as natural insecticidal agents.



Insecticidal and growth regulatory activities of essential oil from chilean natives Magnoliidae

Torres P., Marín J.C., Becerra J., Aranda E. and Céspedes C.L.

Chemical Ecology Lab. Chemistry Institute, UNAM, Coyoacan 04510, México DF, México
http://www.iquimica.unam.mx/cespedes.html

Was studied the secondary metabolites that occur in essential oils of five species of Magnoliidae: Drimys winteri J. R. Et G. Forster (canelo), Laurelia sempervirens (R. et P.) Tul. (laurel), Laureliopsis philippiana Looser (tepa), Persea lingue (R. et P.) Nees ex Kopp (lingue), y Gomortega keule (Mol.) Baillon (queule)- that belongs to the most primitive families of angiospermae that are growing in the rain-forest slope of Southern Chile and Argentina: Winteraceae, Lauraceae, Monimiaceae and Gomortegaceae. It was evaluated the insecticidal activity of these compounds on Fall Army worm (Spodoptera frugiperda) a common insect pest in corn crops of South America and North America. Almost all essential oils were insecticidal with lethal doses between 20-50 ppm. In addition, these essential oils also demonstrated scavenging properties toward 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) in TLC autographic and spectrophotometric assay. Our results indicate that essential oils from D. winteri and G. keule showed the stronger insecticidal effect than oils from Laurelia sempervirens, Laureliopsis philippiana, P. lingue, these essential oils appear to have selective effects on the pre-emergence metabolism of the insect. The results were fully comparable to known natural insect growth inhibitors such as toosendanin, gedunin and Cedrela extracts and have had a possible role as natural insecticidal agents.


Determinación de la actividad antifúngica de decocciones de Minthostachys verticillata frente a hongos dermatofitos

Torres C.1, Elstein M., Sutil S., Zanon S., Demo M., Dalcero A.y Sabini L.

Dpto. Microbiología e Inmunología, Universidad Nacional de Río Cuarto, Córdoba, Argentina.

Introducción:
En los últimos años ha tomado mayor importancia el estudio de las plantas medicinales como fuente de fitofarmacos. En las serranías del sur de Córdoba, Argentina se encuentra en abundancia una de las plantas medicinales autóctonas: Minthostachys verticillata, vulgarmente conocida como peperina, utilizada popularmente por sus propiedades digestivas, antidiarreicas entre otras, habiéndose demostrado además, su actividad antimicrobiana "in vitro" frente a bacterias, virus y hongos unicelulares.El propósito de este trabajo fue evaluar la capacidad de decocciones de dicha planta para inhibir el desarrollo de hongos filamentosos aislados de casos clínicos humanos.

Resultado:
Se obtuvieron decocciones de Minthostachys verticillata: (A y B), según la técnica de Mongelli y col (1995), con concentraciones iniciales de 2,14 mg/ml y 34,36 mg/ml respectivamente. Se evaluó la capacidad citotóxica de cada decocción sobre monocapas de células Vero. El valor de la Máxima Concentración No Citotóxica (MCNC) fue igual para A y B, determinado en 2,45 mg/ml. Para evaluar "in vitro" la actividad antifúngica de las fracciones vegetales se emplearon 5 especies de hongos dermatofitos (Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Microsporum canis, Microsporum gypseum, Mircosporum nanum), repicadas en Agar Sabouraud Glucosado (ASG). La técnica desarrollada, taco fúngico, implicó el empleo de 4 ml de cada decocción mezclados con 16 ml de ASG fundido a 40ºC, los que fueron vertidos en placas de petri de 9 cm de diámetro. En el centro de cada placa se incorporó un taco fúngico de 4 mm de lado, obtenido de los cultivos previos de las especies mencionadas. Posterior a una incubación a 28ºC, se determinó el diámetro del desarrollo fúngico a los 3, 7, 10 y 15 días post-siembra. Como controles positivos se usaron antifúngicos convencionales: Anfotericina B y Nistatina (20µg/ml), y como control negativo medio ASG. Las pruebas se realizaron por triplicado. Los resultados indicaron que T. mentagrophytes resultó resistente a ambas decocciones, e incluso en su curva de crecimiento los valores estuvieron mas aumentados que el control negativo con ambas decocciones, indicando que los compuestos químicos de las fracciones vegetales pueden ser fuente de nutrientes ya que contrariamente a lo esperado, promovieron su desarrollo. Respecto de las especies M. gypseum, M.nanum y T. rubrum fueron inhibidas por ambas decocciones, sin embargo la de mayor concentración (34,36mg/ml) fue la mas eficaz, superando la capacidad inhibitoria de Nistatina. Frente a M. nanum se observó que la decocción de concentración 2,14 mg/ml fue tan efectiva como la Nistatina. Con M. canis la decocción 34,36mg/ml inhibió levemente el desarrollo fúngico a partir de los 10 días.

Conclusiones:
Se concluye que la decocción de M. verticillata inhibe el desarrollo de M. gypseum, M.nanum y T. rubrum a ambas concentraciones ensayadas, y que la concentración de 2,14 mg/ml está por debajo de la MCNC determinada para la fracción vegetal, por lo que podría ser utilizada sobre células eucariotas como tópico en casos de micosis a dermatofitos.



Actividad antimicrobiana y antiviral de especies autoctonas de la flora Argentina

Tuttolomondo M.V.1, Massa R.2, Bendersky D.4,Cruañes M.C.4, Cruañes M.J.4, Muñoz J.de Dios5, Ferraro G.3, Martino V.3, Gutkind G.1, Cavallaro L.2 y Vivot E.4

1Cátedras de Virología
2Cátedra de Microbiologia
3Cátedra de Farmacognosia. Facultad de Farmacia y Bioquímica-UBA.
4Facultad de Ciencias Agropecuarias-UNER, Oro Verde, Entre Ríos, Argentina.
5Cátedras de Botánica Sistemática

La flora de la Provincia de Entre Ríos (Argentina) atesora numerosas especies con antecedentes etnobotánicos que requieren estudios de validación científica. En las costas de los ríos se destacan Tessaria integrifolia Ruíz & Pavón var. integrifolia, cuyos tallos tiernos y hojas son estimados por sus efectos antigonorreico, cicatrizante y resolutivo, como asimismo Myrsine laetevirens (Mez.) Arechav, cuyas hojas machacadas se aplican en uso externo para tratar enrojecimientos y ulceraciones de la piel. La infusión o decocción de la planta completa de Acanthospermum australe D C. es usada para lavar heridas ulcerosas; en cataplasmas se aplica para curar el pie enfermo de los animales con aftosa, y asimismo, la decocción es útil en lavados vaginales contra gonorrea y leucorrea; en Brasil, la decocción se bebe contra la malaria. La decocción de la planta completa o de la raíz de Arctium minus (Hill.) Bernh. es bebida por su efecto depurativo; control de infecciones bacterianas, enfermedades cutáneas, eczemas, psoriasis, forúnculos y llagas. En este trabajo se presentan los resultados de la investigación de las actividades antimicrobiana y antiviral realizada sobre los extractos de las especies mencionadas. Los extractos diclorometánico, metanólico, etanólico al 70% y acuoso de estas especies fueron ensayados por difusión en medio sólido contra los microorganismos Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans y Aspergillus niger. El extracto diclorometánico de T. integrifolia fue activo contra S. aureus, y el diclorometánico de A. australe contra B. subtilis y S. aureus. Los extractos EtOH de Arctium minus y A. australe fueron activos contra B. subtilis y S. aureus. Los mismos extractos fueron evaluados para la detección de actividad antiviral mediante reducción del efecto citopático y del número de placas virales, sobre Herpes simplex tipo 1 (HSV-1), Herpes simplex tipo 2 (HSV-2) y Poliovirus tipo 1 (PV-1) en células Vero. El extracto metanólico de T. integrifolia fue activo contra HSV-1 con MCNC=400 g/ml y CE50=84.8 g/ml y los extractos diclorometánico, metanólico y etanólico fueron activos contra PV-1 con valores de CE50 de 7.5 g/ml, 55.3 g/ml y 45.5 g/ml, respectivamente. Las MCNC para los extractos diclorometano y etanólico en este caso fueron de 100 g/mL y 500 g/mL respectivamente. Los extractos de A. minus no presentaron actividad antiviral. Todos los extractos de A. australe y M. laetevirens demostraron ser muy citotóxicos (MCNC entre 25 y 62.5 g/ml), lo que no justificó la evaluación de su actividad antiviral. Los resultados obtenidos orientan a iniciar el fraccionamiento bioguiado de T. integrifolia para identificar el/los principios activos responsables de la actividad biológica detectada, antibacteriana y antiviral.



Metaboliti bioattivi da Securinega virosa

Vassallo A.1, Sanogo R.1, Cioffi G.1, Dal Piaz F.1, De Simone F.1, Vanella A.2, Russo A.2 y De Tommasi N.1

1Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università degli Studi di Salerno, Italia. E-mail: avassallo@unisa.it
2Dipartimento di Chimica Biologica, Chimica Medica e Biologia Molecolare, Università degli Studi di Catania, Italia.

Nella nostra ricerca in corso su nuovi metaboliti bioattivi da piante Euphorbiaceae che crescono nei territori del Malì e al confine Sahelo-Sudaniano, abbiamo studiato le parti aeree di Securinega virosa (Roxb. ex Willd.).Il presente lavoro è volto allo studio bio-assay oriented della Securinega virosa.
Le parti aeree della pianta sono state sottoposte ad estrazione con solventi a polarità crescente (esano, cloroformio, cloroformio-metanolo, metanolo). In un primo screening per l'attività antiossidante, misurata attraverso la capacità di spegnere il radicale stabile 1,1-difenil-2-picril idrazile, DPPH, l'estratto metanolico mostrava un'interessante attività. L'isolamento dei principali metaboliti secondari presenti in questo estratto è stato ottenuto, attraverso l'impiego di diverse tecniche cromatografiche (CC, Sephadex LH-20, MPLC, HPLC), la caratterizzazione strutturale mediante tecniche spettroscopiche (1D e 2D-NMR, MS, UV). Tutte le frazioni ottenute esibivano interessanti proprietà antiossidanti, espresse dalla capacità di agire da "free radical scavenging" nei confronti del radicale DPPH e dell'anione superossido, ma due frazioni in particolare manifestavano un'attività SOD-like superiore. Questi risultati sono stati confermati dall'effetto protettivo sul clivaggio del DNA plamidico, pBR322, indotto dalla UV-fotolisi dell'acqua ossigenata. Utilizzando questo approccio sono stati isolati dalle parti aeree della pianta rutina, 3-OMe-rutina, bergenina, canferolo, e alcuni tannini tra i quali un nuovo composto naturale. I composti polifenolici sono di particolare interesse per la capacità di modulare la produzione delle specie radicaliche dell'ossigeno (ROS) che sono coinvolti nella genesi di diverse patologie come le malattie neurodegenerative, l'ischemia, il diabete, il cancro e le patologie infiammatorie. I risultati ottenuti, pertanto, suggeriscono che l'attività antiossidante esplicata dai metaboliti secondari presenti nella Securinega virosa potrebbe spiegare, in parte, l'uso di questa pianta nella medicina tradizionale maliana.

 

Evaluation of residual levels of organochlorine pesticide in Chickpeas samples from México

Veneziano A., Gallo L., De Simone F. and Rastrelli L.

Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, Università di Salerno, Via Ponte Don Melillo, Salerno, Italy.

Chickpea (Cicer arietinum L.) is the fifth most widely grown legume in the worl and is the most widely consumed legume in Spain and Italy. Chickpea crops improve the physical and biological properties of the soil. This legume also fixes atmospheric nitrogen and thus requires less chemical fertilization, a characteristic with obvious ecological advantages.
In addition to being an important source of protein, chickpea is also reported to be a good source of minerals. This legume supplies larger amounts of calcium and phosphorus than other legumes and contains more calcium than whole cow's milk (120 mg/100 g). The amount of phosphorus in chickpeas approaches that found in the major sources of this element in the Mediterranean diet.
Because chemical contaminations in food constitute a significant health risk and legumes have a high consumption rate, the continuous control of pesticide residues in imported chickpea samples are of great importance.
In this study, carried out during the years 2002-2003, the occurrence of 17 organochlorine pesticides was investigated in fifty samples of chickpeas imported in Italy from Mexico through Maritime Authority of Salerno Custom Port (Italian Department of Health). In 9 samples, 5 organochlorine pesticides, namely DDT, Endosulfan, Endrin, Eptachlor and Fenarimol were found in concentrations ranging from 0.070 to 6.140 mg/kg. Captafol, Chlorothalonil, Cipermetrina, DDD pp', DDE op', DDE pp', Deltametrina, Fenvalerate, Imazalil, Iprodione, Permetrina, Propiconazolo were not detected in any sample. The analysis were carried out by capillary GC using a Thermoquest model Trace GC 2000, with Electron Capture Detector (ECD), after sample extraction with dichlorometane and clean-up by an Extrelut-20 column. The positive sampleswere confirmed by GC-MS. Recoveries of 17 pesticides at three fortification levels (0.1, 0.5 and 1.0 mg/Kg) were in the range 85-103 %.



Lignans from Phenax mexicanus Wedd. (Urticaceae) and studies on their antiinflammatory activity using the transcription factor nf-nb as molecular target

Castro V.1, Murillo R.1, Villagra E.J.1, Lindenmeier M.2, Poveda L.3 y Merfort I.2

1Escuela de Química y CIPRONA, Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica
2Institute of Pharm. Science, Department of Pharm. Biology, Albert-Ludwigs-Universität Freiburg, Germany.
3Universidad Nacional. Escuela de Ciencias Ambientales, Heredia, Costa Rica

From the aerial parts of a sample of Phenax mexicanus Wedd. (Urticaceae) collected in Rancho Redondo, Costa Rica, we isolated nine matairesinol-derivative lignans, one of them, 2 (4'-O-methyl-3'-O-demethyl-Epitrachelogenin), has not been reported in the literature up to now . Most of them were previously extracted and identified from Phenax angustifolius. The structures were elucidated by using 1D and 2D NMR spectroscopy as well as mass spectrometry. The compounds 8 and 9 needed previous acetylation to be separated with RP-18-HPLC.
In folk medicine, anti-inflammatory activity was reported for P. mexicanus. For this reason, the compounds 1, 5, 8 and 9 were tested whether they influence the transcription factor NF-?B. Only a slight inhibition was detected in the NF-NB ELISA with 8 at 200 NM. A luciferase reporter gene assay (293-cells) was carried out to study the NF-NB dependent gene expression. Again, 8 showed the highest activity (80 % inhibition at 50 NM), whereas the other three compounds were only moderately active. No cytotoxic activity and no direct influence on luciferase was detected.



Lignans from Phenax mexicanus Wedd. (Urticaceae) and their activity with different molecular targets

Castro V.1, Murillo R.1, Villagra E.J.1, Merfort I.2, Lindenmeier M.2. and Poveda L.3

1Escuela de Química y CIPRONA, Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.
2Institute of Pharmaceutical Biology, Albert-Ludwigs-Universität Freiburg, Germany.
3Universidad Nacional. Escuela de Ciencias Ambientales, Heredia, Costa Rica.

From the aerial parts of a sample of Phenax mexicanus Wedd. (Urticaceae) collected in Rancho Redondo, Costa Rica, we isolated nine matairesinol-derivates lignans, one of them, 2 (4'-O-methyl-3'-O-demethyl-Epitrachelogenin), had not been reported in the literature . Most of them were previously extracted and identified from Phenax angustifolius . The structures were elucidated by using 1D and 2D NMR spectroscopy as well as mass spectrometry. The compounds 8 and 9 needed previous acetylation to be separated with RP-18-HPLC.
In folk medicine, anti-inflamatory activity was reported for P. mexicanus. For this reason, the different compounds were tested with several molecular targets to find a specific activity. No binding was detected with the transcription factor NF-NB by 200 MM, however a luciferase-assay (NLZ9-Cells) was carried out (from NF-NB Gene-expression dependent process). Four compounds inhibited the Gene-expression, and 8 (acetylated) showed the highest inhibition, 80% Inhibition by 50 NM. No cytotoxic activity and no luciferase (pure form) inhibition were detected.

 

Aplicación de la RMN de alta resolución en la caracterización estructural de dos labdános del Oxylobus glanduliferus

Villalobos D., Amaro J.M.y Bahsas A.

Laboratorios de Productos Naturales y de RMN. Facultad de Ciencias. Universidad de Los Andes. Mérida. Venezuela.
E-mail: jamaro@ula.ve

Los labdanos conforman un amplio grupo de productos naturales incluidos en los diterpenos bicíclicos, los cuales se caracterizan por presentar un sistema trans-decalínico 4,4,10-trisustituido, con una cadena lateral en C-9 (CONOLLY & HILL, 1991). Paralelamente al aislamiento y determinación estructural de este tipo de diterpenos se han desarrollado numerosas investigaciones orientadas a determinar la actividad biológica y/o farmacológica que dichos productos pudieran exhibir (SINGH ET AL., 1999). El género Oxylobus (familia Asteraceae) representa una fuente natural importante de este tipo de diterpeno; solo una de la seis especies de este género descritas, el O. glanduliferus A. Gray, se encuentra distribuida en las regiones andinas de Venezuela (TURNER & KERR, 1985). En el contexto de una línea de investigación centrada la aplicaciones de la RMN en la caracterización estructural de metabolitos secundarios, en el presente trabajo damos cuenta del aislamiento e identificación, mediante técnicas de RMN, de dos diterpenos de la serie del labdano, los cuales se encuentran presentes de manera particularmente abundante en el exudado resinoso del O. glanduliferus. Las hojas y ramas esta planta se secaron a la temperatura ambiente y a la sombra durante dos semanas, y luego se extrajeron, sumergiéndolas durante cinco minutos en CH2Cl2 a temperatura ambiente. La disolución obtenida fue filtrada y posteriormente concentrada al vacío para dar un extracto, el cual fue preadsorbido en gel de sílice y luego cromatografiado en columna al vació, utilizando este mismo adsorbente. Las fracciones obtenidas, una vez analizadas por TLC, fueron sometidas a procesos de fraccionamiento y separación utilizando diversas técnicas cromatográficas. De esta manera se lograron aislar dos diterpenos, los cuales fueron caracterizados, sobre la base de métodos espectroscópicos convencionales (IR, UV, EM, RMN-1H y RMN-13C) y técnicas bidimensionales de RMN (1H, 1H-COSY, HMQC y HMBC). Se prepararon varios derivados de estos diterpenos, los cuales también se identificaron por métodos espectrales.



Effect on passive cutaneous anaphylaxis, bronchial spasm and tonicity of aqueous extract of Boerhavia erecta L

Nuñez Y., Tillán J., Carrillo C., Vega Y., Guerra M., Rivero R. y Garrigó E.

Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos, CIDEM. La Habana. Cuba. E- mail: cidem@infomed.sld.cu

We study the anti-allergy properties conferred to Boerhavia erecta L over the anaphylactic mediators and H1 receptors at bronchial level, so we carry out the tests of passive cutaneous anaphylaxis in rats. Bronchial spasm and tonicity, and contractility of intestinal flat musculature were evaluated in guinea pigs. As result we can affirm that the extract watery of Boerhavia erecta L inhibit the passive cutaneous anaphylaxis and the bronchial spasm induced by histamine. We could also appreciate to the dose of 100 mg/Kg of Boerhavia erecta L after intravenous administration the contraction increases in 46% caused by histamine 15 g/Kg and to superior concentrations to 1 mg/ml causes contraction of the intestinal flat musculature.
Besides, the antihistaminic and anticholinergic activity of aqueous extract of Boerhavia erecta L were investigated on isolated guinea-pig ileum, and dose response curves of histamine and acetylcholine with and without extract were plotted. Atropine and diphenhidramine were used for comparison. We induced cholinergic and histaminic receptor blockade and after, these receptor were stimulated witch aqueous extract of Boerhavia erecta L. The results show that aqueous extract of Boerhavia erecta L at the concentration range of 0.1-1 mg/ml don't exhibited anticholinergic activity and presented significant blocking of histamine induced contraction on guinea pig ileum in a dose-related manner.



Composición química de aceites esenciales de Minthostachys verticillata (Argentina) recolectadas en distintas épocas

Ybarra F.1, Oliva M.1, Daghero J.1, Zanon S.1, Sabini L1, Zygadlo J.2 y Demo M.1

1Departamento de Microbiología. e Inmunología. Fac. Cs. Ex. Fco-Qcas y Naturales. UNRC. Córdoba, Argentina
2Cátedra de Química Orgánica. UNC. Córdoba. Argentina
E-mail: mdemo@exa.unrc.edu.ar

Introducción:
La composición de aceites esenciales (AE) varían acorde a factores intrínsecos y extrínsecos. Dentro de los extrínsecos se destacan las condiciones climáticas (precipitaciones, luminosidad, altura) y distintos suelos (porcentaje de oligoelementos, pH, humedad). Dentro de los intrínsecos se encuentra la variabilidad genética de cada especie vegetal lo que define los llamados quimiotipos. El objetivo de este trabajo fue obtener AE de muestras de la especie Minthostachys verticillata recolectadas en diferentes épocas y la identificación y cuantificación de componentes químicos de las muestras oleosas.

Método:
El aceite esencial para cada muestra se obtuvo por hidrodestilación a partir de M. verticillata de Santa Rosa de Calamuchita (Córdoba Argentina) recolectada en los años 1999, 2001, 2002 y 2003, durante los meses de Febrero, Marzo, Abril, Mayo, Noviembre y Diciembre, por la mañana y por la tarde. Se identificaron los componentes mayoritarios del AE por cromatografía gaseosa, comparando los tiempos de retención de éstos con los de los componentes puros (drogas patrones) inyectados en las mismas condiciones. La cuantificación se realizó midiendo el área correspondiente a cada uno de los picos de la muestra sin utilizar factores de corrección.

Resultado:
El perfil cromatográfico fue similar en todas las muestra analizadas, identificándose -pineno, -pineno, limoneno, mentona y pulegona. El componente mayoritario en todos los casos resultó ser la pulegona, cuya proporción varió entre 46,23% y 69,72 %. Por otra parte, la proporción de mentona estuvo entre 14,59% y 32,78%. El -pineno y -pineno fueron los minoritarios de los 5 analizados (0,17%-1,25%). La proporción de pulegona + mentona estuvo en el rango de 70% a 88%, mientras que la razón mentona/pulegona estuvo en el rango de 1:1,59 a 1:4,10. El clima y el lugar de la recolección de la muestra vegetal influyeron cuantitativamente en la composición química del aceite esencial. En todos los AE analizados se mantuvo la composición química, variando la proporción de los componentes. por lo que se infiere que se trata de un único quimiotipo analizado. No existe correlación entre las proporciones de los compuestos mayoritarios individuales con los meses muestreados en diferentes años. Sin embargo la proporción de los compuestos oxigenados es alta en los meses de floración (Noviembre, Diciembre y Febrero) y más baja en época de fructificación (Marzo y Abril). Por otra parte, cuando se comparó la composición de muestras recolectadas en diferentes momentos del día, se observó que la proporción mentona+pulegona fue mas elevada por la mañana, y la razón mentona/pulegona fue mayor en las muestras recolectadas por la tarde. Esto podría deberse ya sea a un aumento en la proporción de pulegona o una disminución en la de mentona.

Conclusiones:
De los resultados obtenidos, se concluye que la proporción pulegona+mentona y la razón mentona/pulegona podría utilizarse como una herramienta para detectar tanto el estado fenológico del material de partida (fructificación o floración) como el momento del día en que fue recolectado.



Influencia de la época de recoleccción de Minthostachy verticillata (Argentina) sobre la actividad antimicrobiana de su aceite esencial

Ybarra F.1, Oliva M.1, Daghero J.1, Zanon S1., Sabini L.1, Zygadlo J.2 y Demo M.1

1Departamento de Microbiología. e Inmunología. Fac. Cs. Ex. Fco-Qcas y Naturales. UNRC. Córdoba, Argentina
2Cátedra de Química Orgánica. UNC. Córdoba. Argentina

E-mail: mdemo@exa.unrc.edu.ar

Introducción:
En los últimos años ha habido una revalorización de los productos naturales como fuente de sustancias de interés médico, veterinario, cosmético, agroquímico y alimenticio. En la actualidad, aproximadamente el 25% de las drogas que se lanzan al mercado provienen de una fuente vegetal Aceites esenciales (AE) y componentes puros (CP) extraídos de especies aromáticas son conocidos por su actividad sobre una gran variedad de microorganismos incluyendo bacterias Gram positiva, Gram negativa y hongos.El objetivo de este trabajo fue determinar la actividad antimicrobiana de las diferentes muestras de aceites esenciales de Minthostachys verticillata y sus componentes puros, sobre bacterias Gram positivas y Gram negativas, evaluando la Concentración Mínima Inhibitoria (CIM) y la Concentración Bactericida Mínima (CBM).

Método:
El aceite esencial de cada muestra se obtuvo por hidrodestilación, a partir de M. verticillata de Santa Rosa de Calamuchita (Córdoba Argentina) recolectadas en los años 1999, 2001, 2002 y 2003, durante los meses de Febrero, Marzo, Abril, Mayo, Noviembre y Diciembre. Se evaluó la actividad antimicrobiana sobre Staphylococcus aureus ATCC 25212, Bacilllus cereus (Arroz) y Escherichia coli (Agua de pozo) por la técnica de difusión en disco y también se determinó CIM y CBM de los AE y CP por la técnica de microdilución en caldo.

Resultado:
Por la Técnica de difusión en disco se observó que los aceites esenciales utilizados tuvieron actividad antimicrobiana sobre todos los microorganismos probados. Las bacterias Gram (+) resultaron ser mas sensibles ya que se produjeron halos de inhibición de mayor diámetro que las bacterias Gram (-). La actividad biológica varió dependiendo de la época de recolección, siendo el aceite con mejor actividad el recolectado en Abril 2001, época de fructificación. La pulegona fue el único de los componentes de M. verticillata que inhibió a los 3 microorganismos probados. El -pineno y limoneno fueron activos contra S. aureus y B. cereus pero no contra E. coli. La mentona no fue activo sobre ningún microorganismo probado.
Por la Técnica de microdilución, el aceite con mayor actividad antimicrobiana fue el de Abril de 2001 con una CIM de 56,25 g/ l para B. cereus y S. aureus y 225 g/ l para E. coli. Los aceites esenciales de M. verticillata resultaron ser bacteriostáticos. La pulegona fue más activa que el AE completo, dando los siguientes valores de CIM: 0,74 g/ l para S. aureus, 1,48 g/ l para B.cereus y 5,93 g/ l para E. coli, coincidiendo estos datos con la Concentración Bactericida Mínima. Estos resultados muestran que la pulegona es bactericida.

Conclusiones:
El AE de M. verticillata ejerce una acción bacteriostática y la pulegona es bactericida, por lo que se infiere que otros componentes tales como mentona y/o limoneno estarían interactuando antagónicamente para disminuir la actividad biológica de la pulegona y en consecuencia la del AE completo.


Inhibition of lps-induced no production by Alchornea glandulosa

Mascia F.C.1, Calvo T.R.2, Vilegas W.2 and Zeppone I.1

1Departamento de Análises Clínicas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade Estadual Paulista, Araraquara, São Paulo, Brasil
2Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista, Araraquara, São Paulo, Brasil.

E-mail: carlosiz@fcfar.unesp.br

Introduction:
Since medicine exists, the medicinal plants are present. Natural substances obtained from animals, vegetables and minerals have been the source of many known organic molecules. However, plants have contributed in a significant way to treatment of several diseases.The importance of the immunological system for the human survival, together to the high consumption of medicinal plants by population and the search for substances derived from plants by pharmaceutical industries motivate the development of chemical and biological strategies for the discovery of new active substances.

Methods:
The biological activities of nitric oxide (NO) are numerous and complex. NO depending of concentration protects against many bacterias and parasites, helps to fight several viral infections, and is implicated in the control of malignancies. On the other hand it might also promote tumor angiogenesis, metastasis, tissue destruction and several diseases. The aim of this work was the study of Alchornea glandulosa action in the immune system, especially the inhibitory activity of NO production in lipopolysaccharide (LPS)-activated macrophages. The viability of LPS-activated murine macrophages was evaluated by the MTT colorimetric technique using tetrazolium salt.

Results:
Phytochemical studies were also performed showing especially phenolic compounds. The methanolic extract from Alchornea glandulosa was found to exhibit inhibitory activity of NO production in LPS-activated macrophages ( 27% to 98%) depending to the concentration of the samples. Favorably, good viability levels were observed in the tested concentrations, always higher than 75% in most of the samples, allowing the development of all experiments.

Conclusion:
These results are very important since inhibitory agents that can decrease NO production are potentially useful in the treatment of several situations associated with the overproduction of this mediator, including septic shock, neurodegenerative disorders and inflammation.



Action of Davilla elliptica methanolic extract in the cellular immune response

Zeppone I.1, Mascia F.C.1, Benzatti F.P.1, de Andrade C.B.1, Faria M.1, Campaner L.1, Calvo T.R.2, Rinaldo D.2 and Vilegas W.2

1Departamento de Análises Clínicas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade Estadual Paulista, Araraquara, São Paulo, Brasil.
2Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista, Araraquara, São Paulo, Brasil
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E-mail: carlosiz@fcfar.unesp.br

Plants have contributed in a significant way to the treatment of most of the diseases. In the current days, about 25% of the medicines used in the industrialized countries are direct or indirectly, obtained from superior plants.
Considering the therapeutic importance of the medicinal plants, the immunological activity of the methanolic extract of Davilla elliptica was evaluated. The phytochemical study was also performed.
In every stage of the immune response macrophages are involved and they can release many compounds such as hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor-N (TNF-N). Macrophages stimulation was evaluated by the determination of H2O2, NO and TNF in peritoneal macrophages cultures of mice in the presence of the D. elliptica methanolic extract. In all tests were utilized IC50 determined by MTT assay.
In this study were found among others, flavonoids derivated from quercetin and mirecetin and tannins. The production of H2O2 wasn't very expressive, but the methanolic extract presented a significant effect on NO and TNF- production, releasing 28 mols of NO and 140 units of TNF. A relationship among the synthesis of NO and TNF- was observed. The increase of NO production is related with the induction of proinflammatory cytokines like TNF. Analysing the results, it is suggested that methanolic extract of D. elliptica can modulate macrophage activation.

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