ARTÍCULO ORIGINAL

 

Estandarización y tamizaje fitoquímico de extractos de frutos de Punica granatum L.

 

Standardization and phytochemical screening of extracts from Punica granatum L. fruits

 

Blanca del Rosario Peña NúñezI; Zulema Morejón RodríguezII; Ana Ibis García HernándezIII; Francisco Morón RodríguezIV

I Doctora en Ciencias de la Salud. Máster en Ciencias en Microbiología. Laboratorio Central de Farmacología. Facultad de Ciencias Médicas "Dr. Salvador Allende".
II Licenciada en Química. Laboratorio Central de Farmacología. Facultad de Ciencias Médicas "Dr. Salvador Allende".
III Especialista de I Grado en Farmacología. Investigadora Aspirante. Laboratorio Central de Farmacología. Facultad de Ciencias Médicas "Dr. Salvador Allende".
IV Doctor en Ciencias Médicas. Profesor Titular de Farmacología. Laboratorio Central de Farmacología. Facultad de Ciencias Médicas "Dr. Salvador Allende".

 

 


RESUMEN

INTRODUCCIÓN: Punica granatum L. es una especie vegetal que en Cuba se conoce como granada; su fruto es rico en vitamina C, antocianinas, tiamina y riboflavina, presenta otros componentes químicos que le atribuyen importantes propiedades biológicas para el tratamiento de enfermedades tumorales, y es utilizada además en medicina tradicional por sus propiedades antiparasitaria, antiinflamatoria y anticatarral.
OBJETIVOS
: identificar los componentes químicos de extractos preparados a partir de frutos completos maduros congelados de Punica granatum L.
MÉTODOS
: el fruto maduro total fresco congelado a - 20 oC de granada fue el material vegetal del que se obtuvo y estandarizaron los diferentes extractos a partir de una extracción hidroalcohólica 50 %, se determinaron los parámetros físico-químicos de control de calidad y se realizó el tamizaje fitoquímico.
RESULTADOS: en el control de la calidad del material vegetal se obtuvo la pureza de la droga; en la estandarización de los diferentes extractos sus propiedades físicas fueron similares y en el tamizaje fitoquímico, el extracto hidroalcohólico presentó alcaloides, que no se encontraron en los otros; en ninguno se detectó la presencia de glucósidos cardiotónicos y sí de flavonoides y taninos.
CONCLUSIONES
: los extractos acuosos y el liofilizado presentan flavonoides, taninos, antocianidinas, carbohidratos, cumarinas, saponinas, mucílagos, aminoácidos, quinonas, así como principios amargos y astringentes, y no presentan glucósidos cardiotónicos y alcaloides que pudieran aumentar el potencial tóxico y los efectos no deseados.

Palabras clave: Punica granatum , estandarización, tamizaje fitoquímico.


ABSTRACT

INTRODUCTION: Punica granatum L. is a species that is known in Cuba as grenade, its fruit is rich in C vitamic, antocyanins, thyamine and riboflavine; it also has other chemical compounds that give them important biological properties for the treatment of tumoral diseases and is also used in the traditional herb medicine because of its antiparasitic, antinflammatory and antiflu properties.
OBJECTIVES
: to identify the chemical components of extracts from frozen ripe fruits of Punica granatum L.
METHODS
: the total ripe fruit frozen at -20 oC of grenade was the vegetal material from which the different extracts were obtained and standardized from several extracts from 50% hydroalcohol extraction. The physical and chemical parameters of quality control were estimated and the phytocemical screening was conducted.
RESULTS
: in the quality control applied to the vegetal material; the purity of the drug was reached. In the standardization of different extracts, their physical properties were similar and in the phytochemical screening, the hydroalcohol extract presented alkaloids that were absent in the others; cardiotonic glycosides were undetected but flavonoids and tannins were present.
CONCLUSIONS
: water and lyophilized extracts had flavonoids, tannins, antocyanidins, carbohydrates, coumarins, saponins, mucilages, aminoacids, quinones, as well as astringent principles but did not have cardiotonic glycosides and alkaloids that may increase toxic potential and unwanted effects.

Key words: Punica granatum, standardization, phytochemical screening.


 

 

INTRODUCCIÓN

Punica granatum L. es una especie vegetal que pertenece a la familia Punicaceae.1 En Cuba, se conoce como granada. Esta planta es cultivada en las regiones tropicales y subtropicales de todo el mundo. Es utilizada en la medicina tradicional por los pueblos de varios continentes por causa de sus propiedades antiparasitaria, antiinflamatoria, anticatarral.1-3 El fruto es globoso de 6 a 14 cm. Las semillas están cubiertas por un anillo rojo, jugoso y dulce. Es rico en vitamina C, antocianinas, tiamina y riboflavina.3 Su almacenamiento prolongado conduce a la disminución de los 2 primeros compuestos y sus cambios de color. La corteza contiene ácido elágico y ácido gálico en 0,55 y 0,09 %, respectivamente. Cuando se analiza el fruto entero se refiere la presencia de componentes químicos como elagitaninos, punicalagin y los taninos, que son compuestos polifenólicos con acción astringente, antimicrobiana, antifúngica, e inhibitoria enzimática, y como antídoto de alcaloides y metales pesados.4 Se les atribuyen importantes propiedades biológicas para el tratamiento de enfermedades tumorales.5 En otros estudios se demuestra actividad antiinfluenza de un extracto liofilizado preparado con el fruto de esta planta.6 A partir de estos antecedentes, el objetivo del presente trabajo fue identificar los componentes químicos de extractos preparados a partir del fruto de P. granatum.

 

MÉTODOS

Material vegetal

Los frutos maduros de Punica granatum L. (granada) fueron colectados a partir de plantas en estado adulto en el municipio San Antonio de los Baños, provincia de La Habana, en los meses de julio y agosto correspondientes a los años en que se realizó la investigación; una muestra de esta especie vegetal radica en el herbario del Jardín Botánico Nacional (HAJB 40619). Los frutos se conservaron congelados a - 20 oC hasta su procesamiento en la preparación del extracto liofilizado.

Obtención y estandarización de los extractos

Los frutos completos maduros congelados de granada se cortaron en pequeños fragmentos, los cuales mezclados constituyeron el material vegetal con el que se preparó mediante un procedimiento estandarizado, el extracto hidroalcohólico 50 % que posteriormente se sometió al proceso de rotoevaporación (extracto blando) y de liofilización.7,8 La marcha experimental fue:

1 500 g de frutos cortados — Macerar en etanol + agua bidestilada — Filtrar g Dejar en reposo — Decantar y rotoevaporar — Liofilizar — Conservar el extracto acuoso (blando) a temperatura ambiente 24 ± 1 °C o 0 ± 1 °C y el liofilizado a 0 °C.

El rendimiento del extracto liofilizado fue 10 % de sólidos totales.

Se determinaron los parámetros físico-químicos de control de calidad, según la Norma Ramal Cubana (NRSP-312 1992)9 para extractos vegetales, así como las propiedades organolépticas (olor y color), pH, índice de refracción, densidad relativa y contenido de sólidos totales.

El tamizaje fitoquímico del extracto hidroalcohólico 50 %, a su residuo rotoevaporado y al liofilizado obtenidos incluyó: alcaloides (Draggendorf y Mayer); coumarinas (Baljet); quinonas (Borntrager); flavonoides (Shinoda); saponinas (espuma); azúcares reductores (Fehling); antocianidinas (Rosemhein); compuestos fenólicos o taninos, o ambos, (cloruro férrico); aminoácidos (ninhidrina); glucósidos cardiotónicos; (Kedde) realizados según lo establecido en la Guía Metodológica para Investigaciones Fitoquímicas en Plantas Medicinales.10 Se realizaron los mismos ensayos a los 2 extractos acuosos que al extracto hidroalcohólico, excepto las pruebas de Baljet, Borntrager, ninhidrina y Kedde; se incluyeron los ensayos para: mucílagos, sabor (principios amargos y astringentes) y glucósidos (Molish).

 

RESULTADOS

En la tabla 1 se muestran los resultados de los análisis preliminares para controlar la calidad de los frutos maduros enteros congelados, que fue la materia prima vegetal, empleados para preparar el extracto hidroalcohólico 50 %.

Los extractos obtenidos a partir de los frutos de la granada fueron analizados comparativamente con el objetivo de establecer posibles diferencias químicas y físicas entre ellos. Estos resultados se muestran en las tablas 2 y 3.

 

DISCUSIÓN

En el análisis del control de la calidad, el contenido de humedad residual del fruto de P. granatum (granada) es relativamente alto porque los frutos fueron conservados congelados hasta el momento del estudio, no se sometieron previamente a ningún proceso de desecación. La determinación de este parámetro es esencial, pues el alto contenido de agua en la materia prima a utilizar en la preparación de un extracto puede favorecer la proliferación de microorganismos que provoquen la descomposición del material de partida, con su consecuente modificación química y bioquímica, lo que podría influir en la calidad del producto final.11 En el presente estudio, la congelación inmediata a - 20 ºC del material de partida evitó estos inconvenientes y facilitó los trabajos previos al momento de preparación de los extractos. Los valores obtenidos para las cenizas totales y las solu
bles fueron muy similares, lo que permitió deducir la identidad y pureza del material vegetal utilizado para preparar los extractos. En relación con el contenido de cenizas insolubles en ácido clorhídrico, su valor relativamente elevado permitió confirmar una vez más la pureza de la droga. Estos valores encontrados con la granada son similares a los referidos para otras especies oficiales que brinda la norma ramal cubana (NRSP-312 1992).9 Existieron solo ligeras diferencias en las propiedades físicas de los extractos, incluso para aquellos que fueron mantenidos a temperaturas de almacenamiento diferentes; el pH resultó ligeramente ácido, pero estable en los extractos acuosos. Esta estabilidad en sus propiedades es útil para investigaciones farmacológicas posteriores.

Estudios científicos de extractos preparados con diferentes partes de la granada, y en particular su fruto, brindan datos acerca de diferentes compuestos químicos presentes en ella, como son los taninos que coinciden con los resultados del tamizaje realizado en este trabajo (Hozumi T, Matsumoto T, Ooyama H, Namba T, Shirahi K. Antiviral agent containing crude drog. Japón, PN: JP 5411733).12 Estos son compuestos polifenólicos que desempeñan acciones defensivas en las plantas frente a los insectos y tienen acción astringente, antimicrobiana, antifúngica, e inhibitoria enzimática.4

Como se demostró, el extracto liofilizado tiene una composición química similar a los extractos acuosos que le dieron origen. El extracto hidroalcohólico presenta alcaloides, que no fueron detectados en los ensayos realizados a los extractos acuosos, resultado favorable para el extracto liofilizado, porque según diversos autores, los alcaloides le confieren toxicidad a los preparados hechos a partir de granada.8 A la granada se le ha referido la presencia de alcaloides en la corteza y en la raíz de la planta, no obstante, se refiere que estos compuestos químicos pueden migrar durante la floración y la fructificación, lo que justifica su presencia cuando se identifican los metabolitos secundarios en la planta, aún cuando en el caso de los alcaloides su presencia disminuye durante el proceso de maduración del fruto.13 La presencia de flavonoides en los diferentes extractos fue muy similar. Estos compuestos resultan de gran interés por su acción antiviral.14

Los resultados del presente trabajo permiten concluir que los extractos acuosos y el liofilizado presentan flavonoides, taninos, antocianidinas, carbohidratos, cumarinas, saponinas, mucílagos, aminoácidos, quinonas, así como principios amargos y astringentes y no presentan glucósidos cardiotónicos y alcaloides, que aumentarían el potencial tóxico y los efectos colaterales no deseados.

 

 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Roig JT. Granado. En: Plantas medicinales, aromáticas o venenosas de Cuba. 2da ed. La Habana: Editorial Científico-Técnica; 1988. p. 456-8.

2. TRAMIL. Punica granatum. Hacia una farmacopea caribeña. 7 ed. Santo Domingo: U A G & Universidad de Antioquia;, 1995. p. 526-8.

3. Vanaclocha B, Cañigueral S, Vila R, Risco E, Pérez F, Portillo A, et al. Ulmaria. Monografías de Plantas Medicinales. En: Vanaclocha B, Cañigueral S, editores. Fitoterapia. Vademécum de Prescripción. 4ª ed. Barcelona: MASSON, S.A.; 2003. p. 487-8.

4. Martínez A. Flavonoides. Tesina. Facultad de Química Farmacéutica, Colombia: Universidad de Antioquia; 2005.

5. Adams LS, Seeram NP, Aggarwal BB, Takada Y. Sand D, Heber D. Pomegranate juice total pomegranate ellagitannins, and punicalagin suppress inflammatory cell signalling in colon cancer. J Agric Food Chem. 2006;54(3):980-5.

6. Peña B. Actividad inhibitoria de extractos del fruto de Punica granatum L. frente a cepas del virus de la gripe. Rev Cubana Química. 2001;13(2):106-8.

7. Iglesias J. Fraccionamiento fitoquímico del BLBu con actividad antiviral [Tesis de Diploma]. Facultad de Biología, Universidad de La Habana; 1990.

8. Vidal A, Fallarero A, Peña BR, Medina ME, Gra B, Rivera F, et al. Studies on the toxicity of Punica granatum L. (Punicaceae) whole fruits extracts. J Ethnopharmacol. 2003;89(2-3):295-300.

9. Ministerio de Salud Pública de Cuba. NRSP No. 312. Medicamentos de origen vegetal: extractos fluidos y tinturas. Métodos de ensayos. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 1992.

10. Ministerio de Salud Pública de Cuba. Guía Metodológica para Investigaciones Fitoquímicas en Plantas Medicinales. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 1991.

11. Pendas J, Moreira T, Guerra O, Peña B, Fernandez J. Water relationship in Phyllantus orbicularis and Punica granatum L. antiviral extracts and their influence on stability after freezing and freeze-dying. Cryoletters. 2001;22(1):5-12.

12. Zhang J, Zhan B, Yao X, Gao Y, Shong. Antiviral activity of tanin from the pericarp of Punicam granatum L. against Herpes genital virus "in vitro". Chung-Kuo-Chung-Yao Tsa Chih. 1995;20(9):556-8.

13. Cuellar A. Alcaloides. En: Química de los Fármacos Naturales. La Habana: Editorial EMPES; 1983. p. 253-69.

14. Ogbeide ON, Parvez M. A simple colorimetric quantification of flavonoids in the flowers of Lonchocarpus cyanescens genus: Lonchocarpus. Plant Foods Hum Nutr. 1991;41(3):233-9.

 

 

Recibido: 8 de agosto de 2008.
Aprobado: 13 de octubre de 2008.

 

 

Dra. Blanca del Rosario Peña Núñez. Facultad de Ciencias Médicas "Dr. Salvador Allende", Carvajal s/n entre Agua Dulce y A, Cerro. Ciudad de La Habana, Cuba. CP 12000. Correo electrónico: charitorp@infomed.sld.cu